为建立测定甜叶菊废渣中总黄酮含量的方法, 通过比较直接法、 AlCl3法和NaNO2-Al(NO3)3-NaOH法三种显色方法的紫外可见光谱, 确定甜叶菊废渣中总黄酮含量测定的最佳方法为NaNO2-Al(NO3)3-NaOH法。 分析了测定波长, 显色剂用量和反应时间、 温度、 pH等因素对测定的影响, 并从浓度与吸光度的线性关系, 稳定性及加标回收率等方面对该法进行了系统研究, 结果表明: 在波长500 nm处, 以芦丁为标准品, 在2～24 μg·mL-1范围内呈良好的线性关系, 线性相关系数R2=0.999 5。 样品加标回收率在96％～104.3％之间, 相对标准偏差(RSD)为3.75%。 NaNO2和Al(NO3)3的用量都为1.0 mL, 反应时间都为6 min, NaOH的用量为15.0 mL, 反应时间为15 min。 整个显色过程温度为40 ℃, pH为5, 进一步优化了NaNO2-Al(NO3)3-NaOH法测定甜叶菊废渣中总黄酮含量的工艺条件。 该方法简便快速, 重现性好, 准确度高, 可用于实际检测工作。

使用近红外光谱技术直接扫描甜叶菊干叶片, 建立了甜菊苷(stevioside, ST)和莱鲍迪苷 A(rebaudioside A, RA)的检测模型。 对甜菊苷含量在0.27%～1.40%, 莱鲍迪苷 A含量在0.61%～3.98%范围内的不同品种的甜叶菊干叶片进行了近红外光谱扫描, 共扫描了105份。 采用偏最小二乘法建立甜菊糖苷的检测模型, 比较了减去一条直线、 多元散射校正、 一阶导数和二阶导数等不同的光谱预处理方法对模型的影响。 结果显示减去一条直线的数据预处理方法为ST的最优建模方法。 ST校正集相关系数为0.986, 校正均方根误差为0.341, 预测均方根误差为1.00, 相对分析误差为2.8; RA采用无光谱预处理建模, RA的建模结果相关系数为0.967, 校正均方根误差为1.50, 预测均方根误差为1.98, 相对分析误差为4.17。 说明近红外光谱技术检测甜叶菊干叶片中ST和RA的含量具有一定的可行性。 同时与甜叶菊粉末ST模型结果相关系数为0.986, 校正均方根误差为0.32, 预测均方根误差为0.601, 相对分析误差为2.86和RA模型结果相关系数为0.968, 校正均方根误差为1.50, 预测均方根误差为1.48, 相对分析误差为4.2相比差异不明显。 但减少了叶片粉末检测过程中的烘干、 研磨的步骤, 节省了时间, 降低了工作量。

以甜叶菊为试材, 对影响其RAPD反应体系的7个因子进行优化。结果表明, 20 μL的优化体系包括: 双蒸水13.6 μL, 10×Buffer(含15 mmol/L MgCl2)溶液3 μL, 2.5 mmol/L的dNTPS 1.2 μL, 10 μmol/L的引物1 μL, 20 ng的模板DNA 1 μL, 1 U Taq聚合酶; 热循环程序为: 94 ℃ 预变性4 min, 94 ℃变性30 s, 35 ℃退火30 s, 72 ℃延伸1 min, 40个循环, 最后72 ℃延伸7 min。