淮北师范大学, 生命科学学院, 资源植物生物学安徽省重点实验室, 安徽 淮北 235000
大豆Lea5基因是LEA基因家族成员之一。为分析大豆Lea5基因的功能, 构建了大豆Lea5基因植物过表达载体pBI121-Lea5。通过农杆菌介导法转化烟草,获得TL-06、TL-09、TL-17和TL-32等4个转大豆Lea5基因烟草株系。RT-PCR分析表明大豆Lea5基因在4个转基因烟草株系的T2代植株均有不同程度的表达。以转基因TL-09和TL-32株系T2代植株为材料, 进行了干旱和盐渍处理, 结果表明, 2个转大豆Lea5基因烟草株系T2代植株对干旱和盐渍的抗性显著强于野生型烟草, 说明大豆Lea5基因可以提高植物抗干旱和盐碱的能力。
大豆Lea5基因 转基因植物 干旱抗性 耐盐性 Soybean Lea5 gene transgenic plant RT-PCR RT-PCR resistance to drought tolerance to salinity
淮北师范大学, 生命科学学院, 资源植物生物学安徽省重点实验室, 安徽 淮北 235000
为了解高温处理促进大豆幼胚萌发成苗的分子生物学机制, 采用经典的基因表达差异显示技术, 分析大豆品种日本晴高温处理的幼胚与对照组材料的差异表达基因。对其中一个差异表达基因K6进行了测序和比对分析, 结果表明该基因序列与大豆Williams 82 基因组中的Lea5基因相似度高达99%, 可以确定为Lea5基因。Blastp比对分析结果表明大豆Lea5蛋白为LEA-3亚家族成员。利用蛋白质分析软件分析了Lea5基因推测的蛋白质结构的特点, 结果表明该蛋白质由113个氨基酸组成, 相对分子量为12.283 kD, 等电点高达10.12。该蛋白质不形成典型的二级结构。RT-PCR分析表明该基因表达具有组成型特点, 在大豆幼胚发育过程中稳定表达, 在大豆的根、胚轴和叶片等器官中均有表达。
大豆幼胚 高温处理 差异显示技术 Lea5基因 逆转录PCR soybean young embryos treatment by high temperature DDRT-PCR Lea5 gene RT-PCR
湖南师范大学生命科学学院,蛋白质化学与鱼类发育生物学重点实验室,湖南 长沙 410081
目的：本文主要以金鱼中的dvl-3基因为研究对象,研究dvl-3在金鱼不同的组织和胚胎发育时期中可能行使的功能。方法：采用RACE克隆技术获得金鱼dvl-3基因的cDNA全长,再利用半定量RT-PCR技术和蛋白免疫印记（Western blot）技术分析研究dvl-3基因在mRNA水平和蛋白水平上的表达差异。结果：在金鱼不同组织与胚胎发育时期,dvl-3基因在mRNA水平和蛋白水平上具有显著的表达差异性。结论：由此可见散乱蛋白dvl-3在金鱼不同的组织和胚胎发育时期中可能行使不同的功能,但其具体的功能及机制还有待进一步研究。
散乱蛋白 Wnt信号转导通路 dishevelled dvl-3 dvl-3 wnt signal transduction pathway RT-PCR RT-PCR Western blot western blot
1 安徽农业大学生命科学学院, 安徽 合肥 230036
2 日本三重大学生物资源研究院, 日本 三重县 津市 514-0001
热激蛋白(HSPs)是受热等因素刺激后而诱导产生的蛋白质, 是一类可以调节应激反应并且保护机体防止细胞损伤的蛋白质, 在机体的应激反应中具有重要作用。它们作为一般标志物被广泛应用于环境监测中。CdCl2, Cu2＋, Zn2＋这三种重金属是普遍存在的环境污染物, 对人体和动物的一些主要器官造成损伤。以HeLa细胞(子宫肿瘤细胞)为材料, 采用不同浓度的CdCl2, Cu2＋, Zn2＋三种重金属物质诱导细胞, 并利用免疫荧光染色(IFS), SDS-PAGE, Western blotting和RT-PCR四种手段分别从基因和蛋白质的水平来研究重金属对HSP70表达的影响。结果表明, 三种金属对HSP70表达的影响程度为CdCl2>Zn2＋>Cu2＋, 且HSP70的产生量与重金属的浓度呈正相关。通过研究, 以建立一种对HSPs的表达更有效的检测手段用于以后的研究。
HeLa细胞 重金属 HeLa cells HSP70 HSP70 Heavy metal IFS IFS Western blotting western blotting RT-PCR RT-PCR
安徽农业大学生命科学学院, 安徽 合肥230036
以砀山酥梨果实为材料, 研究了影响石细胞形成的木质素合成酶-多酚氧化酶(polyphenol oxidase, PPO)的酶学特性, 并对PPO基因进行了克隆。结果表明, 在砀山酥梨果实发育的过程中, PPO活性在花后27 d和47 d出现高峰, 早于木质素含量高峰(花后47 d、61 d)和石细胞团含量高峰(花后51 d), 且PPO活性变化与两者极显著相关。砀山酥梨果实PPO最适反应条件为pH值7.0, 温度40 ℃左右, 底物浓度0.16 mol/L。酶促褐变反应动力学符合米氏方程, 动力学参数Vmax为454.5455 U/g, Km为0.1364 mol/L。克隆得到了558 bp的PPO基因的cDNA片段, 该序列已登录GenBank, 登陆号为HQ329065。经序列分析及同源性比对发现, 该基因与其它植物的同类基因有较高同源性。
砀山酥梨 多酚氧化酶 木质素 石细胞 酶学特性 Pyrus bretschneideri cv. PPO lignin stone cell enzyme characteristics RT-PCR RT-PCR
1 厦门出入境检验检疫局, 福建 厦门 361012
2 广西农业科学院植保所, 广西 南宁 530007
3 福建出入境检验检疫局, 福建 福州 350001
利用黄瓜绿斑驳花叶病毒(Cucumber Green Mottle Mosaic Virus, CGMMV)的特异性引物对来自广西一温室栽培的黄瓜病样进行RT-PCR检测, 结果扩增得到了与预期大小相符的目的片段(650 bp)。序列分析表明, 该目的片段包含有CGMMV完整的CP基因序列、部分运动蛋白基因(MP)及3’端非编码区(3’-UTR)序列, 其中CP基因全长486 bp, 与已报道的CP基因序列同源性为91.2 ％～99.4 %。经系统发育分析, 明确该GX-CS分离物与日本、法国、印度等分离物属于CGMMV同一类群, 并推测该分离物与广西的葫芦(GX-BG)分离物具有相同的起源关系。
黄瓜绿斑驳花叶病毒 序列分析 Cucumber green mottle mosaic virus RT-PCR RT-PCR sequence analysis
1 安徽农业大学生命科学学院, 安徽 合肥 230036
2 安徽农科院园艺研究所, 安徽 合肥 230031
为了研究梨石细胞形成与木质素合成的关系, 以砀山酥梨果实为材料, 通过基于同源性的RT-PCR方法, 克隆木质素合成途径中的关键酶苯丙氨酸解氨酶(PAL)基因。同时利用基因数据库资料对克隆的PAL序列进行比较分析。结果表明, 从砀山酥梨果实中克隆的PAL基因cDNA片段长度为585 bp, 推断其编码195个氨基酸序列。该序列包含与其它植物PAL相同的活性催化位点, 经序列分析和同源性比对, 该氨基酸序列与其它植物PAL氨基酸序列的同源性在90 %以上。系统进化树分析表明, 砀山酥梨PAL氨基酸序列与蔷薇科的甜樱桃PAL氨基酸序列聚类关系最近。
砀山酥梨 果实 序列分析 Pyrus bretschneideri cv fruit PAL PAL RT-PCR RT-PCR sequencing
1 郑州大学一附院心外科,河南,郑州,450052
2 华中科技大学同济医学院附属协和医院心外科,湖北,武汉,430022
目的:探讨激光心肌血管重建(TMLR)缓解心绞痛的机制.方法:犬冠状动脉前降支结扎加空气栓塞造成心肌梗塞模型,随机分为实验组(n=6)和对照组(n=6).术后4周实验组心肌梗塞区行TMLR,对照组做假手术.第一次术后8周多巴酚丁胺试验前、后心大静脉内抽取血样,放射免疫法测定血浆腺苷含量,RT-PCR检测心肌腺苷A1受体mRNA的表达变化,比较其积分光密度值.结果:在静息状态,实验组冠状静脉内血浆腺苷含量(842.5±173.7 pmol/mL)与对照组(888.2±273.0 pmol/mL)相比差异无显著性(P=0.77).多巴酚丁胺负荷试验后,对照组冠状静脉血浆腺苷含量(1273.0±247.1 pmol/mL)明显高于静息状态(P＜0.05);实验组冠状静脉血浆腺苷含量(950.8±223.0 pmol/mL)与静息状态相比差异无显著性(P=0.45).心肌组织腺苷A1受体mRNA相?曰止饷芏戎盗阶橹洳钜煳尴灾?结论:心脏负荷增加时实验组冠状静脉内腺苷处于低水平可能是TMLR缓解心绞痛的机制.
激光心肌血运重建 腺苷 A1受体 RT-PCR
1 华南理工大学生物工程系,中国广东,广州,510640
2 广州军区广州总医院皮肤科,中国广东,广州,510010
3 广州军区广州总医院医学实验科,中国广东,广州,510010
目的:构建新型单纯疱疹病毒Ⅱ型DNA疫苗,检测其激发小鼠产生免疫反应的能力.方法:RT-PCR鉴定单纯疱疹病毒Ⅱ型DM疫苗在COS-7细胞中的表达,ELISA检测血清中中和抗体水平,病毒攻击检测其保护效应.结果:DNA疫苗候选株pVAX-gD能在COS-7细胞中表达,激发小鼠产生高滴度中和抗体,有效保护小鼠免受致死量病毒的攻击.结论:构建的新型单纯疱疹DNA疫苗是一株很有希望的人用生殖器疱疹疫苗.
DNA疫苗 保护效应 DNAvaccine RT PCR IgG RT-PCR protective effect IgG
1 安徽师范大学生命科学学院,中国安徽,芜湖,241000
2 皖南医学院生理教研室,中国安徽,芜湖,241001
采用RT-PCR技术,研究了赤链蛇不同组织Sox基因的表达.通过PCR产物直接克隆法和SSCP技术筛选阳性克隆,分析了雄性睾丸和雌性卵巢组织中的Sox基因序列.结果显示,在赤链蛇雌雄成体组织中,Sox基因在睾丸、卵巢、脑和脾组织中均有不同程度的表达,而在雌雄成体肌肉组织中均无表达,显示该基因表达有一定的组织特异性.序列分析显示睾丸组织中表达的是DRSox3,卵巢组织中表达的是DRSox22.在Sox家族中,Sox3表达于中枢神经系统和尿生殖嵴的发育过程中;Sox22则表达于多种组织?蜕窬低持?可横跨CNS和PNS的整个过程.此结果表明Sox基因不仅在性别决定中起作用,还可能在胚胎发育过程中担负重要功能.
赤链蛇 Sox基因 序列分析 Dinodon rufozonatum Sox gene RT-PCR RT-PCR sequence analysis
