目的: 研究N-乙酰基-丝氨酰-天冬氨酰-赖氨酰-脯氨酸(N-acetyl-seryl-aspartly-lysyl-proline, AcSDKP)对转化生长因子β1(Transforming growth factor beta 1, TGF-β1)诱导大鼠骨髓间充质干细胞(mesenchymal stem cells, MSCs)向肌成纤维细胞(myofibroblast, MF)分化的影响, 探讨 AcSDKP抗纤维化作用的可能机制。方法: 全骨髓贴壁法分离培养大鼠骨髓MSCs。使用免疫组化, Western blotting技术分析α-SMA蛋白的表达以及Smad2/3, ERK1/2蛋白磷酸化的变化情况。结果: 和对照组相比, TGF-β1诱导的MSC中α-SMA、磷酸化-Smad2/3及磷酸化-ERK1/2的表达大大增强, 使用AcSDKP干预细胞则三者的表达量明显下降且呈一定的剂量依赖性。结论: AcSDKP可以显著抑制TGF-β1诱导的大鼠MSCs向MF分化, 可能通过抑制TGF-β/Smad/ERK1/2信号通路的激活, 从而发挥其抗器官纤维化作用。

目的:观察人参皂苷Rg1 (Ginsenoside Rg1, GS-Rg1)对丙二醛(Malondialdehyde, MDA)诱导的小鼠骨髓间充质干细胞(Mesenchymal stem cells, MSCs)凋亡的保护作用, 并探讨其作用的可能机制。方法:以不同剂量(10、50、100 mg/L)人参皂苷Rg1预处理24 h, 在小鼠骨髓MSC体外培养体系中加入MDA, TUNEL法, 流式细胞术检测MSC凋亡率, Q-RT-PCR和Westen印迹分析检测Bcl-2、 Bax 和Caspase-3表达。结果:GS-Rg1可以减少TUNEL阳性细胞百分率及亚G1峰凋亡细胞百分率, 增加Bcl-2mRNA及蛋白的表达水平, 降低 Bax 和Caspase-3mRNA及蛋白表达水平。结论:GS-Rg1对MDA诱导小鼠间充质干细胞凋亡具有保护作用, 其作用机制可能与增加Bcl-2表达, 降低Bax 和Caspase-3表达有关。

本工作旨在探讨贴壁培养细胞台盼蓝拒染试验的方法, 为其合理应用提出建议。用正常培养及NaN3作致死处理的人视网膜色素上皮细胞株-19, 进行原位贴壁细胞和培养体系上悬液中细胞的台盼蓝拒染实验, 并比较其原位法与计数板法所测活细胞率。与计数板法相似, 随染液浓度增高或染色时间延长, 原位台盼蓝拒染实验的活细胞率检测值逐渐增加。培养体系上悬液中脱落细胞的存活率显著低于贴壁的细胞, NaN3处理使脱落细胞增加。因此, 对于贴壁牢固的培养细胞, 原位台盼蓝染色是检测活细胞率的实用方法。根据细胞从培养表面上消化下来的难易程度和脱落到培养上悬液中的数目多少, 可选用原位染色法或/和计数板法台盼蓝拒染试验, 从而检测贴壁培养细胞的总存活率。