单细胞拉曼光谱(SCRS)技术具有快速、 灵敏和无标记的优势, 可以从单细胞水平上研究细胞结构, 本文为实时监测单细胞微生物生长代谢变化, 提出了基于谱聚类和SCRS的细胞生长检测方法, 并采集600个同步培养的发酵工程菌-大肠杆菌SCRS数据作为实验数据, 采集300个发酵益生菌-枯草芽孢杆菌SCRS数据验证方法适用性。 首先, 对同步培养的菌落测量OD600生长曲线作为微生物群体水平上生长时期标签; 其次, 应用t-SNE对群体细胞SCRS数据进行可视化分析, 指导谱聚类对高维SCRS数据聚类分析, 并应用轮廓系数和CH index评估最佳聚类簇, 赋予每个SCRS数据簇标签; 最后, 应用三次样条插值拟合统计SCRS数据簇标签和生长时期标签交集, 精准识别群体中共存的生长时期异质数据, 实现对单细胞微生物生长时期精准鉴定。 结果表明, 基于谱聚类与SCRS的细胞生长分析方法根据同步培养的群体细胞生长曲线, 设置2维嵌入空间维度和基于最近邻的谱聚类相似度计算方法, 有效检测三个生长时期最佳聚类簇中9%和4.3%异质数据。 提出的无监督检测单细胞生长的方法, 借助谱聚类无需标记就可以直接根据SCRS数据特征进行建模, 并能够对任意形状的高维SCRS数据聚类且快速收敛的优势, 实现了对两种发酵工程菌和发酵益生菌细胞滞后期、 对数期和稳定期的精准识别, 真正意义上实现从单细胞水平上检测细胞生长, 为发酵工程提供更加精准、 实时的调控指导, 具有重要的工程应用价值。

自发拉曼光谱检测具有宽光谱高分辨但信号较弱的特点，因此杂散光的影响不可忽视。针对自行设计的单细胞拉曼光谱仪光栅转动下系统杂散光产生的机理进行了研究，给出了杂散光抑制方法，特别是多重结构下消除杂散光光学陷阱的设计方法，通过TracePro软件仿真验证了其杂散光抑制的有效性，分析结果显示，杂散光抑制后不同波长处杂散辐射比降低了12%~47%，细胞拉曼光谱仪整体杂散光水平低于10^-6，经杂散光抑制后的光谱仪更加有利于微弱光信号的探测。