本文以亚心形扁藻为样品, 波长1 341 nm的Nd∶YAP激光为光源, 通过激光共聚焦扫描显微技术, 研究Nd∶YAP激光辐照亚心形扁藻对亚心形扁藻叶绿体自体荧光强度和叶绿体面积大小的影响。Nd∶YAP激光辐照后的亚心形扁藻通过488 nm Ar+激光激发获得亚心形扁藻自体荧光图像及其荧光光谱。结果表明,试验中除(10 W, 60 s)辐照剂量组外, 其余辐照剂量组均提高了亚心形扁藻的自体荧光强度, 且所有的辐照剂量组均增大了亚心形扁藻的叶绿体面积。Nd∶YAP激光可刺激亚心形扁藻的叶绿体发育, 促进藻细胞的生长, 改善叶绿体光合作用的活性。

To investigate the effect of Myocardin-related transcription factor A (MRTF-A) on apoptosis induced by ischemic/reperfusion (I/R), middle cerebral artery occlusion /reperfusion (MCAO/R) in rats were applied to mimic I/R. The neurological deficit score, cerebral infarct size, cortical neuron apoptosis and cleaved caspase 3 level were evaluated to determine the effect and the level of apoptosis by TTC straining, terminal deoxynucleotidyl transferase dUTP nick end labeling (TUNEL) straining, Western blot and immunofluorescence staining. The myeloid cell leukemia-1 (Mcl-1) expression, release of cytochrome C (Cyt C) and its colocalization with apoptotic protease activating factor-1 (Apaf-1) were analyzed by quantitative real-time PCR (qRT-PCR), Western blot, and immunofluorescence staining. The results showed that MRTF-A overexpression could decrease the neurological deficit score and reduce cerebral infarct size (P < 0.01 versus Sham). In the MRTF-A-I/R group, TUNEL-positive cells and apoptosis ratio (%) (51.61 ± 6.17%) were significantly decreased compared to the Neg-I/R group (76.45 ± 8.77%) at 24 h reperfusion. Meanwhile, the cleaved caspase 3 expression revealed a similar trend while the expression of Mcl-1 was the opposite. Moreover, MRTF-A overexpression significantly enhanced Mcl-1 fluorescence intensity, which up-regulated the mRNA and protein level (P < 0.05 or P < 0.01 versus Neg-I/R). Furthermore, MRTF-A overexpression markedly inhibited the release of Cyt C, and decreased the colocalization with Apaf-1 in the cytoplasm (P < 0.05 or P < 0.01 versus Neg-I/R). All the data indicated that MRTF-A overexpression could improve the neurological function against cerebral I/R-induced apoptosis since underlying mechanism might be involved in the Mcl-1/Cyt C/cleaved caspase 3 signaling pathway.

为了合理评定激光扫描共聚焦显微镜(Laser Scanning Confocal Microscope, LSCM)的测量性能, 提出了一种用于检验LSCM计量特性的测试方法。首先, 依据LSCM成像原理, 对其技术特点, 特别是轴向分辨率和横向分辨率等进行了理论分析; 然后对其计量特性的参数指标进行了归纳, 并提出相应的性能测试方法。具体包括采用线间隔为微纳米级的网格板等作为标准器, 测试LSCM的放大倍数和光学横向分辨率; 采用纳米级高度台阶样板测试LSCM的光学轴向分辨率和轴向定位特性; 采用激光干涉仪测试样品台工作性能等。实验证明: 该方法能够满足当前普遍应用的LSCM的性能测试需求。

分析和比对钙结合蛋白CIB1在人类、大鼠、小鼠中氨基酸序列差异, 并研究CIB1蛋白在293T细胞中的表达及亚细胞定位情况。通过Western Blot分析发现293T细胞本身几乎检测不到CIB1的表达。进一步采用CIB1外源性质粒转染, 通过免疫荧光分析实验, 在激光共聚焦显微镜下观察转染后不同时间293T细胞中CIB1的表达情况及亚细胞定位变化。实验结果表明, 随着转染时间的增加, CIB1在293T细胞中的表达有逐渐增强的趋势, 并且发生从细胞核向细胞质的转位现象。该实验结果对了解CIB1亚细胞定位变化及功能研究具有重要参考价值。

使用激光共聚焦扫描显微镜,对六种品牌和型号的激光打印机分别在打印纸和高光相纸上打印的图文墨粉厚度进行测量。结果表明,测量普通打印纸张上激光打印形成墨粉厚度时,测量数据因纸张纤维凹凸不平的影响有一定波动,相纸上激光打印形成的墨粉厚度测量数据相对稳定,并总结出随着打印文件图文线条宽度与墨粉厚度的变化规律。实验表明激光打印文件墨粉厚度的数据测量具有可行性,同一台激光打印机的打印文件墨粉厚度相对稳定,该指标作为一种重要参数可以为激光打印文件检验提供量化依据,并为打印机的同一认定提供依据。

为研究动脉粥样硬化中单核细胞膜流动性的变化, 本实验选用20只新西兰白兔建立动物粥样硬化模型, 提取模型组与对照组兔外周血中单核细胞, 通过荧光漂白恢复技术检测单核细胞膜流动性, 并结合动脉粥样硬化动物模型病理切片揭示其与动脉粥样硬化相关性。结果显示动物动脉粥样硬化模型建立成功, 模型组单核细胞膜的荧光恢复率和扩散系数均低于对照组。本研究揭示了单核细胞细胞膜的流动性与动脉粥样硬化的发生有关, 为今后深入探究单核细胞与动脉粥样硬化关系提供实验基础。

利用激光扫描共聚焦显微镜动态研究大黄素β环糊精包合物在鼻咽癌CNE-1细胞的跨膜转运及分布。结果显示，大黄素β环糊精包合物以颗粒的形式主要分布于胞浆中，在其浓度为5~40 mg·L-1时细胞对其摄取量随浓度的增加呈非线性增加；NaN3、甘露醇可抑制CNE-1细胞对大黄素β环糊精包合物的摄入量，环孢菌素A(CsA)在药物浓度低(小于5 mg·L-1)时可显著增加细胞对大黄素β环糊精包合物的摄入量，而在药物浓度大时，反而抑制细胞的摄取量。相对大黄素而言，大黄素β环糊精包合物在细胞内持续时间较长。大黄素β环糊精包合物在鼻咽癌CNE-1细胞的跨膜转运主要遵循能量依赖的内吞模式且受P-gp蛋白的调控，这一特性可为药物剂型研究提供参考。

激光扫描共聚焦显微镜(Laser scanning confocal microscope, LSCM)是普通光学显微镜、激光、计算机及其相应的软件技术结合的产物, 能实现连续光学切片和生物三维结构重组及动态分析。作为一种先进的技术手段, LSCM技术已经为花粉生物学的研究提供了有价值的新资料, 大大地推动了植物生殖生物学的发展。本文综述了LSCM技术在花粉粒形态(形状、大小及三维重建)、花粉的内部结构(如细胞骨架)、花粉的遗传学、花粉的发育、花粉的萌发、花粉自发荧光特性、孢粉研究等方面中的应用, 并指出了LSCM的不足之处, 最后提出了LSCM 技术在花粉研究中的应用展望。未来LSCM技术应该与多光子技术、活细胞工作站技术相结合使用, 才能更准确地进行花粉动态研究的实时监测。

体视学是由形态学与数学交叉形成的一门新兴学科，通过二维结构信息定量测量和分析三维形态结构特征。采用体视学点计数方法，对肿瘤细胞B16F10、B16/Vector及B16/GPR4各20组的共聚焦显微镜图像进行测量，定量分析了其三维形态参数的差异。对比三类细胞的体视学参数发现，对照组B16/Vector和原始细胞B16F10没有明显差异，实验组B16/GPR4的细胞比表面及相对形状因子参数与另两类细胞相比均表现出了显著性差异(p值分别小于0.05和0.02，即B16/GPR4细胞形态光滑，没有较多的突触和伪足)，与前期Transwell小室细胞侵袭及迁移实验研究结果相吻合，体现出B16/GPR4细胞中G蛋白耦联受体4(GPR4)基因对细胞迁移性抑制的生物特性。研究结果表明，体视学和激光扫描共聚焦显微镜细胞图像的结合，可以实现细胞三维结构参数的快速测量，是细胞生物学尤其是细胞形态学分析的有效研究方法。

以Fluo-3AM为游离Ca2+荧光探针, 利用激光扫描共聚焦显微镜(Laser Scanning Confocal Microscope,LSCM)对烟草悬浮细胞在热激诱导的凋亡过程中Ca2+时空分布进行了研究。结果显示, 在正常细胞中, Ca2+集中分布在细胞壁和细胞核中, 细胞质中分布较少; 在凋亡早期细胞中, 细胞质中Ca2+的浓度增加; 在凋亡晚期的细胞中, 细胞核中的Ca2+浓度增加较为明显。结果提示, 在凋亡过程中, Ca2+的定位分布存在一定的规律。