将量子点荧光特性与双链特异性核酸酶的DNA剪切特性相结合, 提出一种高灵敏度、高特异性的双元miRNA定量检测方案.首先, 将量子点和四氧化三铁磁性纳米粒子分别与捕获DNA链接形成 捕获探针, 再与待测miRNA互补配对形成异源双链杂合结构, 随后双链特异性核酸酶对杂合结构中的捕获DNA进行特异性剪切, 实现量子点和待测miRNA从捕获探针分离, 且分离的待测miRNA与捕获探 针上未配对的DNA开始新一轮杂交和再剪切.经过上述循环过程, 量子点从捕获探针大量释放, 荧光信号不断增强, 实现肿瘤标志物miRNA的高灵敏检测.实验结果表明, 基于酶剪切量子点荧光放大技 术, 在1 fmol/L至100 pmol/L的浓度范围内, 同时实现了肿瘤标志物miRNA-141及循环miRNA内参miRNA-1228的特异性定量检测, 其检出限分别达到0.69 fmol/L和0.21 fmol/L.与实时荧光定量多聚 核苷酸链式反应方法相比, 该方案获得了相同的检测结果, 且具有更高灵敏度.

基于SiC@Ag基底与Ag纳米颗粒的表面增强拉曼散射效应, 提出了利用银-生物素-链霉亲和素纳米聚集体二次表面增强拉曼散射放大的超灵敏miRNA-106a检测方案.首先, 将地高辛修饰的捕获DNA与固定在SiC@Ag基底上的抗地高辛链接, 制备SiC@Ag@anti-digoxin/digoxin-DNA基底; 将4-巯基苯甲酸(4MBA)标记的银纳米颗粒与修饰有氨基和生物素的探针DNA链接, 制备Ag@4MBA@DNA-biotin探针.然后将制备的基底、探针与待测miRNA-106a组成“三明治”结构, 获得表面增强拉曼散射信号放大.最后, 依次加入链霉亲和素和制备的探针, 形成银-生物素-链霉亲和素纳米聚集体, 实现检测信号的二次放大.实验结果表明, 利用SiC@Ag基底和银-生物素-链霉亲和素纳米聚集体双重表面增强拉曼散射放大, 可以实现miRNA-106a的超灵敏检测, 检测极限达到0.579 fmol/L, 对于肿瘤的早期诊断具有应用潜力.

以聚苯乙烯（PS)小球为模板, 采用金属辅助刻蚀和湿法化学刻蚀技术, 制备大面积冠状硅柱阵列, 再原位生长银纳米粒子后得到银覆盖冠状硅柱阵列（Ag/Si CPA)基底。实验表明, 制备的基底具有优良的表面增强拉曼散射（SERS)特性, 电磁增强因子达到1.81×106。同时,将制备的罗丹明分子（R6G)标记的DNA发卡探针与基底链接, 在与miRNA-106a互补杂交后进行SERS信号检测, 获得相应的剂量-响应曲线。结果表明, 基于（Ag/Si CPA)基底的SERS特性, 开展miRNA-106a的检测, 具有特异性好和灵敏度高的优势, 检测范围为1 fmol·L-1～100 pmol·L-1, 检测极限为0.917 fmol·L-1。此外, 与实时荧光定量多聚核苷酸链式反应（RT-qPCR)方法相比, 不仅检测结果一致, 而且基于SERS光谱技术的检测方法具有更高的灵敏度。

基于Ag包覆聚苯乙烯球(PS@Ag)纳米探针和Ag覆盖硅金字塔结构(Si@Ag)阵列基底构建“三明治”免疫结构, 开展表面增强拉曼散射(SERS)特性研究, 实现了肝癌肿瘤标志物甲胎蛋白(AFP)的高灵敏、高特异性的检测.通过硝酸银原位还原生成PS@Ag纳米粒子, 再依次链接4-巯基苯甲酸(4-MBA)及甲胎蛋白抗体(Anti-AFP) 制备得到PS@Ag免疫探针.采用Langmiur-Bloggt膜技术、等离子体刻蚀和湿法刻蚀技术, 以PS球阵列为模版, 刻蚀大面积硅金字塔结构, 再依次沉积Ag膜和链接Anti-AFP制备得到免疫基底.结果表明, 基于“三明治”免疫结构的SERS检测方案具有高灵敏度(检测极限为1.75 fg·mL－1)和宽的动态范围(2 fg·mL－1~200 ng·mL－1).此外, 对临床人体血清样品进行SERS免疫检测, 得到了与化学免疫发光法一致的结果, 而且具有更高的灵敏度, 可应用于肝癌的早期检测与诊断.