本文以华中农业大学园艺植物教育部重点实验室细胞生物学实验平台现有的一套由德国徕卡公司生产的新型号TCS-SP8激光共聚焦扫描显微镜机组(文中简称SP8)为例, 结合实际操作经验, 从机组组成使用、软件的使用、使用中常见问题、用后维护及保养等方面进行了大量总结和探索, 希望能够为初次使用仪器者及致力于该领域的科研工作者提供第一手直观详实易懂的操作规程。

目的: 以小鼠为模型, 建立一种基于流式细胞仪为检测手段的快速分离脂肪来源干细胞的方法, 解决间充质干细胞进入实际应用过程中遇到的难题。方法: 取BALB/c小鼠腹股沟内侧的皮下脂肪组织, 采用Ⅰ型胶原酶消化等系列措施, 获取脂肪干细胞(adipose-derived stem cells, ADSCs)。所得细胞分离培养4代后, 流式细胞仪分选出CD73+CD45- ADSCs后成骨诱导分化。碱性磷酸酶染色和实时荧光定量PCR检测其分化情况。结果: 刚分离培养的ADSCs细胞普遍呈圆形或椭圆形, 传至第三代的细胞, 非MSCs细胞逐渐被淘汰, 剩余的细胞形态逐渐变得一致, 细胞形态呈梭形。流式细胞仪检测发现ADSCs细胞表面抗原标记CD73+CD45- 为20.7%。所得的ADSCs成骨诱导分化后碱性磷酸酶(alkaline phosphatase, ALP)染色呈阳性, 实时荧光定量PCR检测成骨标志基因发现它们表达上调, 其中ALP的表达高达22倍。结论: 本方法可以获得纯度较高的ADSCs, 且耗时少成本低; 且提示可采用该方法来获得大量的人源ADSCs用于组织工程修复。

目的: 获得博安霉素高产菌株, 同时比较了铜蒸汽激光与妥布霉素抗性及二者复合诱变的选育效果。方法: 采用铜蒸汽激光辐照30 min与妥布霉素100 r/mL抗性处理及其复合诱变选育博安霉素产生菌轮枝链霉菌(S.verticillus)B-31。结果: 在复合诱变组中, 获得一株高产突变株GB-160, 经发酵罐应用后, 发酵单位较出发菌株提高1.5倍, 并且遗传性能稳定。结论: 该方法能有效获得抗生素高产优质菌株。在医药生物工程中, 具有较高的实用价值, 为其它药物微生物选育提供借鉴。

本文提出了一种基于哈达玛变换的频谱图像灰度共生矩阵(Hadamard-GLCM)的高强度聚焦超声治疗无损测温方法。利用高强度聚焦超声辐照新鲜离体猪肉组织, 获取辐照前后的B超图像的减影图像, 采用Hadamard变换对其进行处理, 获取频谱图像, 将频谱图像的灰度共生矩阵惯性矩作为反应温度变化的信息参数。实验表明: 不仅单组数据的Hadamard-GLCM惯性矩(HGMI)和温度能很好的线性拟合, 而且多组数据的Hadamard-GLCM惯性矩与温度也成近似的线性关系, 而且斜率非常接近, 拟合度更接近1, 误差小, 对温度的分辨能力高, 容错能力强, 与传统的测温方法相比有着明显的优势, 能为HIFU治疗过程中的无损测温提供有效的实时依据。

光声治疗是一种利用纳米材料的光声效应选择性破坏癌细胞的方法。本研究采用叶酸作为肿瘤靶向分子, 以聚乙二醇包裹吲哚菁绿形成纳米粒子(ICG-PL-PEG-FA), 利用此纳米粒子在近红外区的光吸收特性, 开展光声治疗研究。实验结果表明, 这种叶酸标记的纳米探针对高表达叶酸的EMT6细胞具有高靶向选择性和靶向光杀伤性。这种基于包含吲哚菁绿纳米探针的光声治疗将有潜力发展为一种安全, 高效的癌症治疗技术。

本文讨论了正常乳房组织与肿瘤组织的微波吸收差异, 从理论上证明了利用微波热声成像技术检测乳腺肿瘤的可能性; 建立了一套三维热声扫描系统, 并利用此系统对模拟肿瘤和真实离体肿瘤进行成像实验。实验结果表明, 三维微波热声成像系统能对乳腺肿瘤高分辨率高对比度成像, 有希望应用于早期乳腺肿瘤检测。

Zeste同源染色体2增强子基因(EZH2)在人类乳腺癌中过度表达, 它可以被视为一个检测肿瘤的发展和转移的生物标记物。传统技术检测或定量特异性基因表达存在一些缺点, 因此, 本研究拟开发电致化学发光(ECL)技术来检测和量化EZH2 mRNA的表达量。在本研究中, 用生物素和三(2, 2 - 联吡啶)钌(II)(TBR)分别标记在PCR引物的5′ 末端上, 用作扩增靶基因, 扩增产物用ECL系统进行检测。我们用癌细胞作为模型分析了该方法的有效性和灵敏度, 并且将其应用于25例乳腺癌的临床样本中EZH2基因表达量的检测。检测结果表明, EZH2基因在肿瘤细胞系中过量表达, 而在正常血细胞中则低表达。最重要的是, 在25例临床乳腺癌样品中发现10例样品(40％)的EZH2 mRNA过度表达。此方法提供了一种新的工具来评估EZH2基因在乳腺癌中的表达水平, 且有可能成为一种快速、简便和灵敏的乳腺癌检测和诊断方法。

应用羟脯氨酸法测定了牛蛙皮胶原蛋白含量, 通过正交实验对牛蛙皮胶原蛋白酸法提取条件进行了优化, 并结合MTT法测定了胶原蛋白对细胞生长和粘附性的影响。结果显示, 牛蛙皮胶原蛋白的含量约为45.1%; 温度条件对提取率影响最大, 其次依次为酸种、时间和浓度, 最优组合为乙酸、1.5 mol/L、37 ℃、24 h; 在低浓度时, 牛蛙皮胶原蛋白对正常人类肝细胞的生长和粘附性无显著影响, 当浓度升高到一定值时, 对细胞生长和粘附性有显著促进作用。

目的: 探索激光辅助体外制作小鼠嵌合体胚胎的方法。方法: 激光辅助去除不同发育阶段体外受精胚胎的透明带, 随机组合卵裂球体外培养, 观察胚胎融合情况。结果: 没有透明带的卵裂球体外能够“自发”融合, 并且融合胚胎在体外培养环境中, 能够发育至囊胚期, 显微镜观察其形态基本与二倍体胚胎无差别。结论: 激光辅助方法获得裸露的卵裂球能够在体外培养环境制作嵌合体胚胎。

以云斑尖塘鳢为对象, 对其扩增片段长度多态性(AFLP)体系中的连接、预扩增、选择扩增等关键步骤的参数进行了对比实验。结果表明, 在采用磷酸化接头, 预扩增PCR增加延伸反应及20倍稀释预扩增产物的条件下, 可得到清晰稳定的电泳图谱。所筛选的48个引物组合中, 14个引物组合的产物带型稳定清晰, 分布均匀, 扩增片段为50-70条。本研究获得的AFLP优化参数及引物能够运用于云斑尖塘鳢群体遗传分析及分子辅助育种研究。