本文旨在建立快速获取豚鼠耳朵成纤维细胞的方法, 为豚鼠体细胞重编程技术提供起始细胞。首先采用0.05%Trypsin-EDTA和Collagenase IV两种消化酶对脱毛后的耳朵组织碎块进行消化;然后对获取的细胞进行体外培养和形态学观察, 支原体检测, Vimentin蛋白免疫荧光鉴定, 测定细胞生长曲线计算细胞倍增时间;用绿色荧光蛋白的逆转录病毒感染后用流式细胞仪检测感染效率, 核型鉴定检测病毒对核型的影响。分离的豚鼠耳朵成纤维细胞为贴壁生长细胞, 消化后2～3 h即大部分贴壁并基本完全伸展, 细胞呈梭形或多角形, 胞浆饱满, 立体感强, 细胞核清晰形态良好, 支原体检测阴性。细胞表达成纤维细胞特异性蛋白Vimentin。生长曲线为S形, 符合体外培养细胞正常生长增殖规律, 细胞倍增时间为24.85 h。逆转录病毒感染效率达75.6%, 病毒感染后染色体2n=64的细胞占90%, 遗传稳定核型正常。本研究提供的体细胞获取方法操作简单, 效率高, 获取的细胞状态良好, 细胞增殖速度快, 细胞感染率高, 是一种非常合适的豚鼠耳朵成纤维细胞分离手段, 为后续进一步研究豚鼠体细胞重编程提供了技术基础。

目的:通过观察高迁移率族蛋白1(HMGB1)、转录因子NF-E2相关因子2(Nrf2)及血红素加氧酶1(HO-1)基因沉默对白血病化疗耐药细胞(K562/A02细胞株)的影响, 探讨该信号通路在白血病化疗耐药中的作用及其可能机制。方法:将HMGB1基因、Nrf2基因及HO-1基因的特异性干扰RNA分别转染阿霉素耐药细胞株K562/A02, 荧光实时定量(RT-PCR)方法检测HMGB1、Nrf2及HO-1的mRNA表达水平, Western blot方法检测HMGB1、Nrf2及HO-1的蛋白表达水平, 免疫荧光方法检测Nrf2的蛋白表达, 并使用CCK-8方法检测转染前后K562/A02细胞株的细胞活性。结果:HMGB1基因、Nrf2基因或HO-1基因沉默的K562/A02细胞活性皆显著低于对照组及空白组(P<0.05), 化疗敏感性恢复。结论:HMGB1高表达导致了白血病细胞株K562/A02对阿霉素的化疗耐药, Nrf2/HO-1信号通路参与了HMGB1诱导的K562/A02细胞的化疗耐药, 其表达上调可恢复K562/A02细胞对阿霉素的敏感性。

目的：探讨心舒宝对大鼠心肌梗死的保护作用及其药理机制,为临床用药提供理论依据。方法：0.25 g/mL心舒宝灌胃二周后诱导大鼠心肌梗死模型,二周后进行大鼠心肌组织的Masson’s Trichrome 染色实验;利用胰酶消化方法分离大鼠心脏原代内皮细胞,并培养于培养液。用0.005%,0.01%,0.05%的心舒宝处理细胞后,缺氧培养24 h、48 h,流式细胞仪分析其凋亡率。结果：心舒宝处理组的大鼠心肌梗死面积及其切面胶原明显小于对照组（P＜0.01）;0.005% 心舒宝处理的大鼠心脏原代内皮细胞在缺氧48 h后,其凋亡明显降低（P＜0.01）。结论：心舒宝可能通过降低大鼠心脏原代内皮细胞的凋亡而发挥保护大鼠心肌梗死的作用。

目的: 探讨青霉素类抗生素过敏反应与IL-18及其基因多态性的关系。方法: 采用ELISA方法检测50例正常对照和67例过敏患者血清中IL-18水平, PCR-SSP 法检测IL-18启动子区多态性位点的基因型。结果: 青霉素过敏组IL-18血清浓度显著高于正常对照组(P<0.01), 且随着皮试反应程度的增强, IL-18浓度也随之升高; 青霉素过敏病人IL-18-607位点A等位基因出现频率显著高于对照组(P＜0. 01), CA+CC基因型降低了青霉素过敏发生的风险性［2= 5.868, P＜0. 05, OR = 3.910, 95% Cl (1.225, 12.478)］。不同基因型患者血清中IL-18浓度无显著性差异。结论: 青霉素过敏反应与IL-18升高有关, IL-18基因启动子区-607C/A位点多态性与青霉素过敏显著相关。

从人类心脏文库中成功克隆了一个新的含有锚蛋白重复序列及SOCS盒结构域蛋白(Ankyrin repeat and SOCS box protein, ASB)的家族成员ASB10。该基因定位于染色体7q36.1, 开放阅读框包含1 329个核苷酸, 由7个锚蛋白重复序列和1个SOCS盒组成, 编码452个氨基酸,分子量大约是49.5 kD。物种间的进化型分析比较表明该基因是非常保守的, 人的ASB10基因和小鼠的Asb10基因有84.8 %的同源性。半定量RT-PCR实验结果证明Asb10基因在成年小鼠的心脏和肌肉组织中高表达, 提示其可能与心脏和肌肉组织的发育有关。亚细胞定位显示ASB10蛋白在细胞质和细胞核均有表达, 为进一步研究奠定了基础。