作者单位
摘要
1 湖南师范大学省部共建淡水鱼类发育生物学国家重点实验室, 心脏发育研究中心, 湖南 长沙 410081
2 湖南省人民医院老年科, 湖南 长沙 410007
Wnt16属于非经典wnt信号途径上的一员, 目前有大量的研究表明wnt16与胚胎的血液发育和骨骼发育相关。为了阐明wnt16在造血过程中的调控机制, 利用RT-PCR(逆转录PCR)扩增斑马鱼wnt16基因的ORF(开放阅读框)序列全长, 构建真核表达载体pCAGGS-P7/wnt16, 测序正确后, 用该表达载体免疫BALB/c雌鼠, 进行DNA免疫, 制备斑马鱼抗WNT16特异性多克隆抗体。结果表明: 通过DNA免疫制备的斑马鱼抗WNT16抗血清能特异性识别WNT16蛋白。斑马鱼WNT16抗体成功制备为进一步的功能研究奠定了重要基础。
多克隆抗体 DNA免疫技术 wnt16 wnt16 polyclonal antibody DNA immunization 
激光生物学报
2018, 27(6): 535
作者单位
摘要
1 湖南师范大学蛋白质化学及鱼类发育生物学教育部重点实验室, 心脏发育研究中心, 湖南 长沙 410081
2 湖南师范大学第一附属医院, 湖南 长沙410005
转录因子GATA1对正常红系细胞的分化起着关键作用, 其缺失导致原成红细胞的凋亡, 其过表达则能抑制红系细胞晚期的分化。本研究为了进一步利用斑马鱼研究gata1基因在血液血管发育过程中的功能, 通过反转录PCR(RT-PCR)扩增了斑马鱼gata1基因编码区序列, 构建了真核表达质粒pCAGGS-P7/gata1, 采用质粒DNA免疫技术的方法免疫了BALB/c小鼠, 制备了斑马鱼GATA1蛋白多克隆抗体。实验结果表明: 构建的真核表达重组质粒pCAGGS-P7/gata1 DNA具有良好的免疫原性, 在免疫小鼠后所获得的抗血清抗体效价达1∶500。Western blot和免疫荧光检测表明, 抗血清能特异型地识别GATA1蛋白。斑马鱼GATA1抗体成功制备为进一步的功能研究奠定了重要基础。
多克隆抗体 DNA免疫技术 gata1 gata1 polyclonal antibody DNA immunization 
激光生物学报
2018, 27(2): 161

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