Wnt/β-catenin信号通路的正常表达是调控正常细胞生长、分化的重要通路, 对Wnt/β-catenin信号通路中靶点的研究也是当前肿瘤靶向治疗的热点。本文旨在探究低强度激光(LLLI)通过Wnt/β-catenin信号通路对RKO结直肠癌细胞的影响。利用632.8 nm波长的红外激光照射RKO细胞, 应用半定量聚合酶链式反应(RT-PCR)法筛选梯度低强度激光对RKO细胞Wnt/β-catenin信号通路中的APC、β-catenin、DVL基因表达的影响。RT-PCR结果显示: 15 J/cm2能量密度的低强度激光可以降低RKO细胞中β-catenin基因的表达, 可以增强APC及DVL基因的表达, 且有随能量密度的递增而递增的趋势, 差异有统计学意义。通过实时荧光定量聚合酶链式反应(qRT-PCR)法及蛋白质印迹(Western blot)法检测15 J/cm2能量密度的低强度激光照射后的RKO细胞相关指标的变化。qRT-PCR结果显示, Wnt5A、LRP5、TCF-4的基因表达均有不同程度的降低, 差异有统计学意义。Western blot结果显示, β-catenin蛋白表达的下降相对于空白对照组的差异有统计学意义。qRT-PCR及Western blot的结果表明, 15 J/cm2能量密度的低强度激光短时间照射仍能对RKO细胞Wnt/β-catenin信号通路的过度表达起抑制作用。活细胞/死细胞试剂盒染色观察15 J/cm2能量密度的低强度激光照射下, 试验组RKO死细胞较对照组多。综上所述, 15 J/cm2能量密度的低强度激光照射能通过抑制Wnt/β-catenin信号通路过度表达以延缓RKO结直肠癌细胞的增殖, 有剂量依赖性及时间累积效应, 并可能额外激活细胞凋亡途径导致细胞凋亡。本研究可为结直肠癌的治疗提供一种新的思路。

为探究绿色荧光蛋白(GFP)对结肠直肠癌细胞遗传物质稳定性是否存在影响, 选取3种常用的结肠直肠癌细胞系HCT116, SW480, DLD-1; 采用脂质体转染法把GFP转入细胞, 统计几种细胞系微核、核芽的比例; 分别比较各种细胞系自发微核、核芽和GFP组的差异。结果发现, HCT116细胞中对照组与GFP组的微核细胞率分别为3.24 %、2.76 %, 核芽细胞率为0.24 %、0.26 %; SW480细胞中对照组与GFP组的微核细胞率分别为3.49 %、3.58 %, 核芽细胞率为1.48 %、1.33 %; DLD-1细胞中对照组与GFP组的微核细胞率分别为1.12 %、1.28 %, 核芽细胞率为0.50 %、0.56 %。三种细胞系中自发微核、核芽数目和GFP组经2×2卡方检验, P值均大于0.05, 它们之间没有显著性差异。实验结果表明, 转染GFP不影响三种细胞系的遗传物质稳定性, GFP可以作为一种安全可靠的标记物用于哺乳动物细胞核的标记。