湖南大学生物学院植物基因组学与发育调控湖南省重点实验室, 湖南 长沙410082
赤霉素(gibberellin, GA)在植物生长发育的各个时期发挥重要作用。GA20-氧化酶(Gibberellin20-oxidase, GA20ox)是赤霉素生物合成途径中关键的限速酶, 因此研究调控GA20ox基因表达的转录因子对进一步阐述赤霉素生物合成及其调控具有重要意义。本研究通过酵母单杂交技术利用AtGA20ox1启动子筛选拟南芥转录因子库, 筛选获得转录因子RAP2.4f; 酵母单杂交和 X-gal显色结果进一步证实RAP2.4能与AtGA20ox1启动子结合; CPRG定量分析发现RAP2.4f与AtGA20ox1启动子结合作用强; 双荧光素酶检测结果显示RAP2.4f对AtGA20ox1的启动子活性具有抑制作用。这些研究结果表明, RAP2.4f可能参与调控AtGA20ox1的转录。
赤霉素 酵母单杂交 gibberellin AtGA20ox1 AtGA20ox1 RAP2.4f RAP2.4f yeast one hybrid
1 电子科技大学生命科学与技术学院, 四川 成都 610054
2 四川农业大学植物遗传育种省级重点实验室, 四川 雅安 625014
在采用亲和层析、 SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDS-PAGE)对原核表达的赤霉酸诱导的富含半胱氨酸蛋白(Trx-GcGASA)进行纯化、 鉴定的基础上, 运用稳态荧光光谱手段研究了二硫苏糖醇(DTT)、 氧化型谷胱甘肽(GSSG)、 过氧化氢、 盐酸胍(GdnHCl)对Trx-GcGASA内源荧光及变性过程的影响, 发现(1)在中性缓冲体系中融合蛋白的内源荧光以305 nm的酪氨酸的荧光发射为主；(2)伴随着二硫键还原, 融合蛋白中色氨酸和酪氨酸的相对荧光强度比值从0.7变化至1.8倍左右；(3)经过0.5 mmol?L-1 GSSG、 5 mmol?L-1过氧化氢处理后, 酪氨酸和色氨酸的荧光强度下降约12～21%；(4)无论是否采用1 mmol?L-1 DTT处理, 6 mol?L-1盐酸胍均不能诱导融合蛋白彻底变性；(5)二硫键的存在与否影响了盐酸胍诱导的变性过程。 通过两态模型拟合获得Trx-GcGASA变性过程Gibbs自由能变化ΔG约为3.7 kJ?mol－1。 相关工作不仅为深入研究融合伴侣Trx对GcGASA变性热力学、 动力学及复性过程影响奠定了基础； 同时, 也为通过光谱手段获取GcGASA的结构信息提供了基础的数据。
赤雷酸诱导的富含半胱氨酸蛋白 内源荧光 二硫键 变性 Gibberellin-induced cysteine-rich protein Intrinsic fluorescence Disulphide bonds Denaturation
China Pharmaceutical University, Nanjiang 210009, China
Chinese Journal of Lasers B
1999, 8(6): 562
