作者单位
摘要
省部共建淡水鱼类发育生物学重点实验室, 湖南师范大学生命科学学院, 湖南 长沙 410081
目的: 本文以糖原合成酶激酶3β(glycogen synthase kinase 3 beta, Gsk3β)为研究对象, 探讨Gsk3β基因在红鲫胚胎发育及成体组织中的表达模式, 以及在镉金属胁迫下的分子应答初探。方法: 采用RACE克隆技术获得红鲫Gsk3β cDNA全长, 半定量RT-PCR技术和Western Blot技术分析Gsk3β在mRNA水平和蛋白水平的表达情况, 最后通过特定浓度的镉处理分析Gsk3β的表达情况。结果: 通过克隆发现Gsk3β基因全长为2 195 bp, 5′端非编码区(UTR)共692 bp, 3′非编码区有237 bp。编码含421个氨基酸的蛋白质, 蛋白分子量约为46 846.40, 等电点为9.05, 且与斑马鱼和青鳉的亲缘关系最近。Gsk3β基因在胚胎发育和成体组织中呈现不同程度的表达, 在不同组织中, Gsk3β在大脑组织表达最丰富, 其次在眼睛, 肌肉和精巢中表达相对较高, 在卵巢、肝脏、肾脏和皮肤组织表达量相对较低。在不同发育时期, Gsk3β在两细胞期没有表达, 之后在后续的不同时期呈现差异表达, 出膜期表达最强, 其次为肌效期、体节期、神经胚、囊胚期表达次之, 在黑色素期和体色素期蛋白表达较弱。在镉处理后的红鲫肝脏中检测Gsk3β基因的表达, 发现Gsk3β表达下调。结论: Gsk3β基因在红鲫胚胎发育中起着重要作用, 且参与了镉金属胁迫应答, 但其具体的分子机制仍有待进一步研究。
基因克隆 Gsk3β Gsk3β gene cloning PCR PCR western blot western blot 
激光生物学报
2018, 27(1): 45

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