现有分辨率评估方法，如瑞利判据、阿贝判据、半峰全宽方法等都具有一定的应用局限性。本文采用基于切片傅里叶壳层相关(sFSC)的频域分辨率评估方法来评估系统的实际成像能力，该方法对分辨率的评估结果仅取决于图像质量，不受系统成像理论的影响，是一种客观、直接的计算方法。它将傅里叶壳层分成楔形壳层对，每个选择器都是一对镜像楔形，以改善由三维荧光成像各向异性带来的分辨率评估问题。实验结果表明，sFSC可作为一种无参考三维图像分辨率评估方法，且利用sFSC方法的分辨率结果所拟合的三维高斯点扩展函数(PSF)进行图像反卷积操作，能有效恢复图像纹理细节，提高图像信噪比，且相比于其他PSF估计方法，sFSC方法具有更好的性能。

三维显微图像去卷积计算量巨大，运算时间长。评价和分析了三维点扩散函数、散焦像、光学切片以及不同三维点扩散函数去卷积的复原图像，进一步证明了散焦光信息对焦面像的干扰，主要来自于焦面像两侧附近的散焦像。提出了折中选择三维PSF的空间大小，可以获得良好的复原效果，并且减少运行时间。提出了频谱图均值的新概念，作为评价图像清晰及模糊程度的标准，并运用于散焦像、光学切片以及复原结果图的评价。