心房钠尿肽ANF是钠尿肽家族中的一员, 是心肌细胞分泌的一种循环激素, 主要在心房组织分泌。生物信息学分析表明, 斑马鱼ANF基因开放阅读框全长321 bp, 编码106个氨基酸, PCR扩增获得斑马鱼ANF基因全长。将所得的PCR片段插入原核表达载体pGEX-4T-1中, 并将重组质粒(pGEX-4T-1-ANF)转化大肠杆菌BL21。通过IPTG诱导表达GST-ANF融合蛋白, 经GST亲和层析法纯化后, 免疫新西兰大白兔制备了多克隆抗体, Western blotting分析表明, 制备的抗体具有良好的高效价性和特异性。

斑马鱼心脏发育模型中, myh6编码是一种促进心室心肌细胞扩张的转录因子。为了进一步研究myh6在心脏发育和心脏疾病发生中的功能, 需要获得斑马鱼myh6蛋白并制备其抗体。从斑马鱼心脏组织中提取总RNA,通过反转录得到心脏组织特异表达基因的cDNA, PCR扩增得到myh6部分编码区序列, 然后将其连接到pGEX-4T载体上获得原核表达。经酶切及测序鉴定后, 转化BL21细菌, 并用IPTG诱导表达融合蛋白, 谷胱甘肽琼脂糖珠亲和纯化, 将纯化的融合蛋白免疫新西兰大白兔制备多克隆抗体, 并用Western blotting检测抗体的特异性。结果显示, 获得了myh6原核表达重组融合蛋白及高效价的特异性兔抗myh6多克隆抗体, 为myh6功能的进一步研究提供了有力的工具。