1 黑龙江八一农垦大学生命科学技术学院, 黑龙江 大庆 163319
2 军事医学科学院军事兽医研究所, 吉林 长春 130122
3 东北农业大学动物医学学院, 黑龙江 哈尔滨 150030
为构建东方马脑炎病毒E2基因原核表达载体, 完成E2蛋白表达及其免疫活性研究。利用PCR方法扩增E2编码全基因, 大小为1 260 bp, 将酶切后目的片段连接到原核表达载体pET-30a(+)上, 构建成重组质粒pET30a(+)-EEEV-E2, 采用酶切和测序分析方法鉴定正确的重组质粒转化到大肠杆菌BL21中, 诱导E2蛋白表达, 并用SDS-PAGE电泳和Western-blotting分析和鉴定目的蛋白; 最后, 用纯化的E2蛋白免疫BALB/c小鼠, 小鼠随机分成4组: PBS对照组、弗氏佐剂对照组、E2蛋白免疫组和E2蛋白+弗氏佐剂免疫组, 每组小鼠免疫2次, 两次免疫间隔时间为14天, 免疫剂量均为100 μL/只; 小鼠初次免疫后第10天, 用细胞因子ELISA试剂盒检测血清中IL-6、IL-12与TNF-α的浓度, 加强免疫后第14天, 用EEEV的假病毒检测血清中E2蛋白抗体的中和作用。结果表明完成了E2基因的原核表达载体pET30a(+)-E2构建和成功表达了带有His标签的E2融合蛋白, 蛋白以包涵体形式存在, 大小为53.0 kDa; 免疫小鼠血清中产生了高水平的IL-6、IL-12与TNF-α和具有较强中和作用的E2蛋白抗体。研究结果为今后E2蛋白作为基因工程亚单位疫苗的研究提供了重要参考。
东方马脑炎病毒 原核表达 E2蛋白 免疫活性 eastern equine encephalitis virus prokaryotic expression E2 protein immunocompetence
华南师范大学激光生命科学研究所,广东 广州 510631
用He-Ne激光辐照巨噬细胞,实时观测活体单细胞内钙浓度([Ca2+]i)分布和细胞免疫活性随激光功率和照射时间的变化.实验结果表明,随激光照射时间的增加,[Ca2+]i出现上升达到最大值后又下降,逐渐回复初始状态,且呈现中心最强,径向衰减的环形梯度分布.不同激光剂量对巨噬细胞内[Ca2+]i及其免疫活性有着不同的影响,同一波长激光,当剂量不同时,可以表现为完全相反的效应.同时激光功率也是影响巨噬细胞内[Ca2+]i及其免疫活性的一个重要因素,同一波长、同一剂量情况下,如果激光功率不同,巨噬细胞内[Ca2+]i及其免疫活性的变化也有着显著的差异.当照射功率为0.16 mW时,胞内[Ca2+]i峰值是照射功率为0.40 mW时的近6倍.最大值时对应细胞免疫活性最高.对其机理作了初步探讨.
免疫病理学 激光共焦扫描显微镜 He-Ne激光 巨噬细胞 钙浓度([Ca2+]i) 免疫活性
华南师范大学激光生命科学研究所,广州,510631
利用新型化学发光试剂MCLA,通过光学方法,并改变激光功率和照射时间研究了低强度He-Ne激光照射巨噬细胞对其免疫活性影响.实验结果表明,巨噬细胞在适当的激光功率和照射剂量下可大大提高其免疫活性,而过大或过小的激光功率或照射剂量则不能激活其免疫活性的显著提高,甚至产生明显的抑制效应.
低强度He-Ne激光 巨噬细胞 免疫活性 MCLA
