本文对荧光自相关光谱(FACS)技术作为免疫分析技术的具体实现和潜在应用进行探究。实验分别以Alexa Fluor647荧光分子和绿色荧光蛋白抗原与抗体相互作用为模型,利用一款桌面式荧光相关光谱仪分别采集荧光分子抗原与不同浓度抗体混合液的荧光自相关数据。将传统FACS技术与最大熵值法相结合,我们可以对抗原-抗体结合程度进行定量和定性评估。使用自主开发的数据分析软件对采集的荧光自相关数据进行分析以获取抗原-抗体解离常数。实验结果表明,FACS技术应用于抗原-抗体亲和力检测,具有简便、快速、灵敏的特点;检测限在皮摩尔和纳摩尔之间;模块化的数据分析软件可标准化操作流程、提高数据分析准确性和可重复性。

DNA甲基转移酶1（DNA methyltransferases1, DNMT1）负责维持DNA甲基化遗传稳定性, 其表达量与多种肿瘤的发生发展密切相关, 是一种重要的肿瘤分子标志物。 DNA甲基化转移酶（DNA methyltransferases, DNMTs）的现有检测方法大多基于原核生物酶建立, 且局限于实验室研究, 因此建立一种高灵敏、 高通量测定人血清中DNMT1含量的荧光免疫分析方法（FLISA）, 以期为癌症早期筛查及临床应用提供新思路。 以Fe3O4磁珠为固相载体, 采用碳二亚胺/N-羟基硫代琥珀酰亚胺(EDC/Sulfo-NHS)键合法分别制备磁性免疫捕获探针Fe3O4@DNMT1小鼠单克隆抗体（Fe3O4@McAbDNMT1）及荧光免疫检测探针5-羧基四甲基罗丹明@DNMT1兔多克隆抗体（5-TAMRA@PcAbDNMT1）。 用红外光谱、 紫外-可见（UV-Vis）光谱、 Zeta电位、 免疫活性分别表征偶联产物的结构与活性。 在此基础上, 采用双抗体夹心法, 检测黑色96微孔板中反应产物的荧光强度, 根据荧光强度与DNMT1浓度的关系进行定量分析, 并进行方法学评价与比较。 实验结果显示, 双探针偶联成功, 并保持了原抗体的免疫活性。 该方法的线性方程y=222.046+48.323x, 线性范围0.05～80 ng·mL-1, 相关系数为0.991 4, 检出限为0.005 ng·mL-1, 板内、 板间的RSD分别为4.7%～8.8%, 1.6%～10.0%（n=6）； 板内、 板间的回收率分别为91.3%～102.4%, 88.0%～98.8%（n=6）； 方法特异性良好。 与酶联免疫吸附法（ELISA）和磁酶免疫吸附法（MELISA）相比, FLISA法的检出限最低, 灵敏度最高, 所需分析时间最短； FLISA法与商品化ELISA试剂盒对15例人血清样品进行分析, 差异无统计学意义（p＞0.05）。 表明本研究所建立的FLISA方法灵敏快速, 适用于大批量人血清样品中DNMT1的快速测定, 在临床诊断方面具有重要的应用价值和广阔的应用前景。

稀土螯合物的制备是均相时间分辨荧光免疫分析中的关键部分, 为了合成理想的稀土螯合物, 以2,6-二(溴甲基)吡啶-3,5-二甲酸二乙酯为原料, 首先优化合成了Li+2,6-{N,N’,N,N’-［二(2,2’-联吡啶-6,6’-二甲基)］二(氨甲基)}-吡啶-二羧酸乙酯, 使其产率明显提高。 进一步选择乙腈和甲醇两种反应体系合成铕螯合物, 并比较了不同反应体系下合成的铕螯合物的光谱性质。 研究表明, 乙腈和甲醇两种反应体系所得铕螯合物的激发光谱(最大激发波长为310 nm)、 发射光谱(最大发射波长为616 nm)、 量子产率基本相同, 荧光强度在10-8～10-5 mol·L-1范围内与Eu3+浓度均成线性, 相关系数分别为0.993 73和0.986 65, 两种铕螯合物(c=2.5×10-5 mol·L-1)的荧光强度略有差异, 荧光寿命分别为825和830 μs。 因此, 两种反应体系所得铕螯合物具有斯托克斯位移大、 荧光强度强以及荧光寿命长等优点, 并且此种穴状螯合剂结构中的吡啶-2,2-联吡啶可保护铕离子免受其他物质的干扰, 是理想的稀土螯合物, 可用于蛋白质、 核酸等生物分子的标记。 本研究不仅拓展了合成新型稀土螯合物的方法, 而且为进一步建立均相时间分辨荧光免疫分析奠定了基础。

量子点是一种半导体纳米粒子,具有荧光量子产率高、激发光谱宽、发射光谱窄而可调、耐光漂白等独特的光学特性,在健康、食品安全、 医药卫生、环境分析等诸多领域得到了广泛应用。简述了量子点的基本特性,针对近年来量子点荧光分析在痕量小分子有机污染物检测中 的应用技术研究,从量子点标记荧光免疫吸附分析(QDs-FLISA)技术、荧光共振能量转移(FRET)技术、免疫传感器技术三个方面进行了综述。 最后,就该研究领域存在的问题和发展方向提出了看法。

分别将量子点和超顺纳米磁珠作为荧光探针和磁信号探针应用于免疫反应中, 构建了检测莱克多巴胺的荧光免疫和磁免疫层析的分析方法, 并成功应用于尿液中莱克多巴胺的检测。 两种方法均基于免疫竞争模式, 在荧光免疫分析方法中, 量子点偶联上识别莱克多巴胺的抗体, 样品中莱克多巴胺和包被在ELISA板上莱克多巴胺的完全抗原竞争结合量子点, 样品中莱克多巴胺的浓度越高, ELISA板上吸附的量子点越少, 所测荧光强度值越低, 该方法的检出限为1 ng·mL-1, 检测时间为4 h。 在磁免疫层析方法中, 检测线上特异性捕获的纳米磁珠颜色的深浅和尿液中莱克多巴胺浓度成反比例关系, 即莱克多巴胺的浓度越高, 检测线的颜色越浅, 该方法的定性检出限为10 ng·mL-1, 检测时间为15 min。 两种方法各有优缺点, 基于量子点的荧光免疫分析法在痕量检测和定量分析方面具有优势, 而磁免疫层析法更适合于现场快速检测。

时间分辨荧光免疫分析技术是一种利用稀土离子及其螯合物作为示踪剂的灵敏度高、线性范围宽、应用范围广的非放射性标记免疫分析技术.研制了一种性能稳定的时间分辨荧光免疫分析仪,为了进一步将这一先进超微量物质检验技术推广于临床应用,根据美国国家临床实验室标准化委员会(NCCLS)制订的临床评价方案,选择放射免疫分析法、化学发光免疫分析法以及Perlin Elmer Life Sciences公司的AutoDELFIA-1235全自动时间分辨荧光免疫分析仪作为比较方法,提出了三套检验时间分辨荧光免疫分析仪性能的临床实验方法和评价方案.并利用其中的一套方案进行了实验,结果表明这些方案可操作性强,结果可信,经济适用,可作为同类医疗检验仪器进行临床实验的参考.