可变剪接作为真核生物转录后加工机制普遍存在于不同组织、不同发育时期或不同病理状态下的基因表达调控过程中.对同一基因不同剪接变体的研究可使我们更深入的了解发育、进化、疾病发生机理等基本的生物学问题.讨论了一些基于序列比对而建立的可变剪接的理论预测方法,尚存不足之处,有待于进一步完善.

现有蛋白质亚细胞定位方法针对水溶性蛋白质而设计,对跨膜蛋白并不适用.而专门的跨膜拓扑预测器,又不是为亚细胞定位而设计的.文章改进了跨膜拓扑预测器TMPHMMLoc的模型结构,设计了一个新的二阶隐马尔可夫模型;采用推广到二阶模型的Baum-Welch算法估计模型参数,并把将各个亚细胞位置建立的模型整合为一个预测器.数据集上测试结果表明,此方法性能显著优于针对可溶性蛋白设计的支持向量机方法和模糊k最邻近方法,也优于TMPHMMLoc中提出的隐马尔可夫模型方法,是一个有效的跨膜蛋白亚细胞定位预测方法.

研究了热作用下的良性前列腺增生(BPH)组织对532 nm的KTP和1 064 nm的Nd:YAG激光的吸收和散射特性的变化及其差异,实验采用双积分球测量系统以及反向倍增法获取BPH组织的吸收和散射特性.结果表明:热作用下的BPH组织对532 nm和1 064 nm的吸收系数和约化散射系数都是随着加热温度的变化而变化的,在20 ℃到80 ℃的温度范围内,BPH组织对532 nm的吸收系数和约化散射系数都分别显著地较其对1 064 nm的吸收系数和约化散射系数要大,其对532 nm和1 064 nm的吸收系数的最大值都在20 ℃,其值分别为1.663 mm-1和0.127 mm-1,最小值分别在50 ℃和70 ℃,其值分别为0.864 mm-1和0.034 mm-1,其对532 nm和1 064 nm的吸收系数的最大差异在70 ℃,其值为2 647 %,其对532 nm和1 064 nm的约化散射系数的最大值都在80 ℃,其值分别为2.036 mm-1和1.421 mm-1,最小值分别在50 ℃和70 ℃,其值分别为1.499 mm-1和0.246 mm-1,其对532 nm和1 064 nm的约化散射系数的最大差异在70 ℃,其值为555 %,在70 ℃的热作用下BPH组织达到完全热凝固,其对532 nm和1 064 nm的吸收和散射特性的差异达到最大值.

发展了一种可用于快速检测K-ras癌基因点突变的电化学发光PCR(ECL-PCR)分析方法,该法采用三联吡啶钌标记的上游引物和生物素标记的下游引物对目的片段进行PCR扩增;随后,采用限制性内切酶MvaI对扩增产物进行酶切,由于突变导致酶切位点的丢失,所以只有野生型样品能被切断;通过生物素与链霉亲和素包被的磁珠连接,将生物素标记的DNA片段收集到反应池中进行电化学发光检测.采用该法对20例结肠癌组织中的K-ras癌基因第12位密码子进行点突变分析,得出其中有9例存在点突变,点突变率为45 %.该方法操作简便、安全、快速、灵敏,可用于快速检测K-ras癌基因点突变.

研究578.2 nm激光照射对兔视网膜的作用特点,以新西兰白兔5只10眼为实验对象,铜蒸汽激光(578.2 nm)通过裂隙灯照射兔视网膜后极部,照射时间为100 s,光斑直径为2 mm,照射剂量分别为60 J/cm2、80 J/cm2、100 J /cm2、120 J/cm2、160 J/cm2、200 J/cm2,每组4个光斑.照后1 h及24 h进行眼底照相及光镜观察.照光后可见,随激光功率密度的增加,兔视网膜的损伤也逐渐加重,并且照后24 h的损伤要重于照后1 h.80 J/cm2和60 J/cm2在照后1 h和24 h均未发现明显改变.578.2 nm激光照射白兔后的主要病理学改变位于脉络膜.因此,以578.2 nm激光作为光动力治疗眼底疾病的光源时,照射剂量不宜超过80 J/cm2.

研究肾组织脱水对组织的吸收和散射特性的影响,实验利用带积分球附件的分光光度计和采用反向倍增法获取组织对532 nm和1 064 nm波长的吸收和散射特性.结果表明:在37 ℃下脱水的肾组织对532 nm和1 064 nm的吸收系数和约化散射系数都是随着脱水率的增大而明显地增大的,在37 ℃下脱水的肾组织对532 nm和1 064 nm的吸收系数均明显地较自然的肾组织对相应波长的吸收系数要大,而在37 ℃下脱水的肾组织对532 nm和1 064 nm的约化散射系数也明显地较自然的肾组织对相应波长的约化散射系数要大,在相同脱水率下的肾组织对于532 nm的吸收系数和约化散射系数都明显地较其对1 064 nm的吸收系数和约化散射系数要大.研究结果提示,组织脱水、脱水的温度和脱水时间是影响肾组织的吸收和散射特性的重要因素.

目的:探讨高度近视准发子激光原位角膜镶术(laser insitu keratomileusis, LASIK)手术后屈光回退与术前各项检查结果间的相关性.方法:将135 例(241只眼)近视患者按屈光度数分为A 组126只眼(-6.00 D～-9.00 D)和B组115只眼(≥-9.00 D).记录术前的屈光度数、眼压和角膜厚度,依据预期校正屈光度数计算理论残余角膜厚度,行LASIK手术后记录术后视力、屈光度数,进行统计学分析.术后平均随访时间19.14个月.结果:A组中正常术眼108 只眼(85.7 %),回退术眼18 只眼( 14.3 %) ;B组中正常术眼74只眼(64.3 %),回退术眼41 只眼(35.7 %);两组比较差异有非常显著意义(P＜ 0.01).术后平均视力A组为1.17±0.20,B组为0.99±0.28,两组比较差异有非常显著意义(P＜0.01).两组术后的平均屈光度数比较,差异有非常显著意义(P＜0.01) .平均理论残余角膜厚度A 组为(452.53±28.47) μm,B 组为(439.61±30.11) μm,两者比较,差异有非常显著意义(P＜ 0.01) .屈光回退度数与术前近视屈光度数显著正相关(r=0.35, P＜0.001),与理论残余角膜厚度显著负相关(r=0.13, P=0.04),与术前眼压及术前角膜厚度无相关性(r=-0.48, P=0.46;r=-0.39,P=0.55).结论:LASIK手术术前屈光度数越大,术前计算的理论残余角膜厚度越小,术后越易出现回退.对于-6.0 D～-9.00 D的高度近视患者,LASIK手术的预测性和术后稳定性相对较好;对于≥-9.00 D的超高度近视患者,应结合手术技术和术前计算的理论残余角膜厚度慎重选择进行手术.

目的:研究不同剂量1 318 nm Nd:YAG激光的生物学效应.方法:用波长为1 318 nm的Nd:YAG激光连续照射体外培养的处于对数生长期的人胰腺癌PC-3细胞.在低剂量组内分组分别照射0 s、2 s、4 s、6 s、8 s、10 s、12 s、14 s,每天1次,连续照射3次;在高剂量组内分组分别照射0 s、10 s、15 s、20 s、25 s、35 s、50 s,照射1次.照射结束后,继续培养24 h,噻唑蓝比色法(MTT)测定各组OD值,研究细胞增殖情况.结果: 在低剂量范围内,随着激光照射剂量的提高,PC-3细胞的OD值逐渐升高 (P＜0.05) .而在高剂量范围内,随着激光照射剂量的提高,PC-3细胞的OD值逐渐降低 (P＜0.05) .结论:1 318 nm Nd:YAG激光,在低剂量范围内照射PC-3细胞,具有明显促进其增值的作用,呈剂量依赖性,在临床应用上应避免该副作用的发生;而在高剂量范围内照射PC-3细胞,具有明显抑制其增殖的作用,呈剂量依赖性,对于指导临床应用具有重要价值.

为从分子水平上阐释产甘油假丝酵母(Candida glycerinogenes)高产甘油机理,建立一种方便可行的遗传转化系统是十分必要的.与G418和潮霉素等抗生素相比,Zeocin抗生素对C.glycerinogenes具有较低的致死浓度.以pGAPZb作为构建整合载体的骨架,以Zeocin抗性基因作为选择标记,以URA3基因作为整合位点,构建了C.glycerinogenes整合载体pGA-CU.整合载体经过限制酶线性化后用作转化载体,基于电击转化的方法成功获得了抗Zeocin的转化子并经过PCR分析进一步确证.通过优化电击转化的参数,获得了较为稳定的转化效率,基于这一技术的转化效率每微克DNA可获得120个转化子.为进一步研究该菌株的遗传背景和代谢机理奠定了基础.

通过同源建模得到了抗癌晶体蛋白Parasporin-2(Cry46Aa1)活性区的初始三维结构,利用分子动力学方法对初始三维结构进行优化.为了评估模型的好坏,利用Ramachandran plot和结构匹配等方法对模型进行评价.结果显示,所得的Parasporin-2空间模型良好.比较了Cry46Aa1与Cry46Ab1这两种高度同源的抗癌晶体蛋白的空间结构,找出了其空间结构上的不同之处.通过大分子对接程序Hex4.5,模拟了Parasporin-2与受体GPI-瞄固蛋白(CD59)的相互作用.结果显示,Parasporin-2中参与对接的活性位点位于两个α-螺旋下方的凹槽内,而CD59中的四个loop倾向于插入该凹槽内.研究结果为Parasporin-2的抗癌机制研究及其理性改造奠定了基础.

拉曼光谱作为分子振动光谱,具有无损、无需试剂染色和快速方便的特点,在生物学领域的应用越来越广泛.拉曼镊子是光镊与拉曼光谱的结合,应用拉曼镊子技术收集单个红菇担孢子的拉曼光谱,分析单个担孢子的主要成分,不同的储存方法对担孢子成分的影响等.结果发现,单个担孢子的拉曼光谱反映了担孢子内含物的基本组成,红菇担孢子的孢内主要成分是脂类物质;不同种类的红菇担孢子的拉曼光谱基本相同,经过多年保存的孢子仍然保持其孢子内的主要成分不变.各随机选择10个担孢子的拉曼光谱进行主成分(PCA)判别分析,结果显示红菇属内不同种类的孢子无法区分.结果表明单孢子拉曼光谱可以应用于分析孢子内成分的变化,但应用于真菌分类的可能性有待进一步探索.

研究利用激光提高草原龙胆自交结实的方法,初步探讨了激光对花粉的生物效应.对草原龙胆的花粉进行激光照射,结果表明:适宜剂量的激光照射草原龙胆花粉,能够使其萌发率显著提高,并且使自花授粉的单朵花的结籽量也显著提高;自交后代植株的生长势有较大改善,幼苗健壮,植株的生物量也显著提高.从花粉的表面结构的电镜显微观察分析,激光照射后的花粉,其花粉壁的雕纹受到伤害,网脊线有些断裂,网眼变大,花粉管原始体变长.Selfbred Seedy Quality and Selfbred Seedlings' Biomass of Eustoma grandiflorum

单细胞微藻在生长发育过程中,所积累的中性脂肪具有潜在的生物燃料价值.不同氮源对藻类的生长具有显著影响.研究了氨态氮、尿素氮和硝酸态氮对蛋白核小球藻生长、色素和中性脂肪积累的影响.结果显示,不同氮源对培养液pH有显著影响,以氨态氮为氮源导致培养液pH降低,而硝酸态氮导致培养液pH升高,培养液pH的波动可被添加的Hepes所稳定,并促进以氨态氮为氮源的蛋白核小球藻的生长.尿素氮对蛋白核小球藻生长、色素积累的效果优于氨态氮和硝酸态氮,硝酸态氮在中性脂肪积累上优于尿素氮和氨态氮,添加Hepes对氮饥饿后蛋白核小球藻的中性脂肪积累无显著影响.

报道了一株链霉菌产生的蓝色素的性质.研究表明,该色素水溶性好,具有较高的热稳定性;低pH条件下,抗氧化还原能力较强.大多数所测试的金属离子基本不影响色素的性质.中性条件下色素耐日光,碱性条件下耐紫外光.

利用cDNA-AFLP技术比较了茶树 [Camellia sinensis (L.) O.Kuntze cv.Wulong]花蕾发育早期和晚期的基因表达,结果表明存在明显差异.以E12和M20为引物对在晚期发育花蕾中筛选出一条281 bp特异表达的差异条带TDF53(transcipt-derived-fragment, TDF).RT-PCR分析表明该片段只在晚期发育花蕾中特异表达.用RACE方法延伸其末端序列,克隆并测序获得全长cDNA序列(GenBank 登录号: DQ887753).该基因全长2 079 bp, 开放阅读框1 701 bp, 编码567个氨基酸,其分子量为63 kDa.序列和结构的同源性分析表明:该基因编码的氨基酸序列与烟草、油菜的花粉特异蛋白等同源性较高,由此推定,该基因为编码茶树花粉特异蛋白的基因,并将分离到的花粉特异蛋白基因命名为CsPSP1.

采用生长速率法和孢子萌发法分别测定月腺大戟根总黄酮对尖孢镰刀菌菌丝生长和分生孢子萌发的抑制率,显微观察总黄酮处理尖孢镰刀菌后菌丝体形态结构的变化,并测定菌丝体相对电导率,菌丝体内超氧化物歧化酶(SOD)、过氧化氢酶(CAT)活性.结果表明:月腺大戟根总黄酮对尖孢镰刀菌菌丝生长和分生孢子萌发均有显著的抑制作用,抑制率随总黄酮浓度增加而增高,20 mg/L时抑制率达100 %.总黄酮处理后的尖孢镰刀菌菌丝较细,分支减少,透明度差,液泡数量增多且形成较大的液泡;菌丝体细胞膜透性增加,SOD、CAT活性呈先上升后下降的趋势.以上实验结果可为植物病害生物防治及开发植物源农药方面提供理论依据和实验技术.

用固定频率、固定功率的超声波照射不同阶段的蝗虫卵,研究不同的作用时间对蝗虫卵孵化率和孵化时间的影响.探求超声波作用于生物所产生的效果及一些定量的数据,为今后研究超声波的育种和杀虫提供一些实验依据.结果表明:超声波对蝗虫卵的孵化率和孵化时间有明显的影响,既可以促进其孵化,也可以抑制其孵化,甚至导致其死亡.

为研究羊驼毛的特性并评价羊驼的生产性能,观察了羊驼皮肤和毛的显微结构和超微结构.结果表明:皮肤中皮脂腺很少,这决定了羊驼毛易清洗;毛囊由初级毛囊和大部分复合毛囊组成,因此大部分羊驼毛很细;羊驼毛的髓质比例小于皮质所占比例,而且白毛的髓质与皮质的比例大于有色毛,这决定了羊驼毛轻而具有好的保暖性,且白毛重量轻于有色毛;羊驼毛的皮质细胞具有双层结构,上皮细胞有5层,皮质周围有内、外上皮,这些结构可能使毛避免损伤,并可使黑色素颗粒避免丢失以维持其自然色;羊驼毛的鳞片呈锯齿状并形成裂痕,具有疏水性,因此羊驼毛可以防水.所有这些特点决定了羊驼毛在毛纺工业中是理想的原料.

设计了5对特异性引物,扩增、拼接并测定出太湖新银鱼线粒体tRNAAsp-COⅡ-tRNALys和tRNAGlu-Cytb-tRNAThr两段基因序列片段.基因定位和序列分析发现,太湖新银鱼线粒体COⅡ基因全序列长度为691 bp,序列 AT含量为52.80 %,编码230个氨基酸;线粒体Cytb基因序列全长为1 141 bp,AT含量为48.90 %,它编码380个氨基酸.分别位于线粒体COⅡ和Cytb基因两翼的4个tRNA基因(tRNAAsp、tRNALys、tRNAGlu和tRNAThr)同时被测定出来.将太湖新银鱼与有明银鱼、小齿日本银鱼的同源序列进行比对分析,并基于线粒体COⅡ+Cytb基因合并数据的核苷酸和氨基酸两种序列形式,以黑斑蛙为外群,对10种鱼类进行分子系统树的构建,结果一致表明:小齿日本银鱼与有明银鱼的亲缘关系近于太湖新银鱼;鲱科与鲑科的亲缘关系近于银鱼科鱼类;此外在本研究硬骨鱼类的4个科中,白鲟科作为原始而古老的类群,是在系统进化的过程中首先分化出来的一支.

目的: 表达HCV 核心蛋白,为检测丙肝病毒提供合适抗原.方法: 以含HCV 核心全长cDNA 克隆的pMD18T/core 质粒为模板, PCR 扩增全长的HCV 核心抗原基因, 插入表达载体pQEN1 构建重组质粒pQEN1 /Core, 转化BL-21(DE3)大肠杆菌, IPTG诱导表达6 ×His融合蛋白,表达产物经SDS-PAGE及Western blot检测和鉴定.结果:经SDS-PAGE及Western blot显示HCV 核心蛋白在大肠杆菌中正确表达,融合蛋白分子量约为22 kD,表达量约占菌体蛋白总量的30 %.纯化后的C蛋白能与慢性丙型肝炎患者有血清反应.结论: HCV 核心蛋白在大肠杆菌中成功表达并具有较强的抗原性.

目的:观察评价窄谱中波紫外线(NB-UVB)联合口服阿维A治疗斑块型银屑病的疗效及安全性.方法:治疗组56例给予口服阿维A 0.5 mg/d·kg,同时给予窄谱中波紫外线照射,每周3次;对照组55例给予口服阿维A 0.5 mg/d·kg,于治疗四周时进行疗效评价.结果:四周时治疗组有效率92.86 %,对照组有效率76.36 %,组间比较差异显著.结论:NB-UVB联合阿维A治疗斑块型银屑病疗效好,副作用少.

目的:探讨伽玛刀治疗术后顽固性脑水肿发生的临床特点和相关影响因素.方法:总结432例颅内病变经伽玛刀治疗患者,发生顽固性脑水肿87例,以年龄,性别,病灶部位,90 %病灶容积的边缘剂量,病灶的平均直径,病灶与正常脑组织的关系作为影响因素,分析伽玛刀治疗术后顽固性脑水肿的相关性.结果:伽玛刀治疗术后顽固性脑水肿的总发生率20.1 %,其中以脑内动静脉畸形发生率最高,达41.9 %;脑水肿发生率与年龄,病灶部位,90 %病灶容积的边缘剂量,病灶平均直径,病灶与正常脑组织关系等因素密切相关.结论:伽玛刀治疗术后顽固性脑水肿发生率较高,值得临床重视.

研究了离子束诱变的枯草芽孢杆菌B-24和丙环唑等对苹果采后炭疽病的防治效果及其几种防御酶活性的影响.结果表明:丙环唑对苹果炭疽病菌丝有明显的抑制效果,抑制浓度EC50为0.067 μg/mL.代森锰锌的抑制作用最弱,其EC50为1 806.984 μg/mL.不同化学药剂和不同浓度的药剂之间,对苹果炭疽病的保护防效有显著差异.丙环唑对苹果炭疽病的防效最好,对寄主酶活的诱导作用也最强,能诱导苹果果实POD和PPO活性显著升高.代森锰锌防效差,POD活性和对照接近.同一药剂,浓度高的防效好,果实中酶活性也高.枯草芽孢杆菌在离体条件下活菌液对苹果炭疽病菌的抑制效果最好,抑制率为100 %,表现出明显的拮抗作用.活体试验表明枯草芽孢杆菌能明显减轻苹果果实炭疽病的发生,接种枯草芽孢杆菌能诱导苹果果实POD和PPO活性的升高.

采用组织培养方法,研究了不同外植体类型、激素组合、蔗糖浓度对辣椒腋芽生成以及不同培养基对腋芽生根的影响.结果表明,辣椒腋芽生成的最佳外植体类型是4叶1心,最适的激素配方、蔗糖浓度组合是:MS+B5(有机物)+6.0 mg/L 6-BA+0.1 mg/L NAA+20 g/L 糖;腋芽生根最佳激素组合是1/2MS+0.5 mg/L IBA,其生根率和生根数分别为62.5 %,2.15个.

分别采用气相色谱法和分光光度法对某大学五间教室内空气中苯、甲醛含量进行了测定.根据测定结果,参照国家有关室内环境质量指标,对上述教室内的空气质量进行了评价.分析教室中空气污染的来源,提出相应的解决方案,对于提高教室空气质量具有一定的指导作用.

分析了细胞表面电荷测量的意义、方法和现状,提出采用光镊技术测量细胞表面电荷的方法,介绍了实现该方法的系统构成和检测原理.在电场力的作用下,处于悬浮液中的带电细胞产生电泳.在外加电场力为零时利用激光的陷阱力捕获该细胞,然后施加并逐渐加大外加电场力,直到细胞刚好逃脱光阱力的束缚时的瞬间光阱力, 理论上就是细胞所带电荷在电场中产生的库仑力与粘滞力之和.

采取正交试验设计对环草石斛(Dendrobium loddigesii Rolfe.)组培苗壮苗进行了优化生产工艺研究,以培养基(A)、添加物马铃薯汁液(B)、激素NAA(C)和pH值(D)为因素,以环草石斛组培苗的株高(cm)、茎粗(cm) 、叶片数、叶面积(cm2)、根数、根长(cm)、丛生芽数、单株鲜重(g)等各个性状的增加值为考察指标,优选环草石斛组培苗壮苗的生产工艺.其中自己设计了一种改良培养基(WM),结果显示,改良培养基、添加物马铃薯汁液、激素NAA和pH值均对环草石斛组培苗壮苗产生显著影响,其影响程度为培养基＞pH＞马铃薯汁液＞NAA.由此正交试验筛选出环草石斛组培苗壮苗较优生产工艺为A3B3C3D2,即培养基WM,添加马铃薯汁液200 g/L,NAA 2 mg/L,pH值5.6.优选出的壮苗工艺经济,简便,苗壮根多且长,适宜工厂化生产.

飞秒激光是自1960年第一台激光器诞生以来,过去20年间由激光科学发展起来的最强有力的新工具之一.飞秒激光由于脉冲持续时间短、瞬时功率大、聚焦尺寸小的特点,使得其在超快、超强和超精细领域有着广阔的应用前景.其中最重要的一个方向是飞秒激光在生物细胞方面的应用.细胞是生命活动的基本单位.所有的病源微观上都体现在细胞中细胞器的工作,所以用飞秒激光作用在病体的细胞器上达到治疗的目的,是一个很有前景的领域.由于生物大分子和水几乎不吸收近红外光,故应用近红外飞秒激光对细胞进行手术,同时可在不损伤细胞活性的前提下对细胞进行实验.这种激光手术技术已被用于对细胞内结构进行切割和蚀除.介绍了该技术在细胞领域中的一些应用,如纳米手术、基因转染和染色体切割等;还介绍了飞秒激光技术与生物细胞中主要细胞器的祛除的原理、飞秒激光细胞操作与手术系统和实验中荧光成像、多光子成像显微镜等手段.

世界范围的细菌耐药性呼吁新的抗菌策略,光生物调节作用是有效的候选手段之一.论述了光生物调节作用抗菌效应的研究现状和应用前景.中性粒细胞可以通过吞噬杀菌,也可以通过产生胞外菌阱杀菌.还从活性氧和信号转导所介导的中性粒细胞杀菌作用讨论了光生物调节作用的抗菌机理,为其在临床抗菌中的应用提供理论依据.