目的: 通过白癜风豚鼠模型, 观察308 nm准分子光的疗效及对Treg、Thl7细胞的影响, 探讨紫外光疗机制中的免疫学通路。方法: 通过文件检索使用化学脱色法制备白癜风豚鼠模型并筛选造模成功的小鼠作为实验对象, 将小鼠分为实验组和对照组, 另选取相同数量的健康小鼠作为空白组, 对实验组进行308 nm准分子光的干预治疗, 造模成功的对照组以及健康小鼠的空白组均不予以处理, 10周后分别从肉眼复色程度、组织病理及免疫组化结果中的改变、mRNA以及蛋白表达的水平观察IL-17细胞和Treg细胞在三组之间的实验过程中的变化趋势。结果: 308准分子光对白癜风豚鼠模型达到治疗效果, 经过10周治疗后, 5只豚鼠达到完全复色。在组织病理中, 白癜风模型组豚鼠皮损中表皮黑素细胞减少, 伴随真皮淋巴细胞浸润。治疗后, 从组织学水平观察到, 黑素细胞的增多, 以及淋巴细胞浸润减少。免疫组织化学染色对皮损中IL-17标记可见, 造模成功组中真皮层可见阳性结果的出现, 此模型可用于本课题的研究。通过对皮损中IL-17及Foxp3的mRNA及蛋白表达水平定量检测发现, 模型组IL-17表达升高, Foxp3表达降低, 治疗后IL-17表达水平降低, Foxp3表达水平升高。结论: 308 nm准分子光疗可以通过降低豚鼠白癜风皮损中Th17细胞水平, 升高Treg细胞水平调节皮损中Th17和Treg细胞的平衡紊乱。

目的: 通过靶向CTLA4 siRNA探讨CTLA4在T调节细胞诱导异种抗原免疫耐受中是否发挥功能及其作用机制。方法: 体外扩增培养利用磁珠分选出的T调节细胞, AO/PI染色计算活率并通过细胞计数作出生长曲线, 流式细胞仪检测扩增后细胞表型; 采用Alex488染料标记siRNA, 通过流式细胞仪检测siRNA的转染效率; 实时定量 PCR检测靶向CTLA4 siRNA的沉默效率; 流式细胞术检测CTLA4 在蛋白水平的变化; 混合淋巴实验检测CTLA4表达下调后, T调节细胞的功能变化。结果: 经过4周体外扩增, T调节细胞能够增长约1 200倍, 并具有高活率和高纯度; siRNA的转染效率为61.8%± 4.5%; Realtime PCR和流式细胞术检测CTLA4在mRNA水平和蛋白水平均有不同程度下降, 其结果与对照组相比差异显著 （P<0.05）; 混合淋巴实验结果显示T效应细胞在受到异种抗原刺激时会发生增殖, Treg细胞能够抑制这种增殖, 但是CTLA4表达下调后明显减弱了T调节细胞的抑制能力。进一步, 在DC细胞参与的混合淋巴实验中发现Treg能够通过DC抑制T效应细胞对异种抗原的应答, 而siCTLA4-Treg不能通过DC抑制T效应细胞增殖。结论: CTLA4在Treg介导的异种免疫应答中发挥着重要作用, 这种作用方式可能是通过直接作用于T效应细胞或者间接通过DC细胞作用于T效应细胞发挥作用。靶向CTLA4 siRNA能够下调Treg 细胞CTLA4的表达, 影响Treg细胞抑制异种抗原引起T效应细胞应答的能力。