1 西南科技大学生命科学与工程学院,四川,绵阳,621010
2 甘肃亚盛集团博士后科研工作站北京分站,北京,100101
以水稻基因组DNA为模板,用PCR方法克隆了水稻谷蛋白基因Gt1的启动子序列,并将其构建到带有绿色荧光蛋白基因(gfp)的植物表达载体上,用微束激光穿刺法转化玉米的受体组织,通过外源基因瞬时表达的方法验证了该启动子的功能,结果表明在胚乳中有较强的表达,而在其它组织中表达很弱;证明了水稻谷蛋白基因Gt1的启动子在不同物种玉米中同样具有胚乳特异表达的功能.为这一胚乳特异启动子的广泛利用提供了理论依据.
Gt1基因 启动子 微束激光 转基因
1 甘肃农业大学农学院,甘肃,兰州,730070
2 亚盛集团博士后科研工作站北京分站,北京,100101
针对马铃薯生产中危害严重、分布广泛并且具有强烈协生作用的马铃薯X病毒和马铃薯Y病毒,开展了抗病毒病的育种研究.采用RT-PCR技术分别克隆了267 bp的编码马铃薯X病毒外壳蛋白(PVX-cp)基因的相对保守区段X和294 bp的编码马铃薯Y病毒外壳蛋白(PVY-cp)基因的相对保守区段Y两个片段,将其按顺序连接,形成融合基因XY,然后分别将融合基因XY正向和反向插入到载体pHANNIBAL中,得到了载体pHIV,再用NotI对pHIV进行酶切,将产生的大片段插入到载体pART27中,得到同时以PVX-cp基因和PVY-cp基因为靶标的XY的RNAi载体pARIV.采用微束激光穿刺转化技术转化马铃薯品种Favorita的愈伤组织,得到了14株表型正常的转基因植株,转基因植株的southern blot分析表明,导入的外源融合基因拷贝数介于2～4之间.攻毒实验表明,其中11株转基因植株对PVX、PVY°以及PVX和PVY°混合侵染均表现免疫,而其它3株的病毒浓度也低于对照.这一结果将为利用RNAi干涉技术开展植物抗多种病毒病的育种提供重要依据,验证了所构建的RNA干涉(RNA interference RNAi)载体具有良好的功能,同时又一次证明微束激光穿刺法是一种有效的遗传转化手段.
RNA干涉 马铃薯X病毒 马铃薯Y病毒 融合基因 微束激光穿刺技术
1 新疆农业大学农学院,新疆,乌鲁木齐,830052
2 甘肃亚盛集团博士后科研工作站北京分站,北京,100101
3 甘肃农业大学农学院,甘肃,兰州,730070
以棉花感受态萌动种胚作为外源基因转化的受体,用激光微束穿刺法将β-1,3-葡聚糖酶及几丁质酶双价基因导入棉花,所构建的植物表达载体pBIBGC携带有筛选标记npt-Ⅱ(新霉素磷酸转移酶)基因.激光转化处理的种胚经卡那霉素筛选,已经获得抗性小植株.研究了微束激光转化法用于棉花感受态萌动胚转化预培养的时间、高渗液对材料的处理等.研究表明:用微束激光转化处理种胚是一种操作简便、重复性好的转化方法,用该法可将外源基因导入植物感受态萌动胚,避开植株离体再生的困难.
微束激光 3-葡聚糖酶基因 几丁质酶基因 感受态萌动种胚 转化 β-1
1 北京师范大学生命科学学院,中国,北京,100875
2 新疆农业大学农学院,中国新疆,乌鲁木齐,830052
3 甘肃亚盛集团博士后科研工作站北京分站,中国,北京,100101
本文概述了近年来激光微束在染色体微切割和微分离、分子细胞生物学、去除细胞壁、诱导原生质体融合等方面的应用,并对其今后的应用前景作了展望.
激光微束 染色体微切割 分子细胞生物学 原生质体融合 laser microbeam chromosome microdissection molecular cell biology protoplast fusion
利用激光微束穿刺法将苏云金芽孢杆菌的毒蛋白(δ-endotoxin)基因导入了油菜,经聚合酶催化链式反应(PCR)和PCRSouthern杂交证明抗虫基因已导入油菜基因组中并能在T1代得到遗传。对转基因植株进行了抗虫性测试,结果表明某些植株具有较好的抗虫性,并且这种抗虫性在T1代仍能保持。实验结果表明抗虫基因已整合进油菜基因组并得到了稳定的遗传。
激光微束穿刺 抗虫基因 油菜 转基因植株 T1代
1 中国科学院遗传研究所 北京 100101
2 新疆农科院经济作物研究所 乌鲁木齐 830000
3 中国科学院微生物研究所 北京 100080
4 新疆维吾尔自治区种子总站 乌鲁木齐 830000
5 新疆石河子大学农学院 石河子832003
通过激光微束穿刺法，将β-1,3-葡聚糖酶及几丁质酶基因双价植物表达载体pBLGC导入棉花幼胚。转化一代棉花幼苗用蘸根法进行抗黄萎病筛选，将存活的苗移入病圃进行了卡那霉素(Kan 1%)抗性测定。结果表明，在移栽的29株幼苗中，有9株表现出明显的Kan抗性，对9株抗Kan植株进行了PCR检测，结果显示，其中7株表现为阳性。病圃中的T1代转基因植株在经历了黄萎病发病高峰期后，7株PCR阳性植株表现明显抗病，并已正常开花结铃，其他T1代植株及对照植株全部因后期发病死亡。这初步证明外源基因已整合到棉花基因组中，且使转基因植株对黄萎病表现出一定的抗性。
激光微束 3-葡聚糖酶基因 几丁质酶基因 棉花幼胚 黄萎病
采用激光微束穿刺法将损伤诱导型启动子控制之下的商陆抗病毒蛋白(PAP)CDNA导入了甘蓝型油菜(BrassicanapusL．)双低品种H165,经庆大霉素筛选,获得了抗性再生植株。PCR扩增检测及Southern杂交分析表明,PAPcDNA连同损伤诱导型启动子已稳定整合至受体基因组,转化效率为1．7％。攻毒实验表明,转基因油菜植株对供试病毒芜菁花叶叶(TuMV)具有较高抵抗能力。
激光微束穿刺 商陆抗病毒蛋白(PAP)cDNA 转基因甘蓝型油菜
以适当参数的Nd:YAG激光微束切割大麦7H染色体后再利用微细玻璃针挑取了7HS端部片段并放入Eppendorf管中, 建立了一种激光微束与玻璃针结合使用微切割、微分离植物染色体片段的方法, 为今后植物染色体特定区域DNA的微克隆技术提供了一种新的方法。
大麦 染色体微切割 Nd:YAG激光微束
利用激光微束穿刺法将pBI121质粒DNA导入百脉根。该方法是用高渗缓冲液对百脉根子叶进行预处理,通过激光微束对子叶细胞进行穿刺,然后在卡那霉素培养基上筛选出具抗性的绿色小苗。转化植物在含卡那霉素浓度为100 μg/ml条件下筛选培养三代后,获四株转基因植物,取其中两株进行总DNA PCR扩增分析,皆为阳性。证实GUS基因已导入百脉根中。通过研究建立了激光微束穿刺法转化百脉根的技术体系,从而证明该转化方法操作简便,重复性好,转化频率较高,为高等植物遗传转化提供了一个新途径。
激光微束 高渗缓冲液 转基因植物 GUS基因
本实验对新型光敏剂——竹红菌素加激光辐照对体外培养细胞PTK2和HeLa的杀伤力进行了研究,同时还对竹红菌素的吸收光谱和高效液相色谱分析(HPLC)层析结果进行了分析。结果表明竹红菌素可能是一种有效的光动力学反应的光敏剂。
激光显微照射 人宫颈癌细胞株(HeLa) 血卟啉衍生物(HPD) 竹红菌素 长鼻(鼠菐)肾上皮细胞株
