郭俣 1,2,*刘长青 1,3陆涛峰 1包阿东 1[ ... ]马月辉 1
作者单位
摘要
1 中国农业科学院北京畜牧兽医研究所, 北京 100193
2 蚌埠医学院检验系, 安徽 蚌埠 233030
3 蚌埠医学院生物科学系, 安徽 蚌埠 233030
提取北京油鸡8种组织的总RNA, 利用RT-PCR检测purH基因mRNA的差异表达。将purH基因完整开放阅读框定向插入pEGFP-N3, 构建带有GFP报告基因重组表达载体pEGFP-purH, 利用脂质体介导法将其导入北京油鸡体外培养细胞中, 进行G418药物筛选和克隆化培养。结果表明: 北京油鸡purH基因(GenBank 登录号: EU334506) 编码区为1 782 bp, 编码593 aa的多肽, 转染后24 h、48 h和72 h, pEGFP-purH转染率在10.3 %~53.2 %之间, 绿色荧光均匀分布于细胞质与细胞核中, 随表达量的增加, 绿色荧光在细胞核中聚集成团块状或颗粒状。经药物筛选和克隆化培养, 获得表达pEGFP-purH融合蛋白的克隆细胞株, RT-PCR与Western blotting检测确认pEGFP-purH已整合到北京油鸡成纤维细胞基因组中, 在优化的条件下, 阳性细胞凋亡率、生长与增殖状况与对照组比较差异不显著(P>0.05)。
北京油鸡 purH基因 荧光蛋白 成纤维细胞 基因表达 Beijing fatty chicken purH gene fluorescent protein fibroblast cell gene expression 
激光生物学报
2010, 19(3): 339

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