1 西安交通大学医学院第一附属医院普外科, 陕西 西安 710061
2 北京大学化学与分子工程学院, 北京 100871
探索红外光谱监测肿瘤细胞凋亡的可行性及初步分析。 采用结肠癌细胞系SW620作为诱导细胞模型, MTT法确定最优5-FU诱导浓度, 无血清饥饿培养协同细胞周期阻滞在G1和S期, 傅里叶显微红外光谱仪(FTIR) 联合流式细胞仪(FCM)对SW 620细胞和凋亡的SW 620细胞12 h、 早期凋亡(24 h)和晚期凋亡(48 h)的峰位、 相对峰强等指标进行比较分析。 光谱分析结果显示SW 620对比凋亡细胞有以下特征: (1)与脂类相关谱带1 740 cm-1相对峰强比I1 740/I1 460明显降低(p<0.05), 表明凋亡细胞中脂类相对含量增多。 (2)与氨基酸残基相关谱带1 410 cm-1, I1 460/I1 460在凋亡早期和晚期明显升高(p<0.05), 与丝、 苏氨基酸相关谱带1 120 cm-1 向高波数移动, I1 120/I1 460明显升高(p<0.05), 表明凋亡细胞中DNA双螺旋解链, 氨基酸残基增多。 (3)DNA的反对称伸缩1 240 cm-1向高波数移动, 表明凋亡细胞中核酸分子构象发生改变。 (4)与核酸多糖1 040 cm-1相关谱带在凋亡的24和48 h出现, 向高波数移动, I1 040/I1 460在凋亡晚期降低(p<0.05)。 初步研究结果表明傅里叶变换红外光谱分析可能成为实时无创监测肿瘤化疗的有效方法。
结肠癌 细胞周期 细胞凋亡 红外光谱 化疗 Colon cancer Cell cycle Apoptosis FTIR Chemotherapy 光谱学与光谱分析
2013, 33(12): 3169
1 华南师范大学 广东省微纳光子功能材料与器件重点实验室, 广东 广州510006
2 Laboratoire de Physicochimie de lAtmosphère, Université du Littoral Cte d'Opale, Dunkerque, France
为了寻找结肠癌的病理发展规律在拉曼光谱属性上的体现, 采用共聚焦显微拉曼光谱仪对60例离体的正常结肠组织、腺瘤性息肉和腺癌组织的近红外拉曼光谱进行对比检测, 初步探讨了三类组织的拉曼光谱特征及其改变的规律。结果表明: 三类组织拉曼光谱的差异明显存在于830, 855, 1 032, 1 210, 1 323, 1 335, 1 445, 1 450, 1 655 cm-1处, 腺瘤性息肉的光谱大体位于正常组织与腺癌组织之间。以组织病理诊断为金标准, 主成分分析结合线性判别分析技术建立的诊断算法区分3类组织的灵敏度分别为96.9%、85.7%和97.3%, 特异性分别为82.8%、90%和92.3%。因此, 拉曼光谱有潜力在分子水平上区分正常结肠组织、腺瘤性息肉和腺癌组织, 有望成为结肠癌早期诊断的一种有效方法。
结肠癌 腺瘤性息肉 拉曼光谱 colon cancer adenomatous polyp Raman spectroscopy
1 华南师范大学生物光子学研究院激光生命科学研究所、暨激光生命科学教育部重点实验室, 广东 广州 510631
2 广州医学院医学遗传与细胞生物学教研室, 广东 广州 510182
针对传统电泳检测方法存在操作复杂、费时等缺点, 提出一种用于检测K-ras癌基因点突变的实时荧光等位基因特异性扩增(Allele specific amplification, ASA)方法。该法采用突变型引物对结肠癌基因组中的K-ras基因进行等位基因特异性扩增, 只有突变型样品能被顺利扩增出双链DNA产物, 该产物能与双链DNA染料SYBR Green Ⅰ结合, 产生荧光信号从而被检测到。通过对荧光域值和溶解曲线分析来区分不同的基因突变类型。该法可以检测到野生型DNA中含量为1/1 000的突变型DNA, 整个检测时间小于1 h。我们用该法检测31例结肠癌样品中K-ras基因密码子12发生的点突变, 其中有15例检出为阳性。此外, 还采用等位基因特异性扩增结合电泳分析对样品进行了检测, 并对两种方法进行了比较。结果显示: 实时荧光等位基因特异性扩增方法具有操作简便、快速、检测成本低等优点, 为临床诊断基因突变引起的疾病提供了一种可行的手段。
实时荧光等位基因特异性扩增 SYBR Green Ⅰ染料 结肠癌 K-ras癌基因 点突变 real-time fluorescence allele-specific amplificati SYBR Green Ⅰ colorectal cancer K-ras oncogene point mutation
1 福建师范大学医学光电科学与技术教育部重点实验室， 福建省光子技术重点实验室， 福建 福州 350007
2 福建医科大学教学医院福建省肿瘤医院， 福建 福州 350014
3 福建省肿瘤医院病理科， 福建 福州 350014
通过表面增强拉曼散射（SERS）标记抗体检测结肠癌组织切片上癌胚抗原（CEA）的表达，探讨SERS标记免疫检测技术用于临床分析结肠癌组织切片中蛋白质表达的可行性。采用种子生长法合成Ag壳Au核复合纳米粒子，将4-巯基苯甲酸（4-MBA）作为标记分子吸附于纳米粒子表面，制备出SERS探针；再将这种探针与CEA单克隆抗体相结合形成SERS免疫探针；最后通过SERS标记的抗体与结肠癌组织切片上相应的抗原发生特异性结合，对滴加探针的组织切片进行SERS检测和成像。结肠癌腺上皮出现很强的SERS信号，而除了少数非特异性吸附产生的信号之外，间质及正常上皮中几乎不出现SERS信号。通过SERS成像可以清晰地看到结肠癌腺上皮显示红色，表明结肠癌腺上皮高表达CEA，而间质及正常上皮几乎显示黑色和深蓝色，只有极个别点为红色，表明间质及正常上皮基本不表达CEA。研究表明，SERS标记抗体检测分析技术具有高灵敏度和高特异性，有望应用于结肠癌组织切片中蛋白质表达的分析，成为结肠癌辅助诊断的一种重要方法。
光谱学 表面增强拉曼散射 免疫分析 纳米粒子 表面增强拉曼散射成像 结肠癌 组织切片
华南师范大学激光生命科学研究所、暨激光生命科学教育部重点实验室,广东,广州,510631
发展了一种可用于快速检测K-ras癌基因点突变的电化学发光PCR(ECL-PCR)分析方法,该法采用三联吡啶钌标记的上游引物和生物素标记的下游引物对目的片段进行PCR扩增;随后,采用限制性内切酶MvaI对扩增产物进行酶切,由于突变导致酶切位点的丢失,所以只有野生型样品能被切断;通过生物素与链霉亲和素包被的磁珠连接,将生物素标记的DNA片段收集到反应池中进行电化学发光检测.采用该法对20例结肠癌组织中的K-ras癌基因第12位密码子进行点突变分析,得出其中有9例存在点突变,点突变率为45 %.该方法操作简便、安全、快速、灵敏,可用于快速检测K-ras癌基因点突变.
电化学发光PCR 结肠癌 K-ras癌基因 点突变 electrochemiluminescence-polymerase chain reaction K-ras oncogene point mutation colorectal cancer
