为研究大规模生产过程中DH5α/pUC57 重组菌携带的表达鸡白细胞介素-2(ChIL-2)和白细胞介素-4(ChIL-4)融合基因质粒的遗传稳定性, 探讨其作为鸡球虫活疫苗免疫佐剂的商业化批量生产的潜力, 本文通过对重组质粒连续30代传代培养的方式, 进行实验室遗传稳定性鉴定。研究结果显示: 重组菌在含有氨苄青霉素(Amp＋)的溶菌肉汤(LB)平板上传代30次均保持革兰氏阴性(G-), 发酵葡萄糖及甘露醇并产生特异现象, 但不发酵乳糖; 重组菌与大肠杆菌 16S rDNA片段的同源性均大于95%, 各代重组质粒超螺旋比均大于90%, 质粒丢失率均为0; 重组质粒的表达产物具有刺激无特定病原体(SPF)雏鸡脾脏淋巴细胞的分化能力。结果表明, ChIL-2-ChIL-4 融合基因重组菌和重组质粒30代内结构稳定、分离稳定, 能够为扩大生产提供物质支持。
重组质粒 遗传稳定性 疫苗佐剂 ChIL-2 ChIL-2 ChIL-4 ChIL-4 recombinant plasmid genetic stability vaccine adjuvant
1 山西省农科院畜牧兽医研究所, 山西 太原 030032
2 山西农业大学动物科技学院, 山西 太谷 030801
为了有效防控羊致病性大肠杆菌病, 以雁门关地区养羊企业和规模专业户为研究对象, 对临床健康羊和腹泻症状羊进行致病性大肠杆菌的分离、培养、生化试验、血清型鉴定、致病性试验以及耐药性研究。结果显示, 从 180头份(临床健康羊的小肠150头份, 腹泻病羊的肛门棉拭子30头份)材料中分离培养出符合羊大肠杆菌生化特性的72株, 其中25株为羊致病性大肠杆菌; 这些致病菌是由O127a: K63(B8)、O125: K70(B15)、O142: K86(B)、O111: K58(B4)、 O114: K90(B)、O119: K69(B14)6个血清型单独或融合组成的9个菌株, 类似结果国内鲜有报道; 耐药性试验表明, 致病菌株对阿米卡星的敏感率为87.5 %, 卡那霉素为75 %, 头孢类药物为50 %～87.5 %, 而对氨苄西林的耐药率为50 %。
羊 致病性大肠杆菌 生物特性 sheep pathogenic escherichia coli biochemical characterization
1 山西农业大学动物科技学院,山西,太谷,030801
2 北京市动物卫生监督所,北京,100044
3 中国航天员科研训练中心细胞分子生物学实验室,北京,100094
通过对经15代选育的柔嫩艾美耳球虫(E.tenella)山西株的早熟株与其亲本株的繁殖力和致病性进行比较研究,证实早熟株的潜隐期比亲本株缩短21 h,繁殖力下降40 %左右;对致病性的研究显示,早熟株感染后对鸡只增重、ACI的影响较小,对11日龄雏鸡的半数感染量和半数致死量较亲本株增大,肠道病变记分较亲本株下降.由此认为,该早熟株符合球虫早熟株的特性,可用于鸡球虫病早熟苗的制作.
柔嫩艾美耳球虫 早熟株 繁殖力 致病性
1 山西农业大学动物科技学院,山西,太谷,030801
2 山西省药品监察所,山西,太原,030002
为了探讨体液免疫在鸡球虫病中的作用,通过制备柔嫩艾美尔球虫(E.tenella)特异性高免卵黄抗体,检测卵黄抗体在鸡盲肠中的代谢规律,对E.tenella进行体内外抑制和杀灭实验,观察特异性高免卵黄抗体对E.tenella的作用.结果表明:(1)口服的卵黄抗体在鸡消化道较稳定;(2)口服卵黄液可使感染E.tenella鸡的死亡率降低33.34%,增重率和抗球虫指数分别提高39.19%和73.50;(3)特异性高免卵黄抗体对E.tenella的子孢子具有明显的溶解和致弱作用,但对卵囊的孢子化速率和孢子化球虫卵囊的致病性没有明显影响.
特异性高免卵黄液 柔嫩艾美尔球虫 鸡 致病性
1 山西农业大学动物科技学院,山西,太谷,030801
2 北京出入境检验检疫局,北京,100026
3 中国农业大学动物医学院,北京,100094
用免疫组化ABC法检测了柔嫩艾美耳球虫(E.tenella)感染雏鸡后各免疫器官和盲肠局部的T淋巴细胞亚群CD4+淋巴细胞和CD8+T淋巴细胞数的动态变化.结果表明:(1)雏鸡初次感染E.tenella后,免疫器官盲肠扁桃体、脾脏、胸腺和盲肠黏膜中的CD4+T淋巴细胞均于第2天开始增殖,第6天～8天达到峰值;二次感染后第2天有短暂的下降,第5天开始缓慢回升,第8天二次达到峰值,但第二个峰值比第一个峰值低,说明CD4+T淋巴细胞积极参与启动免疫应答和抵抗初次感染.(2)雏鸡初次感染E.tenella后,免疫器官法氏囊、盲肠扁桃体、脾脏、胸腺和盲肠黏膜中的CDs+T淋巴细胞都于第2天开始增殖,第8天达到峰值;二次感染后立即回升,第5天达到峰值,然后缓慢下降,且第二个峰值比第一个峰值高,表明CDs+T淋巴细胞是抵抗再感染的主力.
柔嫩艾美耳球虫 CD4+T淋巴细胞 CDs+T淋巴细胞 鸡
1 山西农业大学,食品科学与工程学院,山西,太谷,030801
2 山西省兽药检测所,山西,太原,030000
3 山西农业大学,动物科技学院,山西,太谷,030801
利用60Coγ射线照射卵黄抗体,分析了60Coγ射线对IgY的效价、纯度、热稳定性、耐酸性以及酶水解试验等理化特性的影响和不同温度下的保存时间.结果表明照射达10 kGy时,对IgY的效价和纯度无影响;对照组和照射组热稳定性、耐酸性无差异,但照射组更易被酶水解;照射后的IgY明显延长了保存期.
60Coγ射线 高免卵黄抗体 理化特性
1 山西农业大学动物科技学院,中国山西,太谷,030801
2 山西省兽药监察所,中国山西,太原,030000
用60Coγ射线处理高免卵黄液,研究了不同剂量、剂量率对霉形体的灭活效果和对卵黄抗体的影响.结果表明,60Coγ射线可以完全杀灭高免卵黄液中的霉形体,霉形体在卵黄液中的灭活剂量为6.0 kGy;10.0 kGy以下的辐照剂量不影响卵黄液中蛋白质含量、pH值和活性氧自由基,同时不影响抗体效价.
高免卵黄液 60Coγ射线 灭活 霉形体 highly immunized egg yolk 60Coγ ray ki
1 山西农业大学动物科技学院,中国山西,太谷,030801
2 山西省兽药监察所,中国山西,太原,030000
用不同剂量、剂量率的60Coγ射线对卵黄液中的EDS-76病毒进行辐照,研究了其对病毒的灭活效果和对卵黄抗体(IgY)的影响.结果表明,60Coγ射线辐照,可以灭活高免卵黄液中的EDS-76病毒,且随辐照剂量、剂量率的增大,灭活率也增高;EDS-76病毒在卵黄液中的D10值为0.57kGy～0.60kGy;6.0kGy的辐照剂量,可以将高免卵黄液中的EDS-76病毒完全灭活,且不影响卵黄抗体效价,该卵黄抗体稳定性好、耐酸、耐热、耐蛋白酶消化.
高免卵黄??IgY 60Coγ射线 灭活 EDS-76病毒 high immunity egg yolk IgY 60 Coγ ray inactivate EDS 76 virus
山西农业大学动物科技学院,中国山西,太谷,030801
本实验用斑点酶联免疫试验(Dot-ELISA)检测了E.tenella感染雏鸡特异性抗体、免疫母鸡卵黄和后代血清中特异性母源抗体的动态变化及不同日龄雏鸡的抗球虫水平.结果表明:(1)雏鸡感染E.tenella后第6?d即可在循环血液中检测到特异性IgG,于第18天达到峰值,第30天降至感染后第7天时的水平.(2)母鸡二次免疫后第5天卵黄中即有高水平的母源抗体,免疫母鸡后代1日龄时母源抗体滴度高达9.83,与未免疫对照组差异极显著(P＜0.01),二者都?孀湃樟湓龀そ档?但免疫组下降幅度很小,29日龄时仍和对照组18日龄水平相当.(3)免疫母鸡后代对再感染的抵抗力显著增强,卵囊减少率高达93%,抗球虫指数和相对增重率都与对照组差异极显著(P＜0.01),雏鸡的抗球虫水平随着日龄增长逐渐降低;母源抗体、抗球虫指数和相对增重率三者之间两两呈现明显的正相关,而这三者又都与卵囊产量呈明显的负相关.
特异性抗体 母源免疫 抗球虫水平 鸡 E.tenella E.tenella specific IgG maternal immunity anticoccidial levels chickens
