对肝细胞及肝病变细胞进行荧光光谱特性研究, 能为早期筛查与攻克肝癌提供光谱学依据。 实验目的包括, 通过光谱实验获得细胞特异性荧光光谱； 结合流式细胞仪获得最大饱和荧光强度与细胞直径的相关性。 实验过程, 首先使用荧光光谱仪来检测肝细胞、 肝纤维细胞以及两种肝癌细胞； 采用去拉曼散射的方法消除背景噪声, 获得五种浓度下细胞荧光光谱； 其次, 使用流式细胞仪检测四种细胞直径的大小, 根据双参数散点图分析四种细胞的直径特点； 最后, 利用高斯多峰拟合对比光谱差异, 并且分析细胞直径对荧光饱和强度变化趋势的影响, 得出细胞大小对荧光饱和强度非线性拟合曲线的影响规律。 光谱实验发现, 在550~750 nm之间, 肝细胞存在两个特异性荧光峰, 第一个峰值位于592 nm处, 第二个峰位于682 nm处, 且前者明显高于后者； 肝癌, 肝纤维细胞除具备与肝细胞相同位置的两个峰外, 在726 nm处出现第三个特异性荧光峰, 并在592 nm处获得最大激发光强, 在726 nm处的荧光峰高于在682 nm处的第二个荧光峰； 结合高斯多峰拟合法对峰值和各峰位置, 以及峰型展宽进行分析。 肝癌细胞和肝纤维细胞三个峰的展宽基本相同, 正常肝细胞最大激发峰展宽略小于另三种细胞, 但是682 nm处的小峰展宽略大于病变细胞； 流式细胞仪实验结果显示, 肝癌细胞直径大于肝纤维细胞大于肝细胞, 同种浓度下荧光强度也是肝癌细胞高于肝纤维细胞高于肝细胞； 利用非线性曲线拟合细胞最大荧光强度随浓度变化曲线, 根据曲线斜率的变化规律, 发现四种细胞的最大荧光强度会随着细胞浓度增大而增强, 但是逐渐呈现荧光饱和状态。 随着细胞直径增加, 最大荧光强度饱和趋势更为明显, 单个细胞自激发效率降低。 结果显示, 将细胞形态学与光谱学有机的融合, 结合两种分析方式, 能提高细胞判断的准确性和有效性。 通过对肝细胞、 肝癌细胞以及肝纤维细胞的荧光光谱特性进行研究, 并结合细胞直径分析荧光饱和变化趋势, 能够为肝病变细胞的研究提供一定的光谱学依据。

原发性开角型青光眼是常见的致盲性眼部疾病。 眼压升高是原发性开角型青光眼发生和发展最主要的危险因素, 是由小梁网途径的房水外流排出系统发生病变、 房水流出阻力增加所致。 研究表明, 房水中存在的转化生长因子-β能够使小梁细胞纤维化, 诱导小梁细胞过度增殖, 从而阻碍房水外流, 导致原发性开角型青光眼的发生。 原发性开角型青光眼发病隐蔽, 病程进展缓慢, 早期没有任何症状, 往往到晚期视力视野有显著损害时, 才会被发现, 因此原发性开角型青光眼的早期诊断尤为重要。 同步辐射红外显微成像结合高亮度、 高分辨率的同步辐射源, 同时配备傅里叶变换红外光谱仪与红外显微镜, 可以实现细胞的检测。 这对从分子层面获取细胞的变化信息, 深入理解疾病的发病机制以及疾病的早期诊断具有非常重要的意义。 虽然有很多红外光谱在生物医学领域的研究报道, 但是应用红外光谱显微成像技术研究细胞等生物医学体系仍然是亟待发展的领域, 并且目前未找到关于红外光谱用于小梁网细胞的检测报道。 在体外用转化生长因子-β对老鼠小梁网细胞进行诱导, 使其转化为肌成纤维细胞, 模拟小梁细胞纤维化过程。 对小梁网细胞以及经转化生长因子-β诱导形成的肌成纤维细胞进行同步辐射红外显微成像及光谱分析, 并进一步探讨同步辐射用于早期诊断原发性开角型青光眼的可行性。 研究表明肌成纤维细胞内的弹性蛋白明显高于小梁网细胞, 而弹性蛋白中95%为非极性氨基酸, 即氨基酸的侧链基团R基只有C和H两种元素。 对比两种细胞的红外谱图, 发现在2 934, 2 900和2 845 cm-1, 肌成纤维细胞的 CH3, CH2和CH的伸缩振动明显强于小梁网细胞, 推测可能是由于转化生长因子-β诱导后细胞内弹性蛋白增加所致。 在细胞层面检测了小梁网细胞的过度增殖, 为将来可以直接获取细胞的红外光谱从而检测小梁网细胞的增殖程度, 进而检测原发性开角型青光眼等疾病奠定了基础。 得出同步辐射红外谱学与显微成像有望成为检测原发性开角型青光眼新手段的结论, 也为将来便携式红外显微光谱仪临床实时检测青光眼等疾病提供了依据。

目的: 探讨超声导入碱性成纤维细胞生长因子(bFGF)对CO2点阵激光治疗痤疮瘢痕疗效及不良反应的影响。方法: 回顾分析2016年1月至 2019年2月79例痤疮瘢痕患者的临床资料, 根据治疗方法的不同分为对照组(n＝43, CO2点阵激光治疗)和研究组(n＝36, CO2点阵激光治疗＋超声导入bFGF治疗)。比较两组临床疗效, 记录两组创口愈合时间、红斑持续时间、误工期、不良反应发生率以及患者舒适度和外观满意度, 观察两组治疗前后瘢痕ECCA评分及皮肤红斑指数、黑素指数、经皮水分丢失量(TEWL)和角质层含水量。结果: ①研究组治疗总有效率为91.67%(33/36), 高于对照组的79.07%(34/43), 但差异无统计学意义(P＞0.05)。②研究组创口愈合时间、红斑持续时间、误工期短于对照组, 不良反应发生率低于对照组, 差异均有统计学意义(P＜0.05)。患者舒适度和满意度均高于对照组(P＜0.05)。③两组治疗前ECCA评分及皮肤红斑指数、黑素指数、TEWL、角质层含水量无统计学差异(P＞0.05), 治疗后ECCA评分、红斑指数、黑素指数TEWL明显下降(P＜0.05), 角质层含水量明显增高(P＜0.05), 但研究组ECCA评分、黑素指数、TEWL、角质层含水量改善幅度大于对照组(P＜0.05)。结论: 超声导入bFGF有助于提高CO2点阵激光治疗痤疮瘢痕的疗效和减少不良反应。

本文旨在建立快速获取豚鼠耳朵成纤维细胞的方法, 为豚鼠体细胞重编程技术提供起始细胞。首先采用0.05%Trypsin-EDTA和Collagenase IV两种消化酶对脱毛后的耳朵组织碎块进行消化;然后对获取的细胞进行体外培养和形态学观察, 支原体检测, Vimentin蛋白免疫荧光鉴定, 测定细胞生长曲线计算细胞倍增时间;用绿色荧光蛋白的逆转录病毒感染后用流式细胞仪检测感染效率, 核型鉴定检测病毒对核型的影响。分离的豚鼠耳朵成纤维细胞为贴壁生长细胞, 消化后2～3 h即大部分贴壁并基本完全伸展, 细胞呈梭形或多角形, 胞浆饱满, 立体感强, 细胞核清晰形态良好, 支原体检测阴性。细胞表达成纤维细胞特异性蛋白Vimentin。生长曲线为S形, 符合体外培养细胞正常生长增殖规律, 细胞倍增时间为24.85 h。逆转录病毒感染效率达75.6%, 病毒感染后染色体2n=64的细胞占90%, 遗传稳定核型正常。本研究提供的体细胞获取方法操作简单, 效率高, 获取的细胞状态良好, 细胞增殖速度快, 细胞感染率高, 是一种非常合适的豚鼠耳朵成纤维细胞分离手段, 为后续进一步研究豚鼠体细胞重编程提供了技术基础。

目的: 观察超脉冲CO2激光联合重组人碱性成纤维细胞生长因子治疗睑黄瘤的疗效。方法: 在局麻下用1～2 W的超脉冲CO2激光对睑黄瘤行非接触式照射烧灼至瘤体组织完全清除,显露出白色的类似筋膜样的组织。术后即时在创面上涂抹重组人碱性成纤维细胞生长因子,并用无菌纱布包扎伤口。之后每日一次在清洁伤口后涂抹重组人碱性成纤维细胞生长因子直至伤口脱痂愈合。结果: 本组91例患者,失访6例,共计11个病灶,即85例患者,共计191个病灶完成随访。191个病灶的疗效评价,优: 42个(22%),良: 128个(67%),中: 21个(11%),差: 0个(0%)。结论: 超脉冲CO2激光联合重组人碱性成纤维细胞生长因子治疗睑黄瘤,手术操作简单,术后美容效果佳,是一种值得推荐的治疗方法。

采用共聚焦显微拉曼光谱对毛竹薄壁细胞、 薄壁纤维过渡细胞和纤维细胞进行研究。 通过构建偏最小二乘(PLS)定量区分模型来对这三种细胞中的差异进行分析, 结果表明, 该区分模型的建模和交互验证决定系数(R2)分别为0.810和0.800, 均方根误差(RMSE)分别为0.323和0.332。 根据这一模型的回归系数, 发现三种细胞的区别主要体现在1　095, 1　319和1　636 cm-1三个波数, 这三个波数分别为纤维素、 半纤维素和木质素的指纹特征峰。 以这三个波数为自变量建立多元线性回归(MLR)模型, 该回归模型的建模和交互验证决定系数(R2)分别为0.644和0.643, 均方根误差(RMSE)分别为0.442和0.443, 表明三种细胞在这三个波数处存在明显的差异。 对小波变换基线消除后的拉曼光谱信号进行化学成像分析, 结果显示, 纤维素微纤维与纤维轴成一个很大的角度, 这一结构有利于提高细胞的弹性模量和硬度。 半纤维素和纤维素微纤维通过氢键相连, 并在范德华力的作用下紧密地结合在一起, 因此在拉曼化学成像中可以看到半纤维素和纤维素有相似的分布规律。 三种细胞的细胞角和胞间层都高度的木质化, 从细胞壁外层到内层木质化程度逐渐降低, 表明细胞壁的木质化从细胞角和胞间层开始, 且木质化程度并不完全。

研究和比较双波长低能量激光疗法(LLLT)对人皮肤成纤维细胞(CCC-ESF)的生长、酶活性以及生长因子等的影响,讨论弱激光促进伤口愈合的作用机理.体外培养CCC-ESF,实验分为对照组和照光组(635 nm 组、808 nm 组和635 nm/808 nm 组),照光剂量为20 mW/cm2、12 J/cm2,分别检测细胞增殖情况、活性氧(ROS)产量、抗氧化酶活性[过氧化氢酶(CAT)和超氧化物歧化酶(SOD)]、脂质氧化能力(MDA)以及细胞生长因子含量.635 nm 组细胞增殖速度明显大于其他各组；635 nm、808 nm 和635 nm/808 nm 组ROS 水平分别比对照组提高了14.55%、7.49%和14.92%；CAT 和SOD 酶活力提高；808 nm 激光促进MDA 增加；双波长激光使人白介素1(IL-1)和成纤维细胞生长因子(FGF)分泌量显著增多；808 nm 激光增加了人胰岛素样生长因子(IGF-1)和人胶质细胞源性神经营养因子(GDNF)的分泌.LLLT 诱导产生的低水平氧化应激反应可促进CCC-ESF 增殖,提升细胞活力,增强细胞对外界环境的抵抗能力.LLLT 刺激细胞分泌多种细胞因子,调控创伤愈合的进程.双波长激光产生的生物效应优于单一波长.

目的: 建立表达MICA*008和MICA*001蛋白的人包皮成纤维(human foreskin fibroblast, HFF)细胞, 为研究MICA基因的免疫功能提供生物学材料。方法: 组织块法原代培养HFF细胞；用脂质体将质粒pLXSN, pLXSN-MICA*008和pLXSN-MICA*001转染PA317包装细胞后收集病毒颗粒, 再将病毒颗粒感染HFF细胞, G418筛选14天, 扩增耐药细胞, westernblot检测 MICA*008和MICA *001蛋白表达情况。结果: 逆转录病毒载体pLXSN, pLXSN-MICA*008和pLXSN-MICA*001经包装细胞PA317包装可产生有感染能力的病毒, 该病毒感染HFF细胞后, westernblot检测出外源蛋白MICA*008和MICA*001。结论: 建立了表达MICA*008和MICA*001蛋白的人成纤维细胞。

提取北京油鸡8种组织的总RNA, 利用RT-PCR检测purH基因mRNA的差异表达。将purH基因完整开放阅读框定向插入pEGFP-N3, 构建带有GFP报告基因重组表达载体pEGFP-purH, 利用脂质体介导法将其导入北京油鸡体外培养细胞中, 进行G418药物筛选和克隆化培养。结果表明: 北京油鸡purH基因(GenBank 登录号: EU334506) 编码区为1 782 bp, 编码593 aa的多肽, 转染后24 h、48 h和72 h, pEGFP-purH转染率在10.3 %～53.2 %之间, 绿色荧光均匀分布于细胞质与细胞核中, 随表达量的增加, 绿色荧光在细胞核中聚集成团块状或颗粒状。经药物筛选和克隆化培养, 获得表达pEGFP-purH融合蛋白的克隆细胞株, RT-PCR与Western blotting检测确认pEGFP-purH已整合到北京油鸡成纤维细胞基因组中, 在优化的条件下, 阳性细胞凋亡率、生长与增殖状况与对照组比较差异不显著(P>0.05)。