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 利用CRISPR/Cas9 技术建立斑马鱼Asb11基因敲除品系

尹丽阳 罗世锋 陈宇 漆轲婧 彭云 万永奇 吴秀山 李永青

[摘要]Asb11基因被报道与斑马鱼Notch信号的激活有关,本研究室过去的研究显示该基因在心肌和骨骼肌中特异性表达。因此推测Asb11基因可能是心脏发育相关候选基因。为了阐明Asb11基因在斑马鱼心脏发育过程中的作用,本文利用CR...

 PDF全文激光生物学报 | 2018, 27(03):252

 利用DNA免疫技术制备ASB11蛋白的多克隆抗体

蔡英桂 尹丽阳 王宏波 陈宇 曾蓉 吴秀山 叶湘漓

[摘要]ASB11参与胚胎神经祖细胞的发育、再生性肌发生以及泛素化等过程,但其机制仍不清楚。为了进一步研究斑马鱼Asb11基因的作用机制,本研究采用DNA免疫技术制备了ASB11多克隆抗体;利用斑马鱼Asb11的cDNA构建pCAGGS-P7/ASB...

 PDF全文激光生物学报 | 2018, 27(03):260

 利用DNA免疫技术制备GATA1蛋白多克隆抗体

郭 芬 曹灵慧 陈宇霖 欧柏青 吴秀山

[摘要]转录因子GATA1对正常红系细胞的分化起着关键作用, 其缺失导致原成红细胞的凋亡, 其过表达则能抑制红系细胞晚期的分化。本研究为了进一步利用斑马鱼研究gata1基因在血液血管发育过程中的功能, 通过反转录PCR(RT-PCR)扩...

 PDF全文激光生物学报 | 2018, 27(02):161

 斑马鱼心脏发育候选基因Titin-Cap的CRISPR/Cas9打靶有效性分析

袁月亲 罗世锋 颜尔聪 尹丽阳 漆轲婧 彭亚欣 万永奇 吴秀山 李永青

[摘要]CRISPR/Cas9基因打靶技术是近几年发展起来的一种高效率的定向打靶技术, 被认为是遗传领域的革命性技术。Titin-Cap基因是本实验室已初步鉴定的斑马鱼心脏发育候选基因, 且国内外目前尚无斑马鱼Titin-Cap基因的敲除品系...

 PDF全文激光生物学报 | 2017, 26(05):458

 斑马鱼心脏发育候选基因Klhl31的TALEN打靶有效性分析

蔡湾湾 陈 发 万永奇 吴秀山 邓 云 袁婺洲

[摘要]TALEN(transcription activator-like effector nuclease)打靶是一种定向敲除基因技术, 利用该技术能解决目前在斑马鱼体内难以进行基因敲除的难题。Klhl31是本实验室鉴定的人类心脏发育候选基因, 且目前国内外尚无斑马...

 PDF全文激光生物学报 | 2016, 25(06):546

 针对Fbxl5基因关键结构域F-box的Crispr/Cas9打靶有效性分析

高 晶 邓 云 陈 宇 高建芳 傅雪珂 尹丽阳 万永奇 吴秀山 李永青

[摘要]为了在动物体内研究Fbxl5基因是通过什么机制导致斑马鱼心脏出现突变表型, 本文利用近几年兴起的CRISPR/Cas9打靶技术建立斑马鱼Fbxl5基因敲除品系。本文将打靶位点定位于Fbxl5的F-box结构域, 也就是Fbxl5的第五号外显...

 PDF全文激光生物学报 | 2016, 25(06):559

 RMND5B基因的克隆及其腺病毒载体的构建

张仕超 陈 宇 尹丽阳 刘文邦 崔俊毅 蔡英桂 朱 旋 陈 辉 吴秀山 范雄伟 王跃群

[摘要]已有研究表明RMND5B可能与心肌肥大相关, 但具体机制不明, RMND5B的重组腺病毒载体的构建和鉴定为研究RMND5B功能提供了基础工具。首先, 设计小鼠RMND5B基因的特异性引物, 以cDNA为模板, PCR扩增RMND5B ORF区, 并在两端...

 PDF全文激光生物学报 | 2016, 25(04):349

 可诱导表达Mesp1的慢病毒载体构建及P19细胞稳定表达系的建立

宋文 高建芳 陈辉 邓云 李永青 袁婺洲 吴秀山 戴国 王跃群

[摘要]Mesp1属于bHLH转录因子家族, 对早期心脏中胚层的形成十分重要。为研究Mesp1在心脏发育过程中的功能, 本文构建了可诱导表达Mesp1的慢病毒载体, 转染进P19细胞, 经嘌呤霉素筛选并扩大培养后, 成功建立起经强力霉素诱导...

 PDF全文激光生物学报 | 2014, 23(04):351

 小鼠LRRC10腺病毒载体构建及其在心肌细胞中的表达

周作琼 彭夕洋 肖丽娜 李佑锋 彭浩 吴秀山 范雄伟 李永青

[摘要]目的:构建含有小鼠Lrrc10 (Leucine-rich Repeat Containing protein 10)基因的重组腺病毒表达载体。方法:设计小鼠Lrrc10特异性引物, 以小鼠cDNA为模板, 通过PCR扩增出mLrrc10的编码区, 并引入HA标签蛋白和Sal Ι酶切...

 PDF全文激光生物学报 | 2014, 23(03):246

 利用TALEN打靶技术建立果蝇心脏发育候选基因Yippee突变品系

蔡哲彦 万永奇 唐旻 曾群 朱莎莎 廖四芳 吴秀山 袁婺洲

[摘要]研究工作者们一直致力于寻找一种在模式生物中进行精确基因修饰的方法。近期基于TALENs的基因打靶方法受到广泛的注意, 并在包括果蝇、斑马鱼、小鼠及人类多潜能细胞的多物种中取得成功。在这里, 我主要介绍基于TALENs...

 PDF全文激光生物学报 | 2013, 22(04):348

 斑马鱼Fbxl5基因多克隆抗体的制备与检测

盛力翔 冯德峰 罗世锋 吴秀山 戴国 莫小阳

[摘要]Fbxl5为F-box基因家族的一员, 目前研究发现其与心脏的发育有关。为了在斑马鱼模型中进一步研究该基因的功能, 有必要制备其多克隆抗体。通过桥式PCR扩增出亲水性和特异性均好的斑马鱼Fbxl5基因片段, 将其克隆入表达载...

 PDF全文激光生物学报 | 2013, 22(03):249

 抗果蝇MRJ蛋白单克隆抗体的制备和鉴定

廖四芳 刘丹 宋文 刘明 赵阳 唐超 吴秀山 王跃群

[摘要]制备抗果蝇MRJ蛋白单克隆抗体可用于研究果蝇mrj的生物学功能, 使用IPTG诱导重组质粒pET28a-mrj在大肠杆菌Rosetta中表达, 重组蛋白经过Ni-IDA凝胶柱亲和纯化后免疫BALB/c小鼠。然后取免疫好的小鼠的脾脏细胞与小鼠骨髓...

 PDF全文激光生物学报 | 2013, 22(02):154

 心脏发育候选基因PYGO1 RNAi逆转录病毒载体系统的构建与鉴定

刘明 刘宪楚 周军媚 谢华平 廖四芳 宋文 李佑锋 吴秀山 王跃群

[摘要]利用RNA干扰技术构建PYGO1基因RNA干扰(RNAi)的真核表达质粒(pSUPER -PYGO1)。首先, 针对 PYGO1 cDNA序列设计并化学合成一对编码短发夹RNA序列, 经退火插入到由BglⅡ 和XhoⅠ酶切的pSUPER 质粒上构建重组RNAi质粒pSUP...

 PDF全文激光生物学报 | 2012, 21(06):528

 人类成肌发育候选基因ASB12 RNAi稳定细胞系的构建与鉴定

文斗斗 周军媚 廖四芳 宋文 胡维新 吴秀山 王跃群

[摘要]目的: 利用siRNA 表达载体构建抑制人类成肌发育候选基因ASB12表达的pSUPER RNAi 载体(pSUPER-ASB12), 筛选构建C2C12-pSUPER-ASB12稳定表达细胞系。方法: 化学合成一对编码短发夹RNA序列的、靶向成肌发育候选基因ASB1...

 PDF全文激光生物学报 | 2012, 21(04):335

 果蝇心脏发育标记基因Kruppel的多克隆抗体制备

黄婷 雷旻音 朱玲 刘腾 江志钢 吴秀山 邓云

[摘要]Kruppel在果蝇发育过程中起着重要的调控作用。为了进一步研究Kruppel的功能, 需要制备Kruppel蛋白及其抗体.对已有的Kruppel序列进行分析, 选取适当区域进行引物设计, 从果蝇心脏cDNA文库中PCR扩增得到Kruppel部分编码...

 PDF全文激光生物学报 | 2012, 21(03):252

 果蝇心脏发育标记基因lbe的多克隆抗体制备

徐腊梅 朱玲 刘腾 吴秀山 邓云 袁婺洲

[摘要]lbe是已经证明的心脏标记基因。为了深入研究lbe在心脏发育中的功能, 需要获得lbe蛋白并制备其抗体。首先提取野生型成体果蝇的总RNA, 反转录获得其cDNA文库, 通过PCR克隆出lbe编码区序列, 将其连接到pET-28a原核表达载...

 PDF全文激光生物学报 | 2012, 21(02):162

 斑马鱼基因ATF4多克隆抗体的制备

李发祥 杨荣 陈婷芳 唐雄卓 赵碧峰 江志钢 张义 李永青 吴秀山

[摘要]ATF4是含有bZIP结构域的ATF/CREB转录因子家族成员, 对胚胎的发育以及细胞的增殖、分化有重要的调节作用。制备ATF4的多克隆抗体对于研究其在斑马鱼心脏发育过程中的作用有重要的意义。研究首先通过生物信息学方法, 选...

 PDF全文激光生物学报 | 2012, 21(01):56

 果蝇心脏发育标记基因Hand多克隆抗体的制备

刘腾 徐腊梅 江志钢 袁婺洲 吴秀山

[摘要]制备果蝇心脏标记基因Hand抗体对研究果蝇心脏发育具有重要意义。从果蝇体内提取出总RNA, 反转录得到果蝇的cDNA, 将其作为模板PCR得到Hand基因部分片段, 将片段连接到pET-28a上, 构建重组质粒pET-28a-Hand, 将重组质粒...

 PDF全文激光生物学报 | 2012, 21(01):52

 果蝇odd蛋白的原核表达及多克隆抗体的制备研究

张 义 叶湘漓 鲁建鑫 彭佩莹 赵 阳 江志钢 李发祥 王跃群 袁婺洲 吴秀山 邓 云

[摘要]odd是一个新发现的心脏特异表达基因。为了进一步研究odd在心脏发育中的功能, 根据已报道的odd基因序列, 以果蝇cDNA文库为模板进行PCR扩增, 将所得的odd部分编码区序列连接到pET-28a载体上构建原核表达载体; 重组子经...

 PDF全文激光生物学报 | 2011, 20(06):778

 人类新基因Bzw2的克隆、抗体制备及表达分析

姚力群 李 志 江志钢 万永奇 吴秀山 袁婺州

[摘要]Bzw2(basic leucine zipper and W2 domains 2)基因是人类心脏发育候选基因, 它由bzip结构域和W2结构域构成。为了研究该基因在心脏发育过程中的作用, 利用生物信息学信息克隆了人类Bzw2基因全长, 将所得的片段插入到原...

 PDF全文激光生物学报 | 2011, 20(06):798

 Smyd1干扰真核表达质粒及其稳定转染H9c2细胞系的构建

李 帆 廖四芳 刘华友 鲁建鑫 刘宪楚 刘 明 吴秀山 李永青

[摘要]运用RNA干扰技术(RNA interference RNAi)构建pSUPER.retro-Smyd1真核表达质粒, 经鉴定后用脂质体法转染H9c2细胞, 通过G418筛选出稳定表达pSUPER.retro-Smyd1的细胞系, 最后经Western blot及RT-PCR实验鉴定其干扰效果...

 PDF全文激光生物学报 | 2011, 20(05):657

 Smyd1干扰真核表达质粒及其稳定转染H9c2细胞系的构建

李 帆 廖四芳 刘华友 鲁建鑫 刘宪楚 刘 明 吴秀山 李永青

[摘要]运用RNA干扰技术(RNA interference RNAi)构建pSUPER.retro-Smyd1真核表达质粒, 经鉴定后用脂质体法转染H9c2细胞, 通过G418筛选出稳定表达pSUPER.retro-Smyd1的细胞系, 最后经Western blot及RT-PCR实验鉴定其干扰效果...

 PDF全文激光生物学报 | 2011, 20(05):657

 斑马鱼ANF基因的克隆及多克隆抗体的制备

李竞超 吴 坚 梁 艳 莫小阳 吴秀山

[摘要]心房钠尿肽ANF是钠尿肽家族中的一员, 是心肌细胞分泌的一种循环激素, 主要在心房组织分泌。生物信息学分析表明, 斑马鱼ANF基因开放阅读框全长321 bp, 编码106个氨基酸, PCR扩增获得斑马鱼ANF基因全长。将所得的PCR片...

 PDF全文激光生物学报 | 2011, 20(05):645

 斑马鱼ANF基因的克隆及多克隆抗体的制备

李竞超 吴 坚 梁 艳 莫小阳 吴秀山

[摘要]心房钠尿肽ANF是钠尿肽家族中的一员, 是心肌细胞分泌的一种循环激素, 主要在心房组织分泌。生物信息学分析表明, 斑马鱼ANF基因开放阅读框全长321 bp, 编码106个氨基酸, PCR扩增获得斑马鱼ANF基因全长。将所得的PCR片...

 PDF全文激光生物学报 | 2011, 20(05):645

 稳定过表达人KLHL31基因的H9c2细胞系的建立及鉴定

周军媚 叶湘漓 廖四芳 刘 明 吴秀山 王跃群

[摘要]人类KLHL31基因是本实验室已克隆的基因, 其蛋白质含有保守的BTB和串连重复的Kelch结构域, 实验表明人类KLHL31在成体骨骼肌和心肌组织中特异表达, KLHL31蛋白的过表达可以抑制了AP-1与SRE的活性。本文拟利用阳离子聚合...

 PDF全文激光生物学报 | 2011, 20(05):681

 斑马鱼Foxp4基因多克隆抗体的制备及检测

刘华友 朱 玲 李 帆 王 琨 江志钢 吴秀山 李永青

[摘要]Foxp4为Fox基因家族的一员, 目前研究发现其与肺、肠、心脏以及中枢神经系统的发育有关。为了在斑马鱼模型中进一步研究该基因的功能, 有必要制备其多克隆抗体。按照巢式PCR原理, 经过两次PCR扩增出亲水性和特异性均好...

 PDF全文激光生物学报 | 2011, 20(04):556

 CXXC5多克隆抗体的制备及表达研究

王西君 廖 鹏 王跃群 邓 云 莫小阳 袁婺洲 万永奇 吴秀山 李永青

[摘要]CXXC5基因是从人类胚胎心脏的cDNA文库中克隆出来的一个人类锌指基因, 包含zf-CXXC5结构域, 该基因编码322个氨基酸, 在物种进化上高度保守。为了进一步研究该基因的功能, 需要获得CXXC5蛋白并制备其抗体.通过PCR扩增方...

 PDF全文激光生物学报 | 2011, 20(03):334

 斑马鱼charon基因的克隆、抗体制备及分析

吴 坚 王 玲 戴 悦 吴秀山 王跃群

[摘要]斑马鱼charon基因位于1号染色体上, 其成熟肽编码区含有731 bp, 编码243个氨基酸。charon基因编码Cerberus/Dan家族的一种分泌因子, 它与心脏的左右不对称发育有关。为进一步研究charon在心脏左右不对称发育中的功能, ...

 PDF全文激光生物学报 | 2011, 20(03):347

 Nodal蛋白的表达、纯化及多克隆抗体制备

宋怀婷 梁 洁 莫小阳 邓 云 万永奇 李永青 袁婺洲 江志钢 吴秀山 王跃群

[摘要]斑马鱼心脏发育模型中Nodal编码转录因子调节心脏的左右不对称发育, 为了进一步研究Nodal信号途径在心脏发育中的调控作用和心脏疾病发生的分子机制, 需要获得斑马鱼Nodal蛋白并制备其抗体。采用从斑马鱼心脏组织中提取...

 PDF全文激光生物学报 | 2010, 19(06):813

 myh6蛋白的表达、纯化及多克隆抗体制备

宋怀婷 李竞超 吴秀山 袁婺洲

[摘要]斑马鱼心脏发育模型中, myh6编码是一种促进心室心肌细胞扩张的转录因子。为了进一步研究myh6在心脏发育和心脏疾病发生中的功能, 需要获得斑马鱼myh6蛋白并制备其抗体。从斑马鱼心脏组织中提取总RNA,通过反转录得到心...

 PDF全文激光生物学报 | 2010, 19(05):644

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