降钙素原(Procalcitonin, PCT)对于反映患者炎症甚至败血症患病程度具有重要意义。为实现低浓度PCT的免标记检测, 利用极大倾角光纤光栅(Excessively Tilted Fiber Grating, Ex-TFG)的低温度交叉敏感性和高折射率灵敏度的优点, 在光纤的表面修饰金黄色葡萄球菌(Staphylococcus Aureus Protein A, SPA), 再将PCT单克隆抗体固定在SPA分子层, 从而构成对PCT具有特异性检测功能的免疫传感器。实验结果表明: 降钙素原含量为0.5ng/mL时, 谐振波长红移约13pm; PCT的浓度为200ng/mL时, Ex-TFG的红移量基达约125pm; 浓度为1000ng/mL时, 红移量趋于饱和, 最大红移量约150pm。通过对实验数据拟合, 发现Ex-TFG谐振波长的红移量与PCT浓度之间的关系满足Langmuir模型, 相关性系数为0.98。该方法为低浓度PCT的检测提供了一种免标记、快速的检测方法。

目的: 高效表达与纯化可溶性重组人PCT蛋白, 制备高灵敏度和高特异性的抗人PCT医用诊断单克隆抗体。 方法: 大肠杆菌表达重组人PCT蛋白后, 利用饱和硫酸铵沉淀和亲和层析方法纯化PCT蛋白后, 经质谱、Western blot和间接 ELISA法进行性质鉴定和分析重组蛋白的表达与免疫反应性; 重组蛋白免疫小鼠, 经细胞融合及筛选制备抗PCT单克隆抗体(mAb)。 结果:在大肠杆菌中高效表达了人PCT蛋白; 重组人PCT蛋白具有良好的免疫反应性与免疫原性; 经筛选获得7株抗PCT单克隆抗体细胞株, 经ELISA鉴定, 筛选抗体可与PCT抗原有良好的特异性反应。 结论: 利用重组人PCT蛋白免疫制备了抗人PCT单克隆抗体, 为进一步研发PCT快速诊断试剂提供了原料。