目的: 通过对鼠G422脑胶质瘤脑及腋部皮下移植瘤模型HPPH光动力学治疗, 从肉眼、肿瘤生长曲线、病理、观察各剂量组疗效, 并与对照组及HpD作对比, 寻找HPPH-PDT治疗鼠G422脑胶质瘤合适的HPPH剂量。方法: 建立鼠G422脑胶质瘤脑及腋部皮下移植瘤模型, 设立空白对照组、单注射HPPH 0.45 mg/kg组、单注射HpD组、单665 nm激光照射组、单630 nm激光照射组、HPPH-PDT各组(0.15 mg/kg、0.3 mg/kg、0.45 mg/kg组)、HpD-PDT 5 mg/kg组。单注射HPPH组、HPPH-PDT组和单注射HpD组、HpD-PDT组自尾静脉推注入光敏剂, 24小时后以波长665 nm的半导体激光照射HPPH-PDT组和单665 nm激光照射组肿瘤, 功率密度200 mW/cm2, 每光斑照射17 min, 能量密度为204 J/cm2; 功率密度100 mW/cm2, 每光斑照射34min, 能量密度为204 J/cm2; 以波长630 nm的半导体激光照射HpD-PDT组及单630 nm激光照射组肿瘤, 功率密度200 mW/cm2, 每光斑照射20 min, 能量密度为240 J/cm2。肉眼观察肿瘤外形变化, 测量(治疗前、3、5、7、9 d)肿瘤体积, 于PDT后9 d处死鼠, 取肿瘤、肿瘤边缘、正常脑组织, 作病理检查。结果: 可见未经光动力治疗对照组肿瘤迅速生长,第9天体积平均长至治疗前的4.86～5.97倍, HPPH-PDT 0.3 mg/kg、0.45 mg/kg组与治疗前体积平均比是0.94及0.97倍,HPPH-PDT 0.15 mg/kg组是1.09倍、HpD-PDT组是1.6倍, 光动力学组肿瘤的生长速度明显低于对照组, P值＜0.05,有统计学差别, HPPH-PDT 各组优于HpD-PDT组。HPPH-PDT 0.3 mg/kg、0.45 mg/kg组抑瘤效果优于HPPH-PDT 0.15 mg/kg组、HpD-PDT组(P值＜0.05,有统计学差别)。HPPH-PDT 0.3 mg/kg、0.45 mg/kg组抑瘤效果相似。在同样能量密度时高功率密度组第9天疗效较低能量密度稍好,但无统计学差别。故由抑瘤效果层面分析HPPH-PDT对鼠G422脑胶质瘤有抑制作用, 并与HPPH剂量相关, 适宜的剂量为0.3 mg/kg; HPPH-PDT对鼠G422脑胶质瘤的抑瘤作用较HpD-PDT强。从病理观察鼠G422脑胶质瘤脑及皮下移植瘤各剂量HPPH-PDT组及HpD-PDT治疗组, 治疗9 d后仅个别标本肿瘤组织及细胞已消失, 大部分肿瘤组织明显变性坏死, 但深部仍有带活性肿瘤细胞, 与对照组成巢状生长大片活性肿瘤细胞有明显差别。且坏死程度, HPPH-PDT组明显优于HpD-PDT组, 0.3 mg/kg、0.45 mg/kgHPPH-PDT组优于0.15 mg/kg HPPH-PDT组, 0.3 mg/kg、0.45 mg/kg HPPH-PDT组两组程度相似, 故0.3mg/kg是较合适的HPPH-PDT光敏剂剂量。结论: 从抑瘤效果、病理分析, HPPH-PDT对鼠G422脑胶质瘤生长有抑制作用, 抑瘤效果与HPPH剂量有关, 适宜的剂量为0.3 mg/kg; HPPH-PDT对鼠G422脑胶质瘤抑瘤效果较HpD-PDT强。

目的: 通过对鼠 G422脑胶质瘤脑及腋部皮下移植瘤模型的 HPPH光动力学治疗, 从电镜、FCM测定细胞凋亡率, 观察各剂量组疗效, 并与对照组及 HpD-PDT作对比, 寻找 HPPH-PDT治疗鼠 G422脑胶质瘤合适的 HPPH剂量。方法: 建立鼠 G422脑胶质瘤脑及腋部皮下移植瘤模型, 设立空白对照组、单注射 HPPH 0.45 mg/kg组、单注射 HpD组、单 665 nm激光照射组、单 630 nm激光照射组、HPPH-PDT各组(0.15、0.3、0.45 mg/kg组)、HpD-PDT5 mg/kg组。单注射 HPPH组、HPPH-PDT组和单注射 HpD组、HpD-PDT组自尾静脉注入光敏剂, 24h后以波长 665 nm的半导体激光照射 HPPH-PDT组和单 665 nm激光组肿瘤, 功率密度 200 mW/cm2每光斑照射 17 min, 能量密度为 204 J/cm2; 以波长 630 nm的半导体激光照射 HpD-PDT组及单 630 nm激光照射组肿瘤, 功率密, 度 200 mW/cm2每光斑照射 20 min, 能量密度为 240 J/cm2。于 PDT后 9d处死鼠, 取肿瘤、肿瘤边缘、正常脑组织, 作电镜、FCM细胞凋亡检查。, 结果: 以流式细胞仪及电镜观察肿瘤细胞凋亡,显示鼠 G422脑胶质瘤脑及皮下移植瘤 HPPH-PDT各剂量组、HpD-PDT组与空白、单注药和单照光三组对照组比较, 肿瘤细胞凋亡率明显升高, P＜0.01, 差别有统计学意义。HPPH-PDT各组细胞凋亡率高于 HpD-PDT组, 0.3 mg/kg、0.45 mg/kgHPPH-PDT组的细胞凋亡率明显高于 0.15 mg/kgHPPH-PDT组, HpD-PDT组, P＜0.01, 差别有统计学意义, 0.45 mg/kg HPPH-PDT组细胞凋亡率稍高于 0.3 mg/kgHPPH-PDT组, P＞ 0.05, 差别无统计学意义。故 HPPH0.3 mg/kg是适宜的 HPPH-PDT光敏剂剂量。HPPH-PDT0.3 mg/kg组和 HpD-PDT组比较, 肿瘤细胞凋亡率明显升高, P＜0.01, 差别有统计学意义。故由肿瘤细胞凋亡率和电镜分析, HPPH-PDT能诱导鼠 G422脑胶质瘤细胞凋亡, 凋亡率与 HPPH剂量相关, 适宜的剂量为 0.3 mg/kg; HPPH-PDT诱导鼠 G422脑胶质瘤细胞凋亡的作用较 HpD-PDT强。结论: 从电镜、FCM观察 HPPH-PDT对鼠 G422脑胶质瘤生长有抑制作用, 能诱导肿瘤细胞凋亡及死亡。凋亡率与 HPPH剂量有关, 适宜的剂量为 0.3 mg/kg; HPPH-PDT诱导鼠 G422脑胶质瘤细胞凋亡的作用较 HpD-PDT强。

探讨 HPPH光动力治疗对鼠 G422脑胶质瘤脑及腋部皮下移植瘤各部位 mtp53蛋白和 p16蛋白表达的影响并和 HpD-PDT做比较。方法: 建立鼠 G422脑胶质瘤脑及腋部皮下移植瘤模型, 设立空白对照组、单注射 HPPH 0.45 mg/kg组、单注射 HPD 5 mg/kg组、单 665 nm激光照射组、单 630nm激光照射组、HPPH-PDT各组(0.15 mg/kg组、0.3 mg/kg组、0.45 mg/kg组)、 HpD-PDT 5 mg/kg组。单注射 HPPH组、HPPH-PDT组和单注射 HPD组、HpD-PDT组自尾静脉注入光敏剂, 24h后以波长665 nm的半导体激光照射 HPPH-PDT组和单 665 nm激光组肿瘤, 功率密度 200 mW/cm2每光斑照射 17 min, 能量密度为 204 J/cm2; 以波长 630 nm的半导体激光照射 HpD-PDT组及单 630 nm激光组肿瘤, 功率密度20, 0 mW/cm2, 每光斑照射 20 min, 能量密度为 240 J/cm2。于 PDT后 9d处死鼠行酶联免疫吸附法(ELISA)的双抗体夹心法检测 HPPH-PDT和 HpD-PDT后肿瘤及对照组各部位(肿瘤、肿瘤边缘、正常脑组织)、血液突变型 p53蛋白(mutant type p53 protein, mtp53)和 p16蛋白表达变化。结果: 空白、单注药和单照光三组对照组之间 mtp53蛋白和 p16蛋白表达值两两比较, P＞0.05, 差别无统计学意义。HPPH-PDT各剂量组及 HPD-PDT组与空白对照组比较, mtp53蛋白表达值明显降低, p16蛋白表达值明显升高, P＜0.01, 差别有统计学意义。且接近正常脑组织值, 或 p16蛋白表达稍低于正常脑值, mtp53蛋白值表达稍高于正常脑组织值。0.3 mg/kg和 0.45 mg/kg HPPH-PDT组与0.15 mg/kgHPPH-PDT组及 HPD-PDT相比, mtp53蛋白表达值降低, p16蛋白表达值升高, P＜0.05, 差别有统计学意义, 0.45 mg/kg HPPH-PDT组 mtp53蛋白表达值稍低于 0.3 mg/kgHPPH-PDT组, p16蛋白表达值稍高于 0.3 mg/kgHPPH-PDT组, P＞0.05, 差别无统计学意义。HPPH-PDT 0.3 mg/kg组的 mtp53蛋白表达值低于 HpD-PDT5 mg/kg组, p16蛋白表达值高于 HpD-PDT5 mg/kg组, P＜0.05, 差别有统计学意义。肿瘤边缘 mtp53蛋白值稍高于肿瘤值, 血液低于肿瘤值; p16蛋白值肿瘤边缘稍低于肿瘤值, 血液高于肿瘤值。结论: HPPH-PDT能诱导 mtp53蛋白表达降低, p16蛋白表达升高。与 HpD-PDT相比, HPPH-PDTmtp53蛋白表达更低, p16蛋白表达更高。本次实验条件下 HPPH 0.3 mg/kg是适宜的 HPPH-PDT剂量。

目的: 探讨HPPH光动力治疗对鼠G422 脑胶质瘤脑部及腋部皮下移植瘤缺氧诱导因子(HIF-1α)、血管内皮生长因子(VEGF)表达的影响并和HpD-PDT做比较。方法: 建立鼠G422脑胶质瘤、腋部皮下移植瘤模型, 设立空白对照组、单注射HPPH 0.45 mg/kg组、单665 nm激光照射组、单630 nm激光照射组、HPPH-PDT组(0.15、0.3、0.45 mg/kg组)、HpD-PDT 5 mg/kg组。单注射HPPH组、HPPH-PDT组和HpD-PDT组自尾静脉推注入光敏剂, 24 h后以波长665 nm的半导体激光照射HPPH-PDT组和单激光组肿瘤, 功率密度200 mW/cm2, 每光斑照射17 min, 能量密度为204 J/cm2; 以波长630 nm的半导体激光照射HpD-PDT组肿瘤, 功率密度200 mW/cm2, 每光斑照射20 min, 能量密度为240 J/cm2。于PDT后9 d处死鼠, 取肿瘤、肿瘤边缘、正常脑组织及血液, 行酶联免疫吸附法(ELISA)的双抗体夹心法检测HPPH-PDT和HpD-PDT后及对照组缺氧诱导因子(HIF-1α)、血管内皮生长因子(VEGF)。结果: 鼠G422 脑胶质瘤脑部及腋部皮下移植瘤, 空白、单注药和单照光三组对照组之间缺氧诱导因子(HIF-1α)、血管内皮生长因子(VEGF)表达值两两比较, P＞0.05, 差别无统计学意义。不同剂量HPPH、HpD光敏剂PDT治疗鼠G422脑胶质瘤脑部移植瘤, HIF-1α、VEGF平均值, HPPH-PDT各组较HpD-PDT低, 0.3 mg/kg-PDT组、0.45 mg/kg-PDT组低于0.15 mg/kg-PDT组及HpD-PDT组, P＜0.05, 有显著差异。HPPH-PDT 0.3 mg/kg-PDT组、0.45 mg/kg-PDT二组值接近。 HPPH-PDT 0.3 mg/kg-PDT组、0.45 mg/kg-PDT接近正常脑值, 0.15 mg/kg-PDT 及HpD-PDT组稍高于正常脑值, 但P＞0.05, 无显著差异, HPPH-PDT各组及HpD-PDT组值均明显低于对照组(空白组、单注HPPH、单注射HpD组、单665nm激光照射组、单630nm激光照射组), P值<0.05, 有显著差异。各组肿瘤边缘的值稍高于肿瘤值, 血液的值较肿瘤低, 接近或稍高于正常脑值。不同剂量HPPH、HPD光敏剂PDT治疗鼠G422胶质瘤腋部皮下移植瘤HIF-1α、VEGF平均值, HPPH-PDT各组较HpD-PDT低, 0.3 mg/kg-PDT组、0.45 mg/kg-PDT组低于0.15 mg/kg-PDT组及HpD-PDT组, P＜0.05, 有显著差异, HPPH-PDT 0.3 mg/kg-PDT组、0.45 mg/kg-PDT二组值接近。HPPH-PDT各组及HpD-PDT组值均明显低于对照组(空白组、单注HPPH、单注HpD对侧未治疗组、单665 nm激光照射组、单630 nm激光照射组), 且P＜0.05, 有显著差异。各组肿瘤边缘的值稍高于肿瘤值, 血液的值较肿瘤低, 接近或稍高于正常脑值。结论: HPPH-PDT能诱导缺氧诱导因子(HIF-1α)、血管内皮生长因子(VEGF)表达降低, 与HpD-PDT相比, 表达更低。HPPH-PDT疗效优于HpD-PDT, 本实验条件下HPPH-PDT 0.3 mg/kg是较合适的光敏剂剂量。

观察静脉注射不同剂量HPPH光敏剂后不同时段透过血脑屏障在颅内外肿瘤与正常脑组织、皮肤间的代谢分布, 并确定静脉注射HPPH光敏剂后在脑胶质瘤高浓度聚集与正常组织大部份排出相差距离最大的时间段, 为光敏诊断、光动力治疗提供最佳时间及剂量。方法: 建立鼠G422脑胶质瘤、腋部皮下移植瘤模型, 设立注射HPPH 0.15 mg/kg组、HPPH 0.3m g/kg组、HPPH 0.45 mg/kg组、以荧光图像早期癌诊断仪测定注药前、注药后(4、8、12、18、24、32、48 h)肿瘤及正常脑组织、皮肤、口腔及眼粘膜的荧光峰值, 选择在肿瘤中有较高的HPPH浓度, 正常脑组织及皮肤大部分已排出的最大距离值, 以确定HPPH-PDT, HPPH注药后最佳的诊断、治疗时间及剂量。结果: 从鼠G422脑胶质瘤、腋部皮下移植瘤模型注HPPH 0.15 mg/kg组、HPPH 0.3 mg/kg组、HPPH 0.45 mg/kg组、以荧光图像早期癌诊断仪测定注药前、注药后(4、8、12、18、24、32、48 h)不同时间脑肿瘤、腋部皮下肿瘤、正常脑、正常皮肤、口腔及眼粘膜的荧光峰值看, HPPH在注药后12～24 h时正常组织荧光峰已较低, 而肿瘤尚有较高的荧光峰, 二者的距离也较大, 是作荧光诊断及光动力学治疗的较佳时间, HPPH 0.3 mg/kg、HPPH 0.45 mg/kg组峰值平均值接近, 并稍高于HPPH 0.15 mg/kg组, 故HPPH注药0.3 mg/kg、注药后12～24 h是作鼠G422脑胶质瘤肿瘤光敏诊断及光动力学治疗的较佳剂量及时间, 三组注药后口腔及眼粘膜的荧光峰值均较高, 且48 h仍有较高的浓度, 应注意口、眼在HPPH-PDT后对光的防护。皮肤48 h时荧光峰较低, 可减少皮肤避光时间。结论: 通过荧光图像早期癌诊断仪测定静脉注射HPPH在肿瘤及正常组织中的代谢, 确定HPPH能作光敏诊断及光动力学治疗, 注药0.3 mg/kg、注药后12～24 h是较佳的光敏诊断及光动力学治疗的剂量及时间。

目的: 探讨HPPH光动力治疗对鼠G422 脑胶质瘤突变型p53蛋白和p16蛋白表达的影响并和HpD做比较。方法: 建立鼠G422脑胶质瘤皮下移植瘤模型, 设立空白对照组、单注射HPPH组(0.45 mg/kg)、单665 nm激光照射组、HPPH-PDT组(0.15 mg/kg组、 0.3 mg/kg组、 0.45 mg/kg组)、 HpD-PDT组(5 mg/kg)。单注射HPPH组、HPPH-PDT组和HpD-PDT组自尾静脉推注入光敏剂, 24 h后以波长665 nm的半导体激光照射HPPH-PDT组和单激光组肿瘤, 功率密度200 mW/cm2, 每光斑照射17 min, 能量密度为204 J/cm2; 以波长630 nm的半导体激光照射HpD-PDT组肿瘤, 功率密度200 mW/cm2, 每光斑照射20 min, 能量密度为240 J/cm2。于PDT后9 d处死鼠行酶联免疫吸附法(ELISA)的双抗体夹心法检测HPPH-PDT和HpD-PDT后突变型p53蛋白(mutant type p53 protein, mtp53)和p16蛋白表达变化。结果: 空白、单注药和单照光三组对照组之间mtp53蛋白和p16蛋白表达值两两比较, 差异无统计学意义(P>0.05)。HPPH-PDT各剂量组与空白对照组比较, mtp53蛋白表达值明显降低, p16蛋白表达值明显升高, 差异有统计学意义(P<0.01)。0.3 mg/kg组和0.45 mg/kg组与0.15 mg/kg组相比, mtp53蛋白表达值降低, p16蛋白表达值升高, 差异有统计学意义(P<0.05), 0.45 mg/kg 组mtp53蛋白表达值稍低于0.3 mg/kg组, p16蛋白表达值稍高于0.3mg/kg组, 差异无统计学意义(P>0.05)。HPPH-PDT0.3 mg/kg组和0.45 mg/kg 组的mtp53蛋白表达值低于HpD-PDT组, p16蛋白表达值高于HpD-PDT组, 差异有统计学意义(P<0.05)。结论: HPPH-PDT0.3mg/kg是适宜的HPPH剂量。HPPH-PDT诱导mtp53蛋白表达降低, p16蛋白表达升高。与HpD-PDT相比, HPPH-PDTmtp53蛋白表达更低, p16蛋白表达更高。

通过鼠G422胶质瘤研究确定ALA联合小剂量HPD激光光动力疗法促使肿瘤细胞凋亡及死亡的光敏药用药剂量及与两者单独使用的差别。方法:以不同剂量的HPD(1、2、3、4、5 mg/kg)、ALA(20、40、60、80、160 mg/kg)、两者联合口服与静脉注射鼠G422脑胶质瘤瘤模型,随后以630nm半导体激光200mW/cm2照射肿瘤,照射20分钟,及与不用光敏剂单照激光、单用光敏剂不照光、不用光敏剂不照激光空白对照组比较。以流式细胞仪、电镜观察促使肿瘤细胞凋亡或死亡的差别,病理,肿瘤生长曲线观察治疗肿瘤,促使肿瘤细胞凋亡及死亡的最小合适剂量。结果:HPD1-2mg/kg联合ALA40-60 mg/kg给药,630半导体激光200mW/cm2,照射20分钟组,从流式细胞仪测定细胞凋亡、死亡及电镜、病理及肿瘤生长曲线形态学观察,其是能达到较佳的细胞凋亡、死亡的最小、合适的光敏剂剂量。单纯ALA-PDT组中能达到鼠G422胶质瘤细胞明显凋亡的最小剂量是ALA(80-160mg/kg),单纯HPD-PDT组是HPD4-5mg/kg。结论:HPD1-2mg/kg配合ALA40-60mg/kg,630半导体激光200mW/cm2,照射20分钟是能达到鼠G422胶质瘤细胞明显凋亡死亡,治疗肿瘤合适的最小光敏剂剂量。