本研究利用生物信息学结合RT-PCR技术从二穗短柄草(Brachypodium distachyon)中克隆出BdAD1的cDNA基因, 该基因编码一个包含500个氨基酸残基的乙醛脱氢酶家族蛋白。系统进化关系分析表明, 该BdAD1蛋白序列与小麦(Triticum aestivum)、羊草(Leymus chinensis)和大麦(Hordeum vulgare)的同源蛋白具有较近的亲缘关系。BdAD1基因在植物细胞的细胞核和细胞质中均有表达, 而且BdAD1蛋白兼具松柏醛脱氢酶和芥子醛脱氢酶的活性(CALDH/SALDH), 可将松柏醛与芥子醛分别酶解生成阿魏酸和芥子酸, 但它对松柏醛的催化效率显著高于芥子醛, 因此推测BdAD1可能在苯丙烷代谢途径中对阿魏酸的合成具有重要的调控作用。

蛋白质的亚细胞定位与其生物学功能有密切的关系。以一个新的小鼠N5-谷氨酰胺甲基转移酶基因mHemk的两个转录剪接本mHemk1和mHemk2(GenBank编号分别为AY456393和AY583759)为材料,进一步分析了该蛋白的亚细胞定位。根据生物信息学预测, 在这两个蛋白质C-末端可能分别存在内质网(ER)定位信号RFSK和KSLK, 且这两个蛋白质都可能主要定位于细胞质。分别构建了这两个蛋白质以及相应的删除了C-末端RFSK和KSLK的缺失突变体与加强型绿色荧光蛋白的融合蛋白的表达质粒,并转染到MCF-7细胞中。结果证明mHemk1蛋白中的RFSK基序是一个新的内质网定位信号, 但没有足够的证据支持KSLK基序是mHemk2蛋白的内质网定位信号。这两个转录剪接本蛋白不同的亚细胞定位是否表明它们在不同的亚细胞器内有不同的功能仍值得深入研究。

GAS41是新发现的与神经胶质瘤密切相关的基因.为了对该基因进行深入的功能研究,成功地将GAS41基因构建于原核表达载体pQE-N3,转化BL21(DE3)获得融合表达产物.对含融合蛋白的包含体进行溶解和复性,通过免疫新西兰大白兔获得兔抗GAS41多克隆抗体.采用Western印迹技术,用该抗体检测GAS41基因的原核和真核表达产物,证明该抗体有较好的针对GAS41蛋白的专一性,可用于对GAS41的结构和功能研究.同时,用该抗体通过荧光免疫细胞进行定位分析发现,GAS41蛋白均匀分布于COS7细胞的细胞核中,提示GAS41可能是一个重要的转录因子.

目的:研究血卟啉单甲醚(HMME)在鼠肺毛细血管内皮细胞内的亚细胞定位;方法:孵育时间分别为2小时、12小时、24小时,四种荧光探针标记四种细胞器.倒置荧光显微镜和致冷CCD探测HMME和探针荧光图像.定性比较两种荧光分布模式,并定量计算高探针荧光区域与细胞内HMME荧光均量比I2/I1;结果:三种孵育时间下,HMME荧光均呈胞浆弥散分布,且在核周附近的高尔基体灰度较高,细胞核几乎无荧光分布.I2/I1高低顺序2小时组:高尔基体>内质网>线粒体/溶酶体;12小时组:高尔基体>溶酶体>内质网/线粒体, 且内质网组显著下降与高尔基体组略有下降伴随溶酶体组显著上升;24小时组:高尔基体>线粒体/内质网>溶酶体,且溶酶体组显著下降与高尔基体组一定下降伴随线粒体组与内质网组显著上升;结论:倒置荧光显微镜和致冷CCD能有效应用于光敏剂亚细胞定位研究,定量分析方法对弥散分布光敏剂尤其适合;三种孵育时间下,高尔基体为HMME主要定位点,细胞核几乎无分布.短孵育时间,内质网有一定分布;中孵育时间,由内质网(主要)和高尔基体到溶酶体再分布;长孵育时间,由溶酶体和高尔基体到线粒体和内质网再分布.