程序性死亡受体 1（PD-1）/程序性死亡配体 1（PD-L1）信号通路主要参与免疫负调控作用，且在许多类型的肿瘤的恶性发展中具有关键作用。 PD-L1的高表达可促进肝细胞癌（ HCC）的侵袭，提高肿瘤复发的风险。另外， PD-L1常作为免疫检查点的阻断靶点，主要通过单抗将其中和，引发抗肿瘤免疫反应。因此， PD-L1是 HCC免疫治疗中极具潜力的靶点之一。本文主要探究纳米级功能化氧化石墨烯（ GO-PEI-PEG）携带 PD-L1 siRNA对肝癌细胞的恶性生物学行为的影响。研究结果显示，将 GO-PEI-PEG/PD-L1 siRNA转染至 MHCC97H细胞后，细胞的增殖和迁移均被抑制，细胞周期阻滞在 G1期，且细胞凋亡的数目增多。进一步研究发现， GO-PEI-PEG/PD-L1 siRNA对 MHCC97H细胞的抑制作用是通过阻碍 AKT信号通路激活实现的。这些试验结果表明， GO-PEI-PEG具备优秀的递送性能，携带 PD-L1 siRNA可有效干扰 PD-L1表达，进而抑制肝癌细胞的恶性生物学行为，这为治疗 HCC提供了更安全、有效的递送新策略。

目的: 通过靶向CTLA4 siRNA探讨CTLA4在T调节细胞诱导异种抗原免疫耐受中是否发挥功能及其作用机制。方法: 体外扩增培养利用磁珠分选出的T调节细胞, AO/PI染色计算活率并通过细胞计数作出生长曲线, 流式细胞仪检测扩增后细胞表型; 采用Alex488染料标记siRNA, 通过流式细胞仪检测siRNA的转染效率; 实时定量 PCR检测靶向CTLA4 siRNA的沉默效率; 流式细胞术检测CTLA4 在蛋白水平的变化; 混合淋巴实验检测CTLA4表达下调后, T调节细胞的功能变化。结果: 经过4周体外扩增, T调节细胞能够增长约1 200倍, 并具有高活率和高纯度; siRNA的转染效率为61.8%± 4.5%; Realtime PCR和流式细胞术检测CTLA4在mRNA水平和蛋白水平均有不同程度下降, 其结果与对照组相比差异显著 （P<0.05）; 混合淋巴实验结果显示T效应细胞在受到异种抗原刺激时会发生增殖, Treg细胞能够抑制这种增殖, 但是CTLA4表达下调后明显减弱了T调节细胞的抑制能力。进一步, 在DC细胞参与的混合淋巴实验中发现Treg能够通过DC抑制T效应细胞对异种抗原的应答, 而siCTLA4-Treg不能通过DC抑制T效应细胞增殖。结论: CTLA4在Treg介导的异种免疫应答中发挥着重要作用, 这种作用方式可能是通过直接作用于T效应细胞或者间接通过DC细胞作用于T效应细胞发挥作用。靶向CTLA4 siRNA能够下调Treg 细胞CTLA4的表达, 影响Treg细胞抑制异种抗原引起T效应细胞应答的能力。

运用RNA干扰技术(RNA interference RNAi)构建pSUPER.retro-Smyd1真核表达质粒, 经鉴定后用脂质体法转染H9c2细胞, 通过G418筛选出稳定表达pSUPER.retro-Smyd1的细胞系, 最后经Western blot及RT-PCR实验鉴定其干扰效果。经鉴定, 通过H9c2细胞系构建的pSUPER.retro-Smyd1干扰细胞系的干扰效果显著。因此, 本实验成功构建了Smyd1干扰真核表达质粒及其稳定转染的H9c2细胞系, 为进一步研究Smyd1基因在心脏发育中的作用奠定了良好的实验基础。

蛋白激酶CK2是一个丝氨酸/苏氨酸特异性的激酶,通常以异源四聚体形式存在,由两个催化亚基(CK2α和CK2α')和两个调节亚基CK2β组成.CK2激酶α亚基含有和其它蛋白激酶的催化功能域同源的激酶功能域.CK2激酶β亚基在调节a亚基的基本活性方面起着很复杂的作用.通过CK2β的结合活性,CK2α改变它的活性和作用底物.本研究成功的表达和纯化了CK2β蛋白,并且构建了CK2β的SiRNA载体,为其进一步功能研究做好准备.