提出了一种细胞培养池顶聚二甲基硅氧烷(PDMS)弹性膜驱动的样品更换方法, 用于减少样品更换所需的流体驱动部件和样品消耗。排出废液时, 关断样品贮存池与细胞培养池间微阀, 培养池中液体被微泵抽出, 池顶弹性膜随之塌陷; 塌陷至所需程度时关闭微泵及下游微阀, 开启所需样品贮存池与培养池间微阀, 新样品将被池顶弹性膜反弹产生的弹性力吸入培养池; 反复几次即可完成培养池内新旧样品更换。结合理论分析、有限元仿真和实验结果, 对影响样品更换效果的主要因素: 培养池顶弹性膜所受净压力、膜厚、样品贮存池到培养池微通道路径形状进行了优化。优化后选定膜厚为0.8 mm、微泵流量为1.67 mL/min、直线型微流道进行的实验显示其80 s左右即可完成90%以上样品更换, 样品消耗和培养池内流体剪切力分别小于相同换液率下原有样品更换方式的1/4和1/10。该方法可减少样品损失和微泵、微阀工作时间, 简化芯片系统结构、减少总质量和总功耗, 换液过程无需人工干预, 有利于系统的小型化和自动化, 尤其适用于我国目前的空间细胞培养芯片系统。

研究了细胞培养器微注塑模具型腔的制作方法。针对微注塑模具型腔的结构特点, 采用UV-LIGA套刻技术, 分别通过两次SU-8胶光刻和Ni的微细电铸制作了以合金钢为基底的微结构; 然后利用掩膜腐蚀方法在铸层上腐蚀出微排气通道。对SU-8厚胶工艺过程中的溶胀现象、匀胶不平整和去除困难等问题进行分析, 提出在掩膜板图形四周增设封闭的宽度为20 μm的隔离带来减少图形四周SU-8厚胶体积, 改善了该处胶模的热溶胀变形, 使铸层的尺寸误差由原来的35 μm降低到10 μm, 300 μm高的微柱体侧壁陡直。隔离带的引入有效地提高了铸层图形的尺寸和形状精度。由于采用了刮胶的匀胶工艺和发烟硫酸去除SU-8胶的方法, 消除了“边缘水珠效应”, 彻底去除了SU-8胶。采用提出的方法可获得铸层质量好, 与基底结合强度高的微注塑模具型腔。

建立轮状病毒的快速培养和电镜检查的方法.A组轮状病毒SA11株经含10μg/mL蛋白酶的DMEM激活后,在MA104细胞上培养一天,提纯,电镜观察.培养24小时的轮状病毒,提纯后电镜下可观察到大量完整和空心的轮状病毒.结果表明,此法快速培养的SA11病毒,负染后电镜观察很容易看到大量完整轮状病毒.

目的:探讨人羊膜上皮细胞和羊膜间质细胞的分离、培养及鉴定.方法:取足月妊娠剖宫产术中的羊膜组织剪成碎片,胰蛋白酶消化15min,共四次,取消化液1000rpm离心5min收集细胞.剩余羊膜组织加入1.0g/L的胶原酶和0.1g/L的DNA酶,39℃消化120min,消化液1000rpm离心5min收集细胞.用含10%胎牛血清的DMEM/F12培养液培养、传代.倒置显微镜下观察其细胞形态及细胞生长情况.通过免疫细胞化学的方法对细胞进行细胞鉴定.结果:通过不同的酶消化分离法可以将羊膜上皮细胞和间质细胞进行细胞分离培养,羊膜细胞体外一段时间内表现出良好的细胞增殖能力和传代能力.胰蛋白酶消化的细胞角蛋白染色呈阳性,波形蛋白染色呈阴性.胶原酶消化的细胞波形蛋白色阳性,角蛋白染色阴性.结论:羊膜上皮细胞和间质细胞能够在体外分离、扩增.这为羊膜细胞进行细胞治疗和组织工程技术奠定了实验基础.

利用激光拉曼光谱对胃癌患者血清及非胃癌患者血清进行对比检测,并结合对体外培养胃癌细胞分泌物的检测,对胃癌特征拉曼峰作初步探讨.得出一种有重要临床应用价值的癌症辅助快速诊断方法.

目的探讨光敏剂血卟啉单甲醚(hematoporphyrin monomethyl ether,HMME)介导的光动力学疗法(photodynamic therapy,PDT)对体外培养的人翼状胬肉成纤维细胞增殖的作用及其影响因素.方法用MTT比色法观察HMME对体外培养人初发、复发翼状胬肉成纤维细胞(以下简称为初发、复发细胞)增殖的影响(毒性作用);用MTT法测定不同的光敏剂孵育浓度(0、2.5、5.0、10、20和40μg/ml)、孵育时间(0、5、10、20、30和60 min)和激光能量密度(0.62和2.835 J/cm2)条件下行PDT对初发、复发细胞增殖的影响;用免疫组化法检测PDT对初发、复发细胞的增殖细胞核抗原(PCNA)表达的影响.结果初发、复发细胞分别在浓度≤20、40μg/ml的HMME中孵育60 min对细胞无明显毒性.高剂量(2.835 J/cm2)照光条件下,HMME孵育浓度分别≥2.5、10μg/ml的初发、复发细胞PDT实验组和对照组相比差异有显著意义(P＜0.05),经40μg/ml的HMME孵育1h后用高剂量He-Ne激光照射初发、复发细胞增殖的抑制率分别为61.1%、57.6%;HMME孵育时间≥5 min的PDT实验组和对照组相比差异有显著意义(P＜0.01).PDT对初发、复发细胞的PCNA表达具有明显的抑制作用.结论PDT对体外培养的初发、复发翼状胬肉成纤维细胞增殖有抑制作用.照光前光敏剂浓度越高、孵育时间越长,照光剂量越大,PDT效应越强.

神经元是神经组织的结构和功能单位.从胚胎中分离出神经元时,由于它们在原位组织中完成了分裂和分化,原代培养的神经元将不会分裂、增殖.18 d孕龄的SD大鼠胎鼠脑组织中分离原代神经元的过程中,采用了改进的细胞分离方法.分离的原代细胞经免疫荧光实验证实含有大量的神经元.pEGFP质粒转染和细胞免疫荧光实验结果显示,转染的原代神经元中GFP报告基因有较高的表达,这表明,原代培养的神经元适宜于后续实验的进行.在对改进型方法和传统型?椒ǖ南赴掷胄Ч冉鲜?发现改进型方法在消化过程中产生的gDNA絮状物较传统型的少,接种后发现细胞分散均匀,无杂物.所获得的原代细胞的总数比传统型方法多出大约23%.

目的:研究氯化锂(LiCl)在体外对KT-1/A3白血病细胞增殖及凋亡的影响.方法:采用液体培养实验,MTT实验,集落培养实验为指标观察LiCl对KT-1/A3细胞增殖的影响,采用DNA片段凝胶电泳及流式细胞检测为指标检测细胞凋亡.结果:①不同浓度的LiCl(5mM-25mM)对KT-1/A3细胞具有抑制增殖的作用,这种增殖抑制作用呈剂量依赖关系.②在LiCl(20 mM)作用72h的DNA凝胶电泳谱可见DNA Ladder及流式细胞仪检测可见凋亡特有的AP峰,提示LiCl可诱导KT-1/A3细胞凋亡.结论:LiCl能抑制KT-1/A3白血病细胞增殖和诱导凋亡.