1 安徽农业大学生命科学学院, 安徽 合肥 230036
2 日本三重大学生物资源研究院, 日本 三重县 津市 514-0001
热激蛋白(HSPs)是受热等因素刺激后而诱导产生的蛋白质, 是一类可以调节应激反应并且保护机体防止细胞损伤的蛋白质, 在机体的应激反应中具有重要作用。它们作为一般标志物被广泛应用于环境监测中。CdCl2, Cu2＋, Zn2＋这三种重金属是普遍存在的环境污染物, 对人体和动物的一些主要器官造成损伤。以HeLa细胞(子宫肿瘤细胞)为材料, 采用不同浓度的CdCl2, Cu2＋, Zn2＋三种重金属物质诱导细胞, 并利用免疫荧光染色(IFS), SDS-PAGE, Western blotting和RT-PCR四种手段分别从基因和蛋白质的水平来研究重金属对HSP70表达的影响。结果表明, 三种金属对HSP70表达的影响程度为CdCl2>Zn2＋>Cu2＋, 且HSP70的产生量与重金属的浓度呈正相关。通过研究, 以建立一种对HSPs的表达更有效的检测手段用于以后的研究。
HeLa细胞 重金属 HeLa cells HSP70 HSP70 Heavy metal IFS IFS Western blotting western blotting RT-PCR RT-PCR
华南师范大学生物光子学研究院激光生命科学研究所暨激光生命科学教育部重点实验室, 广东 广州 510631
低功率激光照射（LPLI）可以激活细胞内多种信号途径促进细胞增殖、迁移、分化等，但是LPLI能否调节脂肪细胞内胞外信号调节激酶（ERK）和蛋白激酶B（Akt）促进甘油三酯的合成却尚未见报道。利用LPLI刺激前脂肪细胞和成熟脂肪细胞并结合蛋白质免疫印迹法分析处理后细胞内ERK和Akt活性的变化。研究结果表明LPLI处理后前脂肪细胞内ERK和Akt的活性增高，而LPLI处理成熟脂肪细胞后ERK活性下降而Akt活性增高，说明LPLI在脂肪细胞内可以差异性调节ERK和Akt的活性。此外，LPLI能通过抑制ERK、激活Akt而增加胰岛素抵抗脂肪细胞内甘油三酯的含量。该结果暗示LPLI可能通过调节ERK与Akt信号缓解脂代谢紊乱造成的胰岛素抵抗。
生物光学 低功率激光照射 蛋白质免疫印迹 脂肪细胞 胞外信号调节激酶 蛋白激酶B 中国激光
2013, 40(12): 1204002
1 湖南大学生命科学与技术研究院, 湖南 长沙 410082
2 湖南大学化学生物传感与计量学国家重点实验室, 湖南 长沙 410082
PCR扩增拟南芥(Arabidopsis thaliana)DBB1a cDNA的保守区段(GenBank 登录号: AT2G21320), 转化到冷诱导表达载体pCold TF上, 构建pCold-DBB1a 重组质粒, 转化大肠杆菌DH5a。15 ℃下IPTG诱导表达融合蛋白, 并通过SDS-PAGE检测。证实目的蛋白以可溶形式在约20 kD处高效表达, 与预期蛋白大小相吻合。表达蛋白经Ni琼脂糖凝胶亲和层析纯化, SDS-PAGE及Western blotting检测证实纯化后获得高纯度融合蛋白, 这为进一步研究DBB1a功能奠定了基础。
原核表达 蛋白纯化 DBB1a DBB1a prokaryotic expression protein purification western blotting Western blotting
中南大学医学遗传学国家重点实验室,中国湖南,长沙,410078
间隙连接蛋白31(Connexin31,Cx31)是间隙连接蛋白(Connexin)家族的一员,目前对于Cx31的功能及其调节方式知之甚少.本实验利用Fmoc固相多肽合成的方法合成Cx31羧基端一个多肽片段(250-266AA),经HPLC纯化后偶联到匙孔槭血蓝蛋白,免疫新西兰雄兔后采血检测、并纯化,采用Cx31myc表达蛋白进行Western blotting、细胞免疫荧光染色、免疫沉淀实验,证实得到的抗体为抗间隙连接蛋白31的特异抗体.
多肽合成 免疫荧光 免疫沉淀 connexin31 peptide synthesis Western blotting immu Cx31 Western blotting
