XeCl(308 nm)准分子紫外激光(单脉冲输出能量25 mJ,33.3 mJ～34.4 mJ,脉冲频率每秒两次,光斑15 mm×7 mm或4.5 mm×0.5 mm,透镜焦距300 mm),辐照小牛血清白蛋白[bovine serum albumin fraction V,BSA(V)]固体或溶液样品的时间分别为15 s、30 s、45 s或60 s;样品距激光光源的距离分别为:150 mm、250mm、290 mm、340 mm.改变激光参量辐照BSA(V)样品和其对照,用光谱法测试其FT-IR(IR)、Vis-UV(UV)、FR光谱,并比较分析.受辐照后的BSA(V)与主链构象相关的酰胺平面的特征FT-IR谱线,特别是与蛋白质二级结构敏感的酰胺面Ⅰ,1 652 cm-1;与α-螺旋结构相关的FT-IR 1 140 cm-1～500 cm-1;及与蛋白质侧链氨基酸残基Tyr、Phe、Trp相关的特征峰UV 277.6 nm、UV 216 nm和FR 340 nm、FR 680 nm的峰强度(T%或OD%或Q%)和它们的峰位(cm-1或nm)均受激光辐照的影响,其影响程度与使用的XeCl激光参量的改变有一定的敏感性和相关性.实验结果与讨论对认识激光生物学效应的分子机理、探索建立激光-生物学效应的关系参数,以便进一步发现新的有效的激光生物学效应,发现和认识潜在(后继)的正、负面的激光生物学效应,进而加以调控有一定的理论与实用参考价值.

蛋白质功能预测是后基因时代研究的热点问题.基于相互作用的蛋白质功能预测方法目前应用比较广泛,但是当"伙伴蛋白质"(interacting partners)数目κ较小时,其预测准确率不高.从蛋白质相互作用网络入手,结合"小世界网络"特性,有效解决了κ较小时预测准确率不高的问题.对酵母(Saccharomyces cerevisiae)蛋白质的相互作用网络进行预测,当κ≤4时其预测准确率比相同条件下的GO(global optimization)方法有一定提高.实验结果表明:该方法能够有效的应用于伙伴蛋白质数目较小时的蛋白质功能预测.

目的:种间胚胎移植是挽救濒危动物的一个有效手段.以往的研究主要集中于对种间、同种妊娠之间微观结构和解剖学差异的描述上,而对导致这些现象产生的分子机制的研究却所见甚少.本研究的目的是阐明同种妊娠和科间妊娠之间免疫反应的差异,并初步探讨科间妊娠中流产的可能原因.方法:以科间妊娠第4天、第8天、第12天的孕体为实验组,小鼠同种移植妊娠第4天、第8天、第12天的子宫孕体和相应时间假孕小鼠的子宫为阳性和阴性对照.结果:采用间接免疫荧光和激光共聚焦扫描的方法对冰冻切片显色的结果表明:妊娠第8天时,MHCⅡ分子和Gal-α-Gal抗原决定簇的表达位置和表达密度在科间妊娠、阳性、阴性对照之间均不相同.妊娠第八天时,MHCⅡ分子在科间妊娠中的表达弱于同种妊娠,其表达模式在第12天时也不相同.Gal-α-Gal抗原决定簇在科间妊娠第8天时不表达,但在同种妊娠中却有一定水平的表达.在妊娠第12天,科间妊娠中有一定量的表达,但与同种妊娠的表达模式不同.结论:科间妊娠和同种妊娠的免疫反应有差异,这些差异可能是造成科间妊娠失败的原因之一.

荧光共振能量转移可用于对生物大分子之间的距离进行定性、定量检测.应用荧光共振能量转移技术对高通量低能量激光诱导肺腺癌细胞凋亡过程中caspase-3的激活过程进行实时动态监测.实验结果表明:高通量低能量激光可以诱导肺腺癌细胞(human lung adenocarcinoma cell,ASTC-a-1)凋亡.同时荧光共振能量转移技术是一个有效的监测caspase-3在凋亡过程中活性动态变化的方法.

运用RAPD分子标记技术对山核桃种质资源的五处天然居群遗传多样性进行了初步研究.20条10bp随机引物共检测出252个扩增位点,其中多态性位点168个,多态性位点比率为66.7%.依据Shannon's表型多样性指数,山核桃种质资源的遗传多样性水平相对较高,群体内变异占总变异的60.32%,居群间变异率为39.68%.五处天然居群中,岛石居群遗传多样性水平最高,为0.2800,临目居群最低,为0.1992.群体内平均遗传距离为O.0914,居群间平均遗传距离为0.1188.丰富的遗传多样性可保证山核桃种质群体能够持续生存和发育,也为山核桃选优、品种改良及遗传育种工作奠定了遗传学基础.

目的:应用光学成像方法检测HSV-tk/GCV自杀基因系统与重组改造的人肿瘤坏死因子(recombinant human tumor necrosis factor,rmhTNF)的联合使用,对人涎腺腺样囊性癌细胞(adenoid cystic carcinoma,ACC-M)的杀伤效率.方法:实验分为四组,细胞模型对照组、单纯HSV-tk/GCV自杀基因系统治疗组、rmhTNF处理组、自杀基因联合rmhTNF治疗组.将稳定表达胸苷激酶-绿色荧光蛋白(thymidine kinase-green fluorescen protenin,tk-GFP)的ACC-M细胞(ACC-M-tk-GFP)按5 000个/孔接种到96孔板中,24 h后给药治疗;分别于加药前、给药后6 h、给药后24 h进行荧光成像.检测绿色荧光蛋白(green fluorescent protein,GFP)的荧光用于准确显示胸苷激酶(tk)基因表达的肿瘤细胞,检测碘化丙啶(propidium iodide,PI)的荧光用于显示死亡的肿瘤细胞.通过细胞的透射图及其PI和GFP荧光图像,分别计算tk+细胞和tk-细胞的死亡率.结果:HSV-tk/GCV自杀基因系统与rmhTNF联合治疗组的细胞在加药后6 h就已经出现细胞死亡迹象,而单纯HSV-tk/GCV自杀基因系统治疗组的细胞在加更昔洛韦(ganciclovir,GCV)后24 h才出现细胞死亡,单纯rmhTNF治疗组在加药后24 h还没有细胞死亡发生.对于给药后24 h的tk+细胞死亡率,联合治疗组(85.88%)明显高于GCV(38.13%)和rmhTNF单独治疗组(2.97%),并且联合治疗组给药24 h后会引发部分tk-细胞死亡(9.83%).结论:HSV-tk/GCV自杀基因系统与rmhTNF联合治疗具有显著的协同抗肿瘤效应,能够明显提高对肿瘤细胞的杀伤率;结合光学成像方法,能为更直观方便地检测各组药物分别对tk+细胞和tk-细胞的杀伤率,可为深入研究"旁观者效应"提供参考.

Vsx1是第一个在金鱼中发现的编码含有同源异型框(homeodomain)和CVC结构域蛋白的基因.该基因在胚胎发育的不同阶段在胚胎的不同区域和不同组织中表达,并已经证明它在视网膜视锥双极细胞的分化和正常功能的维持中具有重要作用.为了进一步研究该基因在不同发育阶段组织特异性表达的调节机制,实验用PCR方法分析了金鱼Vsx1的基因组结构和内含子多态性.结果表明:金鱼Vsx1基因由5个外显子和4个内含子组成,与斑马鱼、人、小鼠的Vsx1基因结构相同.4个内含子中,第一内含子有两种序列差异明显的类型,但第二、三、四内含子无明显差异.第一内含子的一种类型比另外一种类型多39个碱基,这39个碱基中包括了真核生物增强子的核心序列.这一观测结果提示金鱼Vsx1第一内含子可能与该基因的发育阶段特异性和组织特异性表达调节有关.同时,第一内含子序列的明显差异也为分析Vsx1不同等位基因或基因拷贝的表达活性,以及组织特异性表达调节方式提供了合适的探针序列.

基于正常乳腺的解剖学结构和生理学特征,建立了一个乳腺组织多维热传递模型.该模型考虑了代谢产热、血液灌注和动静脉血管与组织间热的相互作用,采用有限元分析方法求解热传导方程,数值模拟正常乳腺的稳态温度分布,着重研究血液灌注和代谢产热对正常乳腺组织温度分布的影响.研究结果可为乳腺疾病的热图像分析提供重要参考.

实验研究了在397 nm半导体脉冲激光激发下,人体离体鼻咽正常和癌变组织在600 nm荧光发射波长处的时间分辨自体荧光光谱特性.利用双指数衰减方程对时间分辨自体荧光光谱进行拟合后,获得相应的荧光强度随时间的指数衰减方程以及荧光平均寿命.人体鼻咽癌变和正常组织在600 nm处的自体荧光平均寿命分别为(2.94±0.51)ns和(4.29±0.71)ns,两者之间存在显著的差异.应用时间分辨光谱技术的诊断灵敏度和特异性分别为75%和100%.初步表明了时间分辨自体荧光光谱在早期鼻咽癌诊断的应用价值,该方法可望与传统的稳态荧光光谱结合起来,进一步提高早期鼻咽癌荧光诊断的准确率.

小麦谷蛋白赋于面筋弹性,其亚基组成类型对加工品质有着重要的决定作用.采用一对杂交组合(烟农19×安农9914)的后代,随机选择至F3,种植871个F4穗系,分别检测了高分子量麦谷蛋白亚基(high molecular weight glutenin subunits,HMW-GS)、低分子量麦谷蛋白亚基(low molecular weight glutenin subunits,LMW-GS)组成、SDS沉降值和和面图指标,分析了麦谷蛋白等位亚基及其相互作用对品质的影响.结果表明:该群体麦谷蛋白组成仅在Glu-A1(1亚基或N亚基)与Glu-B1(14+15亚基或17+18亚基)位点有差异.Glu-A1位点1亚基的SDS沉降值显著高于N亚基,1亚基的峰高、7 min尾高显著大于N亚基,而在和面时间、7 min带宽以及衰落角(耐揉性),两亚基间差异不显著.Glu-B1位点亚基间SDS沉降值17+18＞14+15/17+18＞14+15,和面时间、7 min带宽两个指标17+18亚基显著高于14+15亚基,衰落角显著小于14+15亚基,峰高和7 min尾高差异不显著.对Glu-A1和Glu-B1两位点互作,除7 min带宽互作达5%显著水平外,其它四个指标均未达显著水平.1亚基相对于N亚基,17+18亚基相对于14+15亚基,虽以SDS沉降值为标准其效应相当,但两者却作用于面团的不同性能.

毛头鬼伞(Coprinus comatus)子实体经热水浸提、乙醇沉淀、脱蛋白和真空干燥后得到毛头鬼伞多糖.经定性化学反应和光谱鉴定,毛头鬼伞多糖不含蛋白质、核酸、酚类物质和糖醛酸,为非淀粉类中性多糖,均分子量为947 kD,完全酸水解后经气相色谱分析确定其糖基组成及其摩尔组成比为葡萄糖:甘露糖:半乳糖=10.5:1.7:1.通过对脱氧核糖体系产生的羟基自由基(·OH)的清除作用和邻苯三酚自氧化系统产生的超氧阴离子自由基(O-2·)的清除作用,对毛头鬼伞多糖体外抗氧化活性进行的研究结果表明:该多糖具有一定的抗氧化活性.

用透射电镜研究在不同强度磁场处理下,小球藻超微结构的变化.结果显示:磁处理强度不同,小球藻细胞亚显微结构变化程度不同.细胞壁、叶绿体、线粒体和液泡等部位是受磁处理影响的主要部位.研究发现在较高强度磁处理下,出现质壁分离,类囊体结构轻微破坏,液泡和线粒体增加,能量物质积累等现象,影响小球藻的正常代谢.

采用透射电镜观察中国石龙子精子的形成过程.结果表明:早期精细胞中有高尔基复合体和线粒体集合,由高尔基复合体所分泌的前顶体囊泡,逐渐向核移动,以后的过程可分为四个时期.时期Ⅰ:前顶体囊泡移至核膜时,核膜凹陷形成封闭的顶体囊泡,囊泡底部靠近核膜处有一电子致密的顶体颗粒,近端中心粒及鞭毛开始出现.时期Ⅱ:顶体囊泡变扁平,细胞核延长,染色质浓缩成短丝状的染色质纤维.时期Ⅲ:核进一步延长,染色质纤维变粗变长,按核纵向排列有序.时期Ⅳ:染色质纤维浓缩至最大限度,电子透明的核质消失,核呈高电子致密,顶体复合体发育完全.

巨大芽孢杆菌BM279是经低能N+离子注入诱变原始菌株BM80而得到的维生素C高转化率伴生菌株.通过对离子注入前后出发菌和突变株的生理、生化等生物学特点比较,探讨了离子注入巨大芽孢杆菌对2-酮基-L-古龙酸(2KGA)高转化率的促进机理.离子注入对巨大芽孢杆菌自身的生长无明显影响,BM279呈现出与BM80基本一致的生长曲线;但BM279对混菌发酵体系中产酸菌GO29的细胞增殖有显著促进作用.BM279在混菌发酵过程中分泌较多的碱性物,有利于维持GO29生长、代谢的pH环境.BM279培养42 h,其胞外活性物质对GO29的糖酸转化活力较BM80有显著提高,且分泌时间较BM80推迟6 h.利用层析技术分别从BM80、BM279胞外液中纯化了L-山梨糖脱氢酶(L-sorbose dehydrogenase,SDH)激活蛋白(SSPBM80和SSPBM279),后者比活较前者高出50%,对GO29中的SDH酶活有更强促进作用.

采用60Co辐射源,研究不同剂量对食用蛋的灭菌和保鲜效果,以及对种蛋囊胚的致弱作用.结果表明:7 kGy的辐照剂量可以杀灭鸡蛋内容物和蛋壳上的全部细菌,但即使是4 kGy,对鸡蛋的保鲜和延长货架期方面起到的也是副作用;从3 Gy～11 Gy剂量范围内对种蛋进行辐照,其对应的孵化率为71.8%～13.3%.由于没有一个衡量辐照致弱种蛋胚胎发育程度的参数,提出了相对于空白组的孵化率下降幅度作为家鸡囊胚细胞嵌合体选取辐照剂量的依据.

利用离子束对活性污泥进行不同剂量的辐照处理.分析测定了辐照前后活性污泥的废水处理效果、性能参数与污染负荷的变化.结果表明离子束照射剂量在40×2.6×1013 N+/cm2～200×2.6×1013 N+/cm2时,污泥浓度、30 min沉降后的污泥沉降比、污泥指数和活性污泥增长率均略低于对照.40×2.6×1013N+/cm2以上的辐照剂量即会导致污泥增长率下降,特别当剂量达到200×2.6×1013 N+/cm2时,污泥量出现负增长(-1.2%和-2.00%).N+离子注入的单位活性污泥氨氮、化学需氧量去除率均有提高,在辐照剂量40×2.6×1013 N+/cm2～160×2.6×1013 N+/cm2时,处理效果随辐照剂量增加有增强趋势.酚的单位活性污泥处理能力明显优于对照,在辐照剂量为160×2.6×1013 N+/cm2时系统处理率达到99.76%.

在生长均匀的茶园喷施氰戊菊酯(fenvalerate),采摘施药后2h和1 h、2 h、3 h、5 h、7 h、9 h、14 h、21天的茶树鲜叶加工成绿茶,用气相色谱法测定成茶、茶汤和茶渣中反式氰戊菊酯和顺式氰戊菊酯的含量,研究了氰戊菊酯在成茶、茶汤中的残留动态.结果表明:反式氰戊菊酯和顺式氰戊菊酯在成茶中的残留水平随施药间隔天数的增加呈下降趋势,20mL/667 m2施药剂量下,分别由施药当天2 h的9.40 mg/kg和17.51 mg/kg减小到第21天的1.07mg/kg和1.53 mg/kg,消解幅度为88.62%和91.26%,40 mL/667 m2施药剂量下,分别由施药当天2h的20.37 mg/kg和38.67 mg/kg减小到第21天的1.94 mg/kg和3.06 mg/kg,消解幅度为90.49%和92.09%.茶汤中氰戊菊酯含量(y)与成茶中氰戊菊酯含量(x)呈二项式函数关系,反式氰戊菊酯的函数关系为y=-0.0007x2+0.0242x,顺式氰戊菊酯的函数关系为y=-0.0002x2+0.0114x.按我国标准饮茶摄入的氰戊菊酯占每日允许摄入量的0.049%,足以达到保护人体健康水平的要求.而按欧盟的标准,饮茶摄入的氰戊菊酯占每日允许摄入量的0.0019%,即在10-5水平上,这样的风险水平已接近对非阈效应化学物质的风险控制水平(10-6).

目的:观察超脉冲CO2激光联合肝素钠治疗睑黄疣的疗效及复发情况.方法:对77例睑黄疣患者进行联合治疗(治疗组),并设立单用肝索钠局封(药物组65例)和单用超脉冲CO2激光治疗(激光组58例)作为对照.结果:治疗组痊愈58例,显效16例,有效率96.1%;半年随访43例,复发1例,复发率2.3%.药物组有效率78.5%,随访37例,复发9例(24.3%);激光组有效率86.2%,随访27例,复发6例(22.2%).治疗组与药物组有效率、复发率经x2检验,P＜0.01,治疗组疗效优于药物组.治疗组与激光组有效率P＞0.01,复发率P＜0.05,两组疗效无显著差异,治疗组复发率低于激光组.结论:超脉冲CO2激光联合肝素钠治疗睑黄疣疗效好.

目的:探讨激光治疗慢性皮肤溃疡的疗效及诱导创面组织热休克蛋白70(heat shock protein 70,HSP70)表达情况.方法:将64例84处慢性皮肤溃疡创面随机分为传统治疗组和激光治疗组,激光治疗组在传统治疗基础上加用激光治疗,所有创面在治疗三周进行疗效判定;同期随机切取5例创面组织,并设正常皮肤为对照,行组织切片HSP70免疫组化染色,计数HSP70阳性细胞数并检测阳性细胞灰度值进行统计学分析;设计引物行RT-PCR检测HSP70 mRNA表达情况.结果:两组慢性皮肤溃疡患者经相应治疗均较治疗前明显改善,但激光治疗组创面的治愈率和总有效率明显高于传统治疗组(P＜0.05或P＜0.01);免疫组化染色显示,正常皮肤和慢性溃疡组织中未见明显HSP70阳性表达细胞,激光治疗后三周后可见较多量的HSP70表达阳性细胞,其阳性细胞计数明显高于其它两组(P＜0.01),细胞信号灰度表达明显低于其它两组(P＜0.05),而传统治疗组与正常对照组无显著差异;RT-PCR结果发现激光治疗组组织中扩增到一条特异性泳带,大小约268 bp,正常皮肤和传统治疗组组织中未扩增到明显HSP70 mRNA基因片段.结论:激光佐治慢性皮肤溃疡具有良好临床疗效,可能与激活创面细胞的热休克内源性保护机制而发挥抗感染和促进愈合作用有关.

目的:观察波长为585 nm脉冲染料激光治疗婴幼儿体表溃烂型血管瘤的临床疗效.方法:采用波长为585 nm的脉冲染料激光,对76例(男26例,女50例)体表溃烂型血管瘤(平均瘤体表面积22.1 cm2)患者进行照射治疗,激光能量为5.8 J/cm2～8 J/cm2(平均6.6 J/cm2),间隔4周治疗一次,治疗二次后瘤体无消退者予口服类固醇辅助治疗,类固醇辅助治疗4周无效者再联合干扰素治疗,直至创面愈合和瘤体消失.结果:68例患儿在治疗二次后创面完全愈合,瘤体明显缩小,经一至八次(平均四次)激光治疗后瘤体完全消退,8例患儿辅以类固醇治疗,6例治愈,2例无效后予干扰素联合治疗后瘤体消退,总治愈率100%;经过平均12个月随访,所有患儿无溃疡复发和血管瘤再发.结论:脉冲染料激光治疗婴幼儿体表溃烂型血管瘤,具有良好疗效,是一种行之有效的治疗方法.

大多数转基因植物中使用花椰菜花叶病毒(cauliflower mosaic virus,CaMV)35 S作为启动子,因此可通过检测该启动子来判断植物样品中是否含有转基因成分.实验将高灵敏度电化学发光PCR方法用于检测转基因烟草中的CaMV 35 S启动子,将该启动子的PCR产物与生物素标记的探针杂交,可以起到特异性筛选产物的作用;与发光标记物--三联吡啶钌标记的探针杂交,从而实现电化学发光检测.两种探针同时与待测样品的PCR产物进行杂交,进一步对样品进行特异性筛选,从而提高了检测的准确性,避免了假阳性结果的产生.实验结果表明:该法可以准确的区分待测样品中是否含有35 S启动子,从而区别转基因烟草和非转基因烟草.电化学发光PCR方法灵敏度高,可靠性强,操作简便,结果准确,有望成为一种高效的转基因植物检测方法.

人工神经网络是模仿大脑神经元网络结构和功能而建立的一种信息处理系统,广泛的应用于各种波谱数据处理.误差反向传播多层前馈式网络(back-propagation network,简称BP网络)应用最广,发展最为迅速.将BP神经网络用于紫外-可见吸收光谱和拉曼光谱数据的定量分析和预测,与原文的一元线性回归模型数据处理方法相比,获得了比较满意的预测结果,预测精度有显著提高.这为相关的光谱分析和数据处理提供了一种更有效、更精确的方法.

目的:探讨天麻多糖的最佳提取、纯化方法,分析天麻多糖性质,为深入研究天麻多糖提供技术方法.方法:采用水提醇沉法提取出水溶性粗多糖,经Sevag法脱蛋白和活性炭去色素,过DEAE-纤维素柱,盐洗脱得到天麻多糖.进行天麻多糖理化性质分析、紫外光谱和红外光谱检测分析.结果:以10%乙醇50℃恒温回流提取2 h,重复三次,是天麻多糖提取的最佳方法.天麻多糖为白色粉末状固体,其水溶液呈透明粘稠状,pH弱酸性.结论:天麻多糖为非淀粉类非还原性多糖,可能是含有α-D-木吡喃糖、D-吡喃葡萄糖等单糖的非均一组分构成的多糖.

介绍了基于薄膜加热器的新型连续流动式PCR微流控装置的设计与制作;讨论了退火温度、PCR反应试剂(引物、Mg2+、dNTPs以及Taq DNA聚合酶)浓度以及PCR溶液的流动速度等对连续流动式PCR反应的影响;结果发现反应试剂影响连续流动式微流控PCR扩增的行为不同于它们影响传统PCR的行为,在较宽的浓度范围内都不会引起非特异性扩增.除此之外,在15 min内能成功对249 bp的人类β-肌动蛋白基因进行扩增,扩增速度比传统PCR快;通过低热容量的薄膜加热器来维持三个温度区带的恒温,完成33个循环的连续流动式PCR扩增能量消耗小于0.0088 kW·h,比传统PCR仪低得多,新研制的PCR微流控装置有可能成为便携式装置.

介绍了液氮雾化的原理,自行研制新型液氮喷雾治疗器经过,并用于临床治疗,冷冻治疗242例雀斑,疗效显著,经1年～3年追踪观察,治愈率为81.4%,有效率复发率为0.02%.结果显示新型液氮治疗器适用于治疗小的、表浅的和某些特殊部位的皮损,对色素性疾病有很好的疗效.

在过去的十年中,微卫星已经变成最流行的基因标记之一.尽管微卫星分析已有广泛的应用,然而关于微卫星DNA变异动力学的完整的画面才刚刚浮现.文章将从微卫星的起源、微卫星进化模式的推断、DNA复制的滑动是微卫星DNA变异的主要机制、影响微卫星突变率的因素、微卫星的长度分布和微卫星的频率分布等方面综述有关微卫星进化动力学方面的研究进展.

激光拉曼光谱法被公认为是研究生物大分子的结构、动力学和功能的有效方法.近年来拉曼光谱在蛋白质构象研究中的最新进展,涉及到拉曼光谱在非折叠蛋白质、蛋白质装配的特征描述,拉曼晶体学在实时监控蛋白质单晶中化学变化等方面的应用.另外,介绍了蛋白质拉曼光谱分析在生物技术中的应用现状.并对拉曼光谱技术在蛋白质等生物大分子领域中的研究前景做了进一步的展望.