巨噬细胞作为炎症阶段的主要吞噬细胞，其高表达是急性呼吸道炎症发展过程的临床特征之一。目前还没有一种成像方法能够以深组织穿透性和高分辨率的方式呈现巨噬细胞在急性炎症中的表达。以吲哚菁绿纳米颗粒（Nano-ICG）作为一种高效的光声成像（PAI）增强造影剂，评估了急性呼吸道炎症中巨噬细胞的表达量。激光共聚焦显微镜下的成像效果证实，Nano-ICG能够快速地被巨噬细胞吞噬。利用Nano-ICG增强光声成像效果后，气管内的PAI结果显示了巨噬细胞在炎症后气管壁上的分布区域。Nano-ICG增强的光声成像能够无创、定量地评估急性呼吸道炎症的发展程度，有望为呼吸疾病相关基础研究和临床诊疗提供新的影像技术支持。

M1型巨噬细胞为经典活化型巨噬细胞, 可分泌多种促炎因子和趋化因子促进炎症的发展。我们前期研究已经证明, 630 nm发光二极管(LED)照射能抑制巨噬细胞释放炎症因子, 然而, 630 nm LED对巨噬细胞极化的调控作用及其分子机制尚不清楚。在本研究中, 我们评估了630 nm LED照射对单核细胞(THP-1)来源的M1型巨噬细胞极化的影响, 探讨了其对M1型巨噬细胞极化的作用机制。体外培养THP-1细胞, 用佛波酯(PMA)将其诱导成巨噬细胞。用脂多糖(LPS)和干扰素-γ(IFN-γ)处理巨噬细胞, 使其极化成M1型巨噬细胞, 极化的同时用波长为630?nm、功率密度为40.02?mW/cm2的LED对其进行照射。采用噻唑蓝(MTT)法、细胞计数试剂盒(CCK-8)法和乳酸脱氢酶(LDH)活性检测试剂盒检测细胞活力, 用实时定量PCR法检测M1型巨噬细胞相关因子mRNA的表达水平, 采用免疫印迹和细胞免疫荧光检测M1型巨噬细胞中STAT1的核转位。结果显示, M1型巨噬细胞经630?nm LED照射后, 其活性未受影响, 但M1型巨噬细胞相关因子干扰素调节因子5(IRF5)、趋化因子配体9(CXCL9)、CXL10、CXCL11 mRNA的表达水平显著降低, 并且阻滞转录因子STAT1向核内转移。综上所述, 630?nm LED照射可通过阻滞STAT1核转位抑制M1型巨噬细胞极化, 此研究可能对治疗巨噬细胞极化相关疾病提供新的思路。

炎症性疾病的发生是当今临床医学攻克的重点。M1型巨噬细胞分泌炎症因子产生炎症, 而M2型巨噬细胞分泌抑炎因子抑制炎症的发生。M1型巨噬细胞向M2型极化, 则是从炎症状态转变成抑制炎症发生的状态, 因此研究巨噬细胞向缓解炎症的M2型极化将有利于炎症性疾病的治疗。本研究利用骨髓间充质干细胞(BMSC)培养液处理已被脂多糖(LPS)诱导呈M1型的Raw264.7巨噬细胞, 探究骨髓间充质干细胞培养液(BMSC-CM)对巨噬细胞向M2型极化的影响及其分子机制。提取来源于3周龄C57BL/6鼠的骨髓间充质干细胞; 再收集BMSC-CM处理M1型的Raw264.7巨噬细胞; 半定量PCR检测M1型标记基因[肿瘤坏死因子α(TNF-α)和诱导型一氧化氮合酶(INOS)]和M2型标记基因[精氨酸酶1(ARG-1)和转化生长因子β1(TGF-β1)]mRNA表达以及白介素10(IL-10)mRNA表达水平; Western蛋白质印迹法检测信号传导及转录激活蛋白3(STAT3)和磷酸化STAT3(p-STAT3)的表达。本研究发现,经过BMSC-CM培养后的M1型的Raw264.7巨噬细胞, 其M2型相关指标ARG-1和TGF-β1 mRNA水平明显上升, 并且IL-10 mRNA水平和p-STAT3蛋白水平也明显上升。这些结果说明,骨髓间充质干细胞培养液通过IL-10/STAT3信号通路促进STAT3磷酸化, 诱导巨噬细胞Raw264.7细胞向M2型极化。

巨噬细胞极化在骨修复中起着非常重要的作用。骨修复材料在植入体内后,会引起巨噬细胞的响应,使其向M1/M2极化,从而影响材料的成骨效果。本文制备了掺锶量分别为0%,5%,10%和15%摩尔百分比的锶掺杂微纳米生物活性玻璃(Sr-MNBG),并研究了不同掺锶量的Sr-MNBG对巨噬细胞极化的影响；随后,在此基础上研究了不同掺锶量Sr-MNBG调控的巨噬细胞分泌成分对小鼠骨髓间充质干细胞(mMSCs)向成骨分化的影响；最后,通过体内原位骨缺损修复实验验证了不同掺锶量Sr-MNBG对巨噬细胞极化的调控作用及其体内成骨作用。体外实验结果显示,掺锶量为5%,10%和15%的Sr-MNBG较掺锶量为0%的Sr-MNBG更能促进巨噬细胞向M2极化,其中10%掺锶量的Sr-MNBG具有最强的促巨噬细胞M2极化作用,且10%掺锶量的Sr-MNBG调控的巨噬细胞分泌成分更有利于成骨。体内实验结果表明,不同掺锶量的Sr-MNBG植入到体内后,10%掺锶量的Sr-MNBG周围有更多的M2巨噬细胞浸润,且表现出更好的骨修复效果,与体外实验结果相一致。因此,Sr-MNBG有望作为一种富有前景的免疫调控材料应用于骨修复。

本研究构建急性大鼠脊髓夹伤模型, 并将大鼠随机分为单纯脊髓损伤对照组及脊髓损伤联合弱激光照射组。照射组应用810 nm波长, 150 mW照射功率, 照射光斑0.3 cm2的弱激光对脊髓损伤区进行经皮照射, 连续照射3天, 7天或14天。应用免疫荧光、免疫印迹实验方法, 测定脊髓损伤区巨噬细胞及小胶质细胞的极化表达。应用酶联免疫吸附法测定脊髓损伤区白细胞介素4的表达情况。应用坚牢蓝髓鞘染色测定两组损伤脊髓中髓鞘保留的差异。采用BBB评分对两组大鼠后肢运动功能的恢复进行评估。结果表明, 810 nm弱激光对脊髓损伤区连续照射3天, 7天后, 可显著减少M1型巨噬细胞及其标志物诱导型一氧化氮合酶的表达, 在7天时间增加M2型巨噬细胞及其标志物精氨酸酶1的表达。弱激光照射组白细胞介素4的表达明显增加。损伤后14天, 弱激光照射组脊髓损伤区髓鞘保留面积比值明显提高。损伤后7天及14天时, 弱激光照射组大鼠的BBB评分明显升高。该实验结果表明, 810 nm弱激光经皮照射, 可增加大鼠急性脊髓损伤区M2型巨噬细胞及小胶质细胞的表达, 并减少脊髓损伤后的髓鞘脱失, 促进脊髓损伤大鼠运动功能的恢复。

采用水提取分级醇沉制得宣木瓜多糖,利用苯酚-硫酸法测定多糖含量,采用高效尺寸排阻色谱-多角度激光光散射-示差折光联用技术(HPSEC-MALLS-RI)分析多糖分子量和分子量分布,用多糖体外刺激巨噬细胞,Griess法检测NO释放量.系列研究旨在考察宣木瓜多糖含量、分子量和分子量分布以及免疫活性,为宣木瓜多糖研究积累实验资料和科学依据;并为中药多糖研究提供较为简单、系统的方法与思路.结果表明,不同乙醇浓度(φ)沉淀宣木瓜多糖含量的高低顺序是:95%＞80%＞40%≥60%＞20%,95%乙醇可较完全地沉淀多糖;当乙醇浓度从20%上升到95%时,粗多糖纯度由35.1%上升至45.0%.宣木瓜多糖主要有3个色谱峰,不同浓度醇沉的多糖经HPSCE分离后出峰位置和数量没有明显差别,表明它们含有的多糖种类相似;重均分子量(Mw)分别为6.570×104 g·moL－1和1.393×104 g·moL－1以及小于1万未能获得准确值;前两种多糖的分子量分布指数(Mw/Mn)分别是1.336和1.639;本试验中宣木瓜多糖对巨噬细胞Raw264.7产生NO没有明显的促进作用。

巨噬细胞对病原菌的吞噬以及随后的降解在机体免疫防御中起重要作用。近年来, 对增强巨噬细胞吞噬能力的研究越来越被重视。弱激光具有独特的生物组织学作用特征, 从而调节机体多种功能。本文重点探讨了He-Ne 激光(632.8 nm)照射对巨噬细胞吞噬功能的影响及分子信号调控机理。实验结果表明, 弱激光能够通过激活巨噬细胞内Src激酶增强巨噬细胞的吞噬能力。

目的:研究相同照射条件下的低强度532nm和650nm激光照射小鼠腹腔巨噬细胞的生物效应.方法:用相同功率和照射时间的532nm和650nm激光辐照小鼠腹腔巨噬细胞,采用中性红吞噬实验测定巨噬细胞的吞噬能力.结果:相同功率的两种波长激光在适当的照射时间下巨噬细胞的吞噬能力有显著性增强,巨噬细胞吞噬能力随照射时间的变化规律相似.结论:相同照射条件下,低强度532nm和650nm激光照射巨噬细胞的生物效应相似,都可以激活小鼠腹腔巨噬细胞,增强其免疫活性,只是532nm激光的效应略强一些.

用He-Ne激光辐照巨噬细胞,实时观测活体单细胞内钙浓度([Ca2+]i)分布和细胞免疫活性随激光功率和照射时间的变化.实验结果表明,随激光照射时间的增加,[Ca2+]i出现上升达到最大值后又下降,逐渐回复初始状态,且呈现中心最强,径向衰减的环形梯度分布.不同激光剂量对巨噬细胞内[Ca2+]i及其免疫活性有着不同的影响,同一波长激光,当剂量不同时,可以表现为完全相反的效应.同时激光功率也是影响巨噬细胞内[Ca2+]i及其免疫活性的一个重要因素,同一波长、同一剂量情况下,如果激光功率不同,巨噬细胞内[Ca2+]i及其免疫活性的变化也有着显著的差异.当照射功率为0.16 mW时,胞内[Ca2+]i峰值是照射功率为0.40 mW时的近6倍.最大值时对应细胞免疫活性最高.对其机理作了初步探讨.

利用新型化学发光试剂MCLA,通过光学方法,并改变激光功率和照射时间研究了低强度He-Ne激光照射巨噬细胞对其免疫活性影响.实验结果表明,巨噬细胞在适当的激光功率和照射剂量下可大大提高其免疫活性,而过大或过小的激光功率或照射剂量则不能激活其免疫活性的显著提高,甚至产生明显的抑制效应.