流感病毒是呼吸道传染病毒, 增强疫苗接种诱导的黏膜免疫反应对于预防流感尤为重要。目前, 流感病毒疫苗主要为病毒灭活疫苗, 且通过肌肉注射接种, 很难诱导产生黏膜免疫。为增强流感病毒灭活疫苗的黏膜免疫效果, 本文利用薄膜分散法将与肺表面活性物质(PS)相似的磷脂以及胆固醇制备成包裹瑞喹莫德(R848)的PS脂质体(PS-R848)做黏膜佐剂, 将该脂质体与H7N9流感病毒灭活疫苗混合后经鼻腔免疫BALB/c雌性小鼠, 检测免疫指标及攻毒后的保护效果。与灭活疫苗添加R848组相比, 血清中的免疫球蛋白G(IgG)以及分型抗体IgG1与IgG2a效价、血凝抑制(HI)效价和支气管肺泡灌洗液分泌型IgA(sIgA)效价显著提高; 诱导的细胞因子干扰素-γ(IFN-γ)、白细胞介素-2(IL-2)与IL-4的分泌量也显著增加。用同亚型流感病毒攻毒小鼠后的肺部病毒滴度较单独疫苗组降低, 存活率达到100%, 最大体重丢失率较单独疫苗组低且有显著差异 。以上结果表明, R848仿生PS-R848作为黏膜佐剂可以有效提高H7N9流感病毒灭活疫苗的免疫效果, 为开发流感病毒的黏膜疫苗做了数据积累。

流感病毒灭活疫苗通常需要添加佐剂来增强其免疫保护效果。铝佐剂是常用的人用疫苗佐剂, 主要诱导Th2型免疫应答。在本研究中, 我们将氢氧化铝(Al)佐剂与TLR7/8激动剂R848组成复合佐剂, 与流感病毒H7N9灭活疫苗共同免疫小鼠; 单次免疫3周后, 用致死剂量(20 LD50)的同源病毒攻击小鼠。结果显示, 与含单一R848或Al佐剂的疫苗相比较, 添加了R848 + Al复合佐剂的疫苗更能提升小鼠的血清特异性IgG抗体和IgG2a抗体亚类的滴度, 诱导Th1和Th2型细胞因子分泌及Th1偏向的免疫应答, 能为小鼠抗致死量病毒攻击提供更有效的免疫保护。因此, R848+Al复合佐剂系统强于单一的R848或Al 佐剂。本研究对于改良Al佐剂及提高流感灭活疫苗免疫效果具有参考价值。

以BALB/c小鼠为模型, 探讨H7N9流感病毒灭活疫苗免疫小鼠后所诱导的长效体液免疫应答的动态变化。不同剂量的流感H7N9全病毒灭活疫苗单独或辅以MF59佐剂肌肉注射免疫小鼠一次。连续采集免疫后小鼠15个月的血清, 用ELISA方法检测特异性IgG抗体水平, 血凝抑制(hemagglutination inhibition, HI)试验和微量中和(microneutralization, MN)试验检测第15个月时的HI抗体和中和抗体效价。实验结果发现, 小鼠血清中的特异性IgG抗体水平随时间变化持续缓慢上升, 第5个月时达到顶峰, 随后略有下降但一直持续平稳状态; IgG抗体滴度与疫苗剂量成正相关, 且添加佐剂能提高抗体滴度。HI及MN抗体检测表明, 免疫后第15个月产生的抗体能有效中和病毒, 且抗体跟疫苗剂量成正比。以上研究表明, H7N9流感病毒灭活疫苗免疫小鼠一次诱导产生的特异性抗体能在较长期内保持比较平稳的抗体滴度, 为小鼠提供免疫保护; 增加抗原剂量和添加MF59佐剂能增加疫苗特异性抗体水平。该研究为H7N9流感疫苗产生的长期保护效应提供了一定的数据积累和参考。

黑曲霉孢子是生物气溶胶的重要组成部分，质量消光系数是研究黑曲霉孢子电磁衰减特性的重要参数。采用压片法测量了灭活前后黑曲霉孢子2.5~15 μm波段的反射光谱，并利用Krames-Kronig(K-K)关系计算了黑曲霉孢子红外波段的复折射率。基于Mie散射理论求出了灭活前后黑曲霉孢子红外波段的质量消光系数，并对结果进行了分析和讨论。分析结果表明：3~5 μm波段，灭活后平均质量消光系数降低了4.6%，8~14 μm波段，灭活后平均质量消光系数降低了89.5%，由此可知，保持活性对于提高黑曲霉孢子的电磁衰减能力具有重要的意义。

巨细胞病毒(Cytomegalovirus, CMV)在人群中感染普遍, 对婴幼儿及免疫低下人群中造成严重疾病, 目前还没有针对该病毒的商品化疫苗。本研究以BALB/c小鼠为动物模型, 探讨鼠巨细胞病毒(Murine cytomegalovirus, MCMV)IE-1 DNA疫苗和MCMV灭活疫苗联合免疫抗MCMV感染的免疫保护效果。将编码IE-1基因的DNA疫苗(pIE-1)通过肌肉注射辅以电穿孔的方式对小鼠进行初免, 再用全病毒灭活疫苗单独或者辅以MF59佐剂进行加强免疫, 分别通过ELISA和ELISPOT方法检测到联合免疫策略在免疫组小鼠体内诱导了MCMV特异性的抗体应答和CTL应答; 免疫两周后用3×LD50致死剂量MCMV感染小鼠, 疫苗对小鼠的免疫保护通过检测小鼠存活率、重要器官中的病毒滴度及体重丢失率来评价。结果显示, 与单独免疫DNA疫苗或灭活疫苗相比, IE-1 DNA疫苗联合灭活疫苗组能同时在小鼠体内诱导体液免疫和细胞免疫应答, 并提供小鼠完全保护; 而且MF59辅以灭活疫苗免疫小鼠能增强疫苗的免疫效果。

采用不同化学屏蔽方法和傅里叶变换红外光谱（FTIR）分析, 对灭活酿酒酵母菌吸附展青霉素的机理进行了研究。 化学屏蔽法与酿酒酵母菌对展青霉素的吸附结果表明: 酿酒酵母菌经过丙酮和NaOH处理后对展青霉素的吸附明显增加, 而经过氨基甲基化和羧基酯化处理的酵母菌对展青霉素的吸附能力显著下降, 细胞壁上的羧基和氨基参与了吸附过程。 红外光谱分析结果表明, 吸附前后红外光谱图发生了一些变化, 与变化有关的主要是存在于细胞壁蛋白质和糖类上的氨基、 羧基和羟基。

在流感灭活疫苗中添加佐剂可以提高疫苗的免疫原性, 节约抗原用量。一些天然中草药多糖具有潜在的佐剂效应。本文探讨了人参多糖(ginseng polysaccharide, GPS)在新甲型H1N1流感病毒裂解型灭活疫苗中的佐剂效应。将不同剂量GPS与新甲型H1N1流感病毒灭活疫苗混合, 共同免疫小鼠一次, 通过检测免疫后在小鼠体内诱导产生的疫苗特异性IgM、IgG、IgG1和IgG2a抗体情况来评价GPS作为流感病毒灭活疫苗佐剂的免疫增强效果, 并与不添加佐剂的疫苗和加有铝佐剂的疫苗的免疫效果作比较。结果显示, GPS与铝佐剂一样能显著提高和维持疫苗特异性IgG抗体滴度, 同时提高IgM抗体水平, 其中800 μg GPS的佐剂效果最好。因此我们认为GPS可以作为流感病毒灭活疫苗的一种候选佐剂。

探讨枸杞多糖(Lycium barbarum polysaccharide, LBP)作为佐剂对H5亚型流感病毒全病毒灭活疫苗的体液免疫增强效果。将流感病毒A/Vietnam/1194/2004(H5N1)灭活疫苗与不同剂量的枸杞多糖混合后以腹腔注射的方式共同免疫小鼠, 免疫后三周收集血清用于特异性抗体检测。实验中设立氢氧化铝佐剂组作对照共同评价LBP作为佐剂的免疫增强效果。结果显示, 小鼠血清中针对H5灭活疫苗的特异性抗体水平在一定范围内随着LBP剂量的增加而提高。LBP在800 μg剂量时血清特异性抗体水平较无佐剂组显著增强, 并与氢氧化铝佐剂组大致相当。因而, LBP有可能成为一种有效的流感灭活疫苗免疫佐剂。

用60Coγ射线处理高免卵黄液,研究了不同剂量、剂量率对霉形体的灭活效果和对卵黄抗体的影响.结果表明,60Coγ射线可以完全杀灭高免卵黄液中的霉形体,霉形体在卵黄液中的灭活剂量为6.0 kGy;10.0 kGy以下的辐照剂量不影响卵黄液中蛋白质含量、pH值和活性氧自由基,同时不影响抗体效价.

用不同剂量、剂量率的60Coγ射线对卵黄液中的EDS-76病毒进行辐照,研究了其对病毒的灭活效果和对卵黄抗体(IgY)的影响.结果表明,60Coγ射线辐照,可以灭活高免卵黄液中的EDS-76病毒,且随辐照剂量、剂量率的增大,灭活率也增高;EDS-76病毒在卵黄液中的D10值为0.57kGy～0.60kGy;6.0kGy的辐照剂量,可以将高免卵黄液中的EDS-76病毒完全灭活,且不影响卵黄抗体效价,该卵黄抗体稳定性好、耐酸、耐热、耐蛋白酶消化.