采用基因工程技术构建绿色荧光蛋白(GFP)报告基因质粒，有利于活细胞成像、蛋白质印迹(WB)、细胞流式分析及活细胞示踪等，从而对抗肿瘤药物进行筛选。利用聚合酶链反应(PCR)扩增NF-κB基因的启动子序列以及GFP基因片段，将其克隆到pGL6-Enhancer载体中，通过菌落PCR检测、酶切鉴定和测序证明了质粒构建成功。然后，将构建的质粒转染到HEK-293T细胞中，根据活细胞荧光成像、WB及流式细胞分析验证，构建的报告基因质粒在细胞内可正常表达。选择抗肿瘤药物雷帕霉素、紫杉醇、吉西他滨，以及本实验室正在研究开发的多肽类抗肿瘤药物M1-20、M1-21验证报告基因体系试验，发现构建的报告基因质粒可以响应药物对细胞的影响。该药物筛选平台的建立为研究抗肿瘤药物对供试细胞的影响提供了良好的试验技术体系，同时，也为构建活细胞示踪体系提供了材料。

合成了配合物{［Cu(OMBA)2］2·(DMF)2}(OMBA =邻甲基苯甲酸, DMF = N,N-二甲基甲酰胺), 配合物结构经元素分析、IR和X射线单晶衍射表征, 该配合物属于三斜晶系, P1空间群, 晶胞参数为a=1.037 0(5) nm, b=1.053 6(4) nm, c=1.105 9(5) nm, α=62.737(6)°, β=73.355(7)°, γ=63.231(7)°, Z=1, Dc=1.416 g·cm-3, F(000)=422,最终结构残差因子R1=0.051 5, wR2=0.140 4。采用紫外、荧光和黏度法研究了配合物和小牛胸腺DNA (CT-DNA)的相互作用方式。结果表明, 配合物与DNA的结合常数Kb=939.61 L·mol-1,Ksv=3.00×103 L·mol-1,猝灭速率常数Kq=3.00×1011 L·mol-1·s-1。配合物静态猝灭CT-DNA的荧光, 结合常数Ka=5.38×103 L·mol-1, 结合位点n=1, 配合物对胃癌细胞A549、宫颈癌细胞Hela和肝癌细胞HepG2有抗增殖作用。

Objective of the study: We used fluorescence imaging methods of apoptosis and necrosis in human renal carcinoma A498 tumor cells in vitro to reveal the indicated forms of cell death under the combined effect of flavonoid-containing extract of Gratiola officinalis and cytostatic (cyclophosphamide). Materials and methods: The dyes were propidium iodide and acridine orange, which were used in the "alive and dead" test. This test helped us to identify the total number of dead cells in the forms of necrosis and apoptosis and the number of cells in which apoptosis had started, it was characterized by the appearance of apoptotic bodies or nucleus pyknosis. Results: We found the most pronounced cytotoxic activity at the ratio of extract of Gratiola officinalis and cyclophosphamide concentrations of 1:1. The number of living cells decreased when exposed to the ratio of extract and cytostatic concentrations of 2:1. When the ratio of concentration of the extract relative to the cytostatic increased to 3:1, the cytostatic activity of the extract began to appear, the total number of tumor cells decreased. The number of cells with nucleus pyknosis and the number of cells with apoptosis signs significantly increased at a 3:1 ratio of extract and cytostatic concentrations, which confirms the presence of pro-apoptotic activity of the studied combination. This trend indicates the dependence of a certain form of cell death (apoptosis, necrosis) on the ratio of extract and cytostatic doses, and it also demonstrates the cytostatic and cytotoxic effects of this combination. Conclusion: Fluorescence methods of investigation in the "alive and dead" test allowed us to visualize the forms of cell death of human kidney carcinoma A498 by combined exposure to the flavonoid-containing extract of Gratiola officinalis and cytostatic (cyclophosphamide) 24 h after exposure. We found that the combination with a concentration ratio of the extract and cyclophosphamide of 3:1 has the greatest effectiveness due to stimulation of the cytostatic effect and cytotoxic effect.

抗肿瘤药物靶向传递系统是提高传统化疗药物疗效, 并降低其毒副作用的重要手段。以多孔碳纳米材料为药物载体, 根据肿瘤组织微环境特点, 构建抗肿瘤药物靶向传递系统是实现靶向治疗方案的有效方式。本文围绕基于多孔碳纳米材料的抗肿瘤药物靶向传递系统的构建及应用进行综述, 描述了多孔碳纳米材料适宜载药的设计、合成及功能化修饰; 通过理论与实例相结合的方式, 介绍了提高多孔碳纳米材料载药量和实现联合给药的有效策略; 从内源和外源性敏感刺激的角度, 重点分析了多孔碳纳米材料基于肿瘤微环境构建的靶向传递系统的机制和应用; 阐述了多孔碳纳米材料作为抗肿瘤药物载体面临的生物相容性和生物降解性的问题, 并分析了可能的解决途径; 展望了多孔碳纳米材料在构建肿瘤药物靶向传递系统应用中的前景及发展方向, 为研发靶向、可控的抗肿瘤药物传递系统提供了理论依据和例证支持。

本文使用茴香霉素激活神经胶质瘤U251细胞内c-jun 氨基末端激酶(JNK)活性, 实现激活后的JNK对神经胶质瘤抑瘤效果的探究, 并找到受JNK调节的关键转录因子。试验首先利用在线分析网站预测出受JNK调节的相关肿瘤模型, 通过使用茴香霉素(JNK激动剂)实现对细胞内磷酸化JNK(P-JNK)水平的有效调节, 并通过蛋白质印迹法(Western blot)探究其发挥作用的最适条件; 然后通过Cell Counting Kit-8(CCK-8)检测、细胞计数、细胞划痕和流式细胞检测等试验, 探究激活后的JNK对U251细胞的增殖、迁移能力以及细胞周期的影响; 最后通过转录组测序(RNA-seq)技术分析找到受JNK调节的关键转录因子。试验结果表明: 生物信息数据分析JNK与神经胶质瘤的发生和发展存在很强的相关性; 1.0μg/mL茴香霉素作用于神经胶质瘤U251细胞1.0?h后, 可有效激活细胞内源性JNK活性, 抑制细胞的增殖和迁移, 并导致细胞周期阻滞; RNA-seq分析揭示了JNK可能通过调节P53活性实现抑制神经胶质瘤的生长。本文研究发现, 激活JNK后能够对神经胶质瘤产生抑瘤效果, 为JNK可作为神经胶质瘤的治疗靶点提供了依据, 通过RNA-seq分析找到的转录因子P53为进一步探究JNK影响神经胶质瘤发生发展的机制提供了方向。

呋喃香豆素类化合物无紫外光辅助照射时抗肿瘤活性低, 为提高其正常情况下的抗肿瘤活性, 依据“最小嵌入”假说对其进行结构改造。 把呋喃香豆素结构中的呋喃环拆分出来, 使其与香豆素由原来稠环相并的结合方式转变为通过化学键相连, 得到合成简化的类呋喃香豆素。 利用DNA熔解曲线、 吸收光谱、 荧光发射光谱和粘度测试考察了这些类呋喃香豆素与DNA的相互作用。 综合DNA溶解曲线、 光谱法和粘度测试的结果, 推测除目标产物5b是一DNA嵌入剂外, 其他化合物嵌入DNA能力下降, 5a以部分嵌入方式与DNA结合, 5c和5d是通过极为少见、 鲜有报道的“桥型结构”与DNA相结合。 利用“罗丹明B蛋白染色法”考察了目标化合物的体外细胞毒性, 测试结果显示, 与对照品补骨脂素相比这些化合物对肿瘤细胞体外生长抑制作用明显增强, 并且非经典嵌入结合的化合物活性增强更明显。 该研究拓展了“最小嵌入”假说的应用范围, 同时为呋喃香豆素类化合物结构改造提供了依据。

从红树植物无瓣海桑(Sonneratia apetala), 海马齿 (Sesuvium portulacastrum) 和秋茄 (Kandelia candel) 中分离得到25株内生真菌, 采用滤纸片琼脂扩散法、自由基清除法 (DPPH、·OH和ABTS+) 和MTT法对其发酵液上清乙酸乙酯抽提物的抗菌、抗氧化和抗肿瘤活性进行研究。结果显示, 有12株菌株至少对一种指示菌有抑制作用, 占总供测菌株的48%; 对DPPH自由基、·OH自由基和ABTS+自由基具有较强清除作用(0 mg/mL﹤EC50≦1 mg/mL)的菌株分别有3株、12株和8株; 对HepG2肿瘤细胞或HeLa肿瘤细胞具有抑制作用(抑制率＞50%)的有8株菌株。研究结果表明, 红树植物来源的内生真菌能够产生丰富的抗菌、抗氧化和抗肿瘤活性物质, 是开发抗菌、抗氧化和抗肿瘤药物的重要资源。