心房钠尿肽ANF是钠尿肽家族中的一员, 是心肌细胞分泌的一种循环激素, 主要在心房组织分泌。生物信息学分析表明, 斑马鱼ANF基因开放阅读框全长321 bp, 编码106个氨基酸, PCR扩增获得斑马鱼ANF基因全长。将所得的PCR片段插入原核表达载体pGEX-4T-1中, 并将重组质粒(pGEX-4T-1-ANF)转化大肠杆菌BL21。通过IPTG诱导表达GST-ANF融合蛋白, 经GST亲和层析法纯化后, 免疫新西兰大白兔制备了多克隆抗体, Western blotting分析表明, 制备的抗体具有良好的高效价性和特异性。

TNC是心脏发育的标志基因, 但该基因在斑马鱼中的表达尚未研究。斑马鱼TNC基因基因的开放阅读框含有5 132 bp, 编码1 710个氨基酸, 采用生物信息学结合PCR的方法获得了斑马鱼TNC基因的片段。将所得的PCR片段插入原核表达载体pGEX-4T-1中, 并将重组质粒(pGEX-4T-1-TNC)转化大肠杆菌BL21; 通过IPTG诱导表达GST-TNC融合蛋白, 通过尿素洗涤沉淀蛋白并切胶回收纯化融合蛋白, 免疫新西兰大白兔制备多克隆抗体。Western blot和免疫组化分析表明, 制备的抗体具有良好的高效价性和特异性。利用该抗体进行斑马鱼胚胎抗体染色分析表明, TNC蛋白在心脏组织中特异表达。

RMND5A通过MAPK信号途径参与了对细胞生命活动的调控过程。通过PCR扩增RMND5A基因, 并将其克隆至表达载体pGEX-4T-1上, 转化至大肠杆菌BL21(DE3)中, 再通过IPTG进行诱导表达GST-RMND5A融合蛋白。通过尿素洗涤包涵体并切胶回收纯化融合蛋白, 免疫新西兰大白兔制备多克隆抗体, Western blot检测抗体活性。结果说明, 获得了RMND5A原核表达重组融合蛋白及高效价的特异性兔抗RMND5A多克隆抗体, 为RMND5A进一步的功能研究奠定了基础。