斑马鱼行为学研究已受到越来越多的关注，其空间坐标计算是斑马鱼行为分析的基础。本文设计了一种基于双目立体视觉技术的斑马鱼行为学自动观测装置。结合p 率阈值化和模式阈值化，提出了图像阈值算法。计算斑马鱼图像轮廓像素坐标的平均值，得到单条斑马鱼的水平二维坐标X 和Y。当不同斑马鱼的Y 坐标差异较大时，对两台摄像机各自得到的斑马鱼的Y 坐标分别按大小排序，同一序号即为同一目标；当Y 坐标大小较为接近时，应用最小距离法识别同一斑马鱼。根据折射定理和观测装置结构，推导出斑马鱼三维空间坐标计算公式。算法复杂度分析显示本文提出的算法具有较少的运行时间。通过预设多条模型鱼的位置进行测试，计算结果与预设位置接近，验证了本文提出算法的正确性。