数字病理凭借其便捷的存储、管理、浏览、传输等特点，为远程病理会诊及联合会诊带来了新契机。然而，显微镜的视场有限，在保证分辨率的前提下，无法兼顾全景成像。全景数字病理的提出弥补了这一缺陷，其在保证分辨率的同时可兼顾全景成像。但单张切片仅能实现单靶点检测，而疾病诊断需同时观测多个靶点的表达情况。近年来，多靶点全景数字病理技术发展迅速，因其在药物研发、临床科研以及基础科研等领域有巨大的应用潜力而广受关注。该系统凭借视场大、颜色多、通量高的特点，可在短时间内原位检测整张组织切片上的多种生物标记物的表达情况，借以识别组织上每个细胞表型、丰度、状态及其相互关系。本文首先梳理了数字病理、全景数字病理以及多靶点全景数字病理的发展过程，并简要介绍发展过程中技术的更新迭代，以及发展多靶点全景数字病理的重要性。然后，分别从生物样本准备、多色光学成像以及图像处理3个部分重点介绍多靶点全景数字病理。接下来，阐述了多靶点全景数字病理在肿瘤微环境与肿瘤分子分型等生物医学领域的应用情况。最后，对多靶点全景数字病理的技术优势、目前面临的挑战及其未来的发展趋势进行了总结。