目的: 制备分泌特异性抗人甲状腺球蛋白(thyroglobulin,Tg)单克隆抗体的杂交瘤细胞株, 为建立高灵敏度的Tg检测方法做准备。方法: 以天然人源甲状腺球蛋白为抗原经皮下免疫BALB/c小鼠, 通过细胞融合制备分泌抗人甲状腺球蛋白单克隆抗体, 并对其进行特异性鉴定, 建立检测Tg的双抗体ELISA(enzyme-linked immunosorbent assay)夹心法。结果: 获得7株可稳定分泌抗人甲状腺球蛋白单克隆抗体的杂交瘤细胞株, 经ELISA鉴定, 筛选抗体可与Tg抗原有良好的特异性反应。建立的双抗体夹心ELISA方法敏感性可达1 ng/mL。 结论: 成功制备了抗人Tg单克隆抗体并建立了检测人Tg双抗体夹心ELISA方法, 为进一步研发Tg快速诊断试剂盒提供了原料。

为分析不同饲料喂养对黄牛胃中微生物群落结构的影响, 分别用芒草单一喂养和农家混合饲料喂养两年的黄牛为实验组和对照组。以瘤胃、蜂巢胃、重瓣胃和皱胃四个胃中的微生物为研究对象,采用原位包埋裂解法和脉冲场电泳（pulsed field gel electrophoresis, PFGE）提取微生物总DNA, 脉冲场电泳（pulsed field gel electrophoresis, PFGE）。使用细菌16S rRNA引物341F/534R及真菌18S rDNA引物NS1/GCFungi进行降落PCR扩增。变性梯度凝胶电泳（denaturing gradient gel electrophoresis,DGGE）对扩增产物进行区分,使用硝酸银染色。电泳扫描结果通过Quantity one软件进行分析, SPSS软件进行数据统计。针对实验组和对照组瘤胃样品共性条带和特性条带测序并比对。结果表明: 实验组与对照组细菌群落结构变化较大, UPGAM聚类图上被分为两支, 相似性只有0.35。且香农多样性指数及条带丰度都明显少于对照组。真菌DGGE图谱条带差别不大, 聚类图上显示实验组四个样品与对照组四个样品相似性在0.43～0.68之间。多样性及条带丰度在实验组与对照组之间差异0.0027～0.5999。测序结果, 细菌与数据库中未培养细菌种类较为接近, 而真菌中部分与已知菌种接近。芒草单一饲养对牛胃中的微生物群落结构具有极大的影响, 对细菌的影响尤为明显。

目的: 高效表达与纯化可溶性重组人PCT蛋白, 制备高灵敏度和高特异性的抗人PCT医用诊断单克隆抗体。 方法: 大肠杆菌表达重组人PCT蛋白后, 利用饱和硫酸铵沉淀和亲和层析方法纯化PCT蛋白后, 经质谱、Western blot和间接 ELISA法进行性质鉴定和分析重组蛋白的表达与免疫反应性; 重组蛋白免疫小鼠, 经细胞融合及筛选制备抗PCT单克隆抗体(mAb)。 结果:在大肠杆菌中高效表达了人PCT蛋白; 重组人PCT蛋白具有良好的免疫反应性与免疫原性; 经筛选获得7株抗PCT单克隆抗体细胞株, 经ELISA鉴定, 筛选抗体可与PCT抗原有良好的特异性反应。 结论: 利用重组人PCT蛋白免疫制备了抗人PCT单克隆抗体, 为进一步研发PCT快速诊断试剂提供了原料。

人类巨细胞病毒(Human cytomegalovirus, HCMV)是一种机会性感染疱疹病毒, 在人群中感染比较常见, 但在免疫缺陷个体与新生儿中可引起严重的疾病。HCMV Pp65是HCMV活动感染的主要标志, 也是临床检验检测HCMV感染的重要靶标。为研发抗HCMV Pp65蛋白单克隆抗体作为临床免疫检测HCMV感染的关键原料, 本研究采用重组表达的HCMV Pp65蛋白免疫BALB/c小鼠, 将免疫小鼠淋巴结细胞与sp2/0细胞融合, 采用间接ELISA法筛选阳性克隆与效价测定, 再用Western blotting 进行抗体特异性鉴定, 最后用免疫捕获PCR和免疫荧光法评价其应用前景。最终获得了1株能稳定分泌高效价的抗HCMV Pp65单克隆抗体的杂交瘤细胞株, 命名为8D6。Western blotting及间接ELISA检测其效价分别达1∶4 000 和1∶105; 细胞免疫荧光与免疫捕获PCR实验结果说明, 该杂交瘤细胞株分泌的单克隆抗体具有良好的亲和力和特异性, 具有作为外周血细胞免疫荧光细胞化学和免疫捕获PCR检测HCMV临床感染的关键原料, 也可作为双抗体夹心法检测HCMV临床感染的关键原料, 为建立HCMV感染快速灵敏的临床诊断试剂打下了重要的基础。

为获得分泌抗人β-actin蛋白单克隆抗体(McAb)的杂交瘤细胞, 通过在大肠杆菌中原核表达人β-actin蛋白, 以纯化的人β-actin蛋白作为抗原免疫BALB/c小鼠。经过细胞的融合及筛选获得1株能稳定分泌抗人β-actin蛋白McAb的杂交瘤细胞, 命名为2B4。采用间接ELISA和Western blot方法对McAb的特异性、稳定性和适用范围进行鉴定。结果显示: 蛋白的相对分子质量为43 kDa, 可溶于8 mol/L尿素; 杂交瘤细胞上清的抗体效价为1×105, 腹水的抗体效价为1×107; 间接ELISA结果表明, 杂交瘤细胞在体外传20代或液氮冻存3个月后, 分泌的抗体效价不变; 37 ℃保存24 h后, 抗体的效价开始下降。Western blot结果显示, 单克隆抗体识别人、鼠、兔和鱼的β-actin蛋白, 与其发生特异性反应。2B4分泌的单克隆抗体可以广泛的应用于细胞生物学和免疫学试验, 具有良好的应用价值。