目的: 探讨 ALA-PDT抑制角质形成细胞(KC)增殖的可行性和最佳效果。方法: 新鲜包皮组织经两次酶消化法进行KC分离与培养, 分设对照组、单纯ALA组、单纯照光组及0.1 mmol/L、0.6 mmol/L、1.2 mmol/L、1.8 mmol/L、3.6 mmol/L ALA五个浓度组, 经0.5 h、1 h、3 h、5 h四个避光孵育时间后PDT。酶标仪检测PDT后KC存活率、FCM检测KC中PpⅨ荧光强度, 确定ALA最佳药物浓度和最佳用药时间; 吖啶橙染色和Annexin V/PI双染法检测KC凋亡率和生长周期的影响。结果: 0.6 mmol/L ALA(用药1 h)-PDT组为最佳药物浓度和最佳用药孵育时间, 显示PpⅨ荧光强度表达与KC凋亡率最高, 能明显抑制S期与G2期的细胞增殖, 使细胞增殖指数降至最低。结论: 0.6 mmol/L ALA(用药孵育1 h)-PDT能明显抑制KC增殖, 更有效地促进正常KC凋亡。

目的：本文通过不同浓度的ALA与不同用药时间对体外培养的人角质形成细胞(KC)PDT的生物效应研究，观察PpⅨ荧光强度及KC凋亡和生长周期的影响，优化ALA最佳药物浓度和用药时间，探讨ALA-PDT抑制银屑病KC异常增生的可行性和最佳效果。方法：将新鲜包皮组织经两次酶消化法进行KC分离与培养，分设KC对照组、单纯ALA组、单纯照光组及0.1、0.6、1.2、1.8、3.6mmol/L ALA五个浓度组，经0.5、1、3、5h四个避光孵育时间后PDT。FCM、酶标仪、荧光显微镜检测KC中PpⅨ荧光强度，确定ALA最佳药物浓度和最佳用药时间；Hoechst33342 / PI双染法和Annexin V / PI双染法检测KC凋亡率和对生长周期的影响。结果： 0.6mmol/L ALA(用药1h)-PDT组为最佳药物浓度和最佳用药时间， 显示PpⅨ荧光强度表达与KC凋亡率最高，能明显抑制S期与G2期的细胞增值，使细胞增殖指数降为最低，与其他各组相比差异显著(P<0.05)。结论： 0.6mmol/L ALA(用药1h)-PDT能明显抑制KC增殖，优化后的ALA-PDT更迅速有效地促进人KC凋亡。

目的观察人角质形成细胞株Hacat对血卟啉单甲醚(hematoporphyrin monomethyl ether,HMME)的吸收特性及HMME-PDT对角质形成细胞增生的影响.方法对数生长期的Hacat细胞分别与浓度为0、10、20和40 μg/ml的HMME孵育1 h;同时将另一实验组的Hacat细胞与10μg/ml的HMME分别孵育0和30 min、1和2 h,分别以流式细胞仪检测孵育时间和孵育浓度对Hacat细胞吸收HMME的影响;在此基础上,将Hacat细胞分别与0、2.5、5、10、20和40 μg/ml的HMME孵育2 h,用532 nm的倍频Nd:YAG激光以20 mW/cm2的功率密度分别照射0、2.5、5、10、20 min,同时设立完全空白对照组和单纯光敏剂组,24 h后以MTT法检测Hacat细胞的存活率.结果Hacat细胞对HMME吸收量随着孵育浓?鹊脑龈吆头跤奔涞脑黾佣龆?单独照光或以高达40 μg/ml的HMME孵育对Hacat无明显杀伤(P＞0.05).在激光功率密度相同的情况下,HMME-PDT对Hacat细胞的杀伤呈孵育浓度和激光能量密度相关性.结论Hacat细胞对HMME吸收呈孵育浓度和孵育时间相关性,孵育浓度及激光能量密度是影响HMME-PDT杀伤效应非常重要的影响因素,在实验范围内的HMME-PDT能对Hacat细胞产生明显的杀伤作用.