研究不同分化的食管癌细胞Cx43蛋白的表达和空间定位及其对食管癌细胞的生物学行为的影响。应用合适的荧光探针和激光扫描共聚焦显微镜, 通过单粒子跟踪图像分析, 检测Cx43蛋白荧光团在食管癌细胞中的表达和分布。Cx43在高分化食管鳞癌EC9706中的分布与EC109细胞相似, 特别是细胞膜呈现明显的荧光团; 近细胞膜Cx43蛋白含量相对细胞质增高, 具有在细胞膜构建细胞通信的结构基础, 预示着细胞向良性发展的趋势。低分化食管鳞癌KY150细胞和食管癌SHEEC细胞中Cx43蛋白的荧光团主要分布在近核膜的细胞质中, 较少分布在细胞膜附近;近核膜的Cx43蛋白含量比近细胞膜的含量高, 说明Cx43蛋白在细胞质中的滞留状态。研究显示SPT图像可以直观地示踪Cx43蛋白荧光团在食管癌细胞中的分布, 从而确定Cx43蛋白在不同分化的食管癌细胞中表达及定位的痕迹。

目的: 为研究顺铂治疗食管鳞癌细胞的靶向作用。方法: 本研究使用流式细胞技术双变量分析检测顺铂对食管癌细胞周期进程和癌细胞周期的连接蛋白43(connexin 43, Cx43)表达的影响。结果: 顺铂对食管鳞癌细胞周期的影响主要作用于S期的DNA复制, 细胞阻滞于S期, G2/M期减少。顺铂诱导食管鳞癌细胞周期S和G2/M期的Cx43表达的大幅度改变。低浓度顺铂(由0~2 μmol/L), Cx43表达增强; 顺铂渐高浓度(2~12 μmol/L), 细胞Cx43表达由强逐渐变弱, 特别是G2/M期细胞的Cx43表达活跃, 易受顺铂影响。结论: 我们的研究表明以顺铂处理食管鳞癌细胞,癌细胞周期的S期和G2/M期的Cx43表达与S期的DNA复制一样可作为的潜在治疗靶标。顺铂靶向作用细胞周期S和/或G2/M期细胞的特性可能减少或避免对非分裂细胞的影响。

目的: 研究食管癌细胞迁移到小鼠腹腔时肿瘤细胞周边微环境的变化。方法: 将食管癌细胞株EC109和/或诱导试剂植入小鼠腹腔, 利用组织化学的方法、荧光标记的肥大细胞蛋白酶和流式细胞术, 我们在小鼠模型观察肠组织的形态和腹腔的MC亚型的变化。 结果: 胰酶导致小鼠肠道平滑肌层和黏膜下层的组织增厚, 细胞间隙的增加可能有益于MC在组织移动或迁移进入腹腔; 它引起小鼠腹腔液的总MC增加, MCC亚型的相对比例增加, MCT亚型减少。EC109细胞不能明显地改变小鼠肠道组织的形态, 但它显著地引起腹腔MCT亚型的相对比例增加。结论: 根据肥大细胞内颗粒的类胰蛋白酶和类糜蛋白酶的差异表达, 可证实小鼠的MC亚型; 并且不同的诱导物可能影响腹部微环境的变化。目前的研究表明, 食道癌细胞可以诱导MCT (含有类胰蛋白酶)亚型迁移到小鼠腹腔, 造成肿瘤细胞周围的内部环境的变化。

方法:利用中性蛋白酶成分、特征性酶抗体的免疫荧光染色和流式细胞仪确定分选肥大细胞亚型,以激光扫描共聚焦显微镜显示肥大细胞内分泌颗粒.结果:三种免疫表型被确定:肥大细胞的类胰蛋白酶阳性(MCT)、类糜蛋白酶阴性;类糜蛋白酶阳性(MCC)、类胰蛋白酶阴性和类胰蛋白酶阳性、类糜蛋白酶阳性(MCTC).肥大细胞内分泌颗粒分散或聚集存在,分泌颗粒突起分泌或以分散的方式释放.分泌颗粒大范围释放后,肥大细胞的形态结构发生了改变.结论:利用肥大细胞的特征性酶抗体、免疫荧光标记和流式细胞仪可将人组织中的肥大细胞分选纯化为三种亚型;以共聚焦显微镜显示肥大细胞含有丰富的分泌颗粒,它说明肥大细胞具备了为人体I型变态反应提供快速反应的物质基础.

为探讨食管癌手术前后患者外周血细胞的凋亡情况.利用流式细胞仪对70例食管癌手术前及其手术后10天～14天患者外周血细胞的DNA和CD4,CD8和CD16/56含量进行了分析.结果显示:手术前后患者外周血细胞的凋亡有差异(P＜0.05),但血细胞的DNA合成期细胞比率(S-phage fraction,SPE)、细胞增长指数无明显的差异(P＞0.05).两组的CD4/CD8比值或CD16/56比例有明显差异(P＜0.001).实验数据表明:手术前患者的细胞凋亡增加可能有利于平衡肿瘤细胞的恶性增殖;而外周血细胞的CD8、NK(自然杀伤细胞,natural killer cells)增高,可能有助于这种平衡作用.但手术后患者肿瘤负荷减轻,免疫功能恢复常态,细胞凋亡率相应降低.

为评估小鼠巨噬细胞吞噬死亡细胞时胞质内游离钙离子的变化.实验使用Fluo-3标记巨噬细胞内钙离子和碘化丙碇对死亡细胞核染色,观察吞噬过程中细胞内钙离子的变化和显示巨噬细胞的吞噬功能,检测含死亡细胞的巨噬细胞内荧光密度图像.利用激光扫描共聚焦显微镜检测钙离子的释放.在缺钙的溶液中,可见巨噬细胞接触死细胞时细胞内钙离子快速地聚集和增高.在吞噬体形成时,巨噬细胞内钙离子上升到较高的水平.快速上升后,当吞噬小泡消化时,细胞内游离钙下降,随后钙离子恢复到低水平.研究显示伴随着吞噬小泡中红色荧光的死细胞的出现和消失,巨噬细胞内出现一系列钙离子变化的图像.提示巨噬细胞内钙离子改变在细胞吞噬作用中具有一定的作用.

目的: 观察电离辐射对血管内皮细胞骨架蛋白F-actin影响,探讨血管内皮细胞电离辐射损伤的机理.方法: 用Co60 γ射线对体外培养的血管内皮细胞进行0、2、4、6、8、10、12 Gy照射,于照射后6小时后用激光共聚焦显微镜对其细胞骨架蛋白F-actin进行观察.结果: 细胞骨架蛋白F-actin随着辐射剂量的增加而解聚增加,这种变化呈剂量依赖性.结论: 电离辐射对血管内皮细胞骨架蛋白F-actin的破坏可能是血管内皮细胞辐射损伤机体机理之一.

目的:研究PAR-2激动剂SLIGKV和tc-LIGRLO、胰蛋白酶及其抑制剂对H292肺上皮细胞[Ca2+]i的影响.方法:应用Fluo-3/AM 荧光标记技术和激光扫描共聚焦显微镜(LSCM) 检测不同因素处理的H292肺上皮细胞[Ca2+]i.结果:胰蛋白酶、SLIGKV、tc-LIGRLO均能引发H292细胞[Ca2+]i的增加,平均荧光强度分别比加入药物前增加267%,60%和37%.胰蛋白酶抑制剂大豆胰蛋白酶抑制剂(SBTI)和α1-抗胰蛋白酶(α1-AT)可以抑制胰蛋白酶诱导的细胞[Ca2+]i的增加.结论:PAR-2可以介导H292肺上皮细胞[Ca2+]i的释放增加,胰蛋白酶抑制剂可以抑制胰蛋白酶诱导的细胞[Ca2+]i的增加.

为了研究食管永生化细胞在不同的培养基中,培养后细胞形态的改变.实验利用显微镜观察,鬼笔环肽(phalloidin)-FITC标记和流式细胞仪技术分析转换培养基与未转换培养基的SHEE细胞.结果显示:转换培养基后,SHEE细胞膜边缘异常,细胞连接松散;细胞内F-actin含量降低.说明细胞培养过程中,更换细胞生长环境可影响到细胞骨架,进而改变细胞形态及细胞的粘附能力.

目的:观察纳络酮预防性治疗血管性痴呆大鼠对海马锥体神经细胞内钙离子的影响.方法:将30只大鼠随机分为假手术组、模型组、防治组.利用钙离子敏感探针Fluo-3与钙离子络合后被激发产生荧光的特点,应用激光共聚焦显微镜观察海马锥体细胞内钙离子的荧光强度,应用图像分析技术记性处理.结果:荧光像素平均值假手术组为135.05±29.14;模型组为484.05±298.72较假手术组明?陨?P＜0.01);防治组为139.39±30.74,较模型组明显降低(P＜0.01). 结论:纳络酮防治血管性痴呆大鼠与其抑制钙离子内流保护海马神经元有关.