类风湿关节炎(RA)是一类以滑膜增生、滑膜关节损害、活动功能不全为主要特点的慢性全身性自我免疫炎症性病变。目前, 对于RA的治疗包括药物治疗、外科手术治疗和物理疗法。物理疗法中光疗法由于其无侵袭力、无痛等优势, 被用作辅助治疗手段普遍应用于临床。为此, 本研究通过630 nm LED红光探讨了光生物调节法通过促进成纤维样滑膜细胞凋亡, 从而治愈类风湿性关节炎的机理。JC-1染色试验表明, 630 nm LED光照后线粒体膜电位去极化增强, 膜电位降低; 使用CASP3活性检测试剂盒和CASP9活性检测试剂盒进行试验, 证明630?nm LED可以促进MH7A细胞中CASP3和CASP9酶的活性; 实时荧光定量PCR(RT-qPCR)试验显示, 630?nm LED可以促进瞬时受体电位香草素1(TRPV1)的表达; 蛋白质免疫印迹试验(Western blot)证明, 经过630 nm LED红光照射可以促进MH7A细胞TRPV1蛋白的表达; CCK-8试验表明, 630 nm LED可以显著性抑制MH7A细胞活力, 但不能降低TNF-α刺激下TRPV1拮抗剂处理的MH7A细胞活性; TUNEL试验证实, 630 nm LED照射诱导MH7A细胞凋亡, 但不能诱导TNF-α刺激下TRPV1拮抗剂处理的MH7A细胞凋亡。综上所述, 630 nm LED红光在类风湿性关节炎中通过调控TRPV1促进TNF-α诱导的MH7A细胞凋亡, 这对辅助缓解RA滑膜炎症有一定作用。

目的: 探讨超声导入碱性成纤维细胞生长因子(bFGF)对CO2点阵激光治疗痤疮瘢痕疗效及不良反应的影响。方法: 回顾分析2016年1月至 2019年2月79例痤疮瘢痕患者的临床资料, 根据治疗方法的不同分为对照组(n＝43, CO2点阵激光治疗)和研究组(n＝36, CO2点阵激光治疗＋超声导入bFGF治疗)。比较两组临床疗效, 记录两组创口愈合时间、红斑持续时间、误工期、不良反应发生率以及患者舒适度和外观满意度, 观察两组治疗前后瘢痕ECCA评分及皮肤红斑指数、黑素指数、经皮水分丢失量(TEWL)和角质层含水量。结果: ①研究组治疗总有效率为91.67%(33/36), 高于对照组的79.07%(34/43), 但差异无统计学意义(P＞0.05)。②研究组创口愈合时间、红斑持续时间、误工期短于对照组, 不良反应发生率低于对照组, 差异均有统计学意义(P＜0.05)。患者舒适度和满意度均高于对照组(P＜0.05)。③两组治疗前ECCA评分及皮肤红斑指数、黑素指数、TEWL、角质层含水量无统计学差异(P＞0.05), 治疗后ECCA评分、红斑指数、黑素指数TEWL明显下降(P＜0.05), 角质层含水量明显增高(P＜0.05), 但研究组ECCA评分、黑素指数、TEWL、角质层含水量改善幅度大于对照组(P＜0.05)。结论: 超声导入bFGF有助于提高CO2点阵激光治疗痤疮瘢痕的疗效和减少不良反应。

本文旨在建立快速获取豚鼠耳朵成纤维细胞的方法, 为豚鼠体细胞重编程技术提供起始细胞。首先采用0.05%Trypsin-EDTA和Collagenase IV两种消化酶对脱毛后的耳朵组织碎块进行消化;然后对获取的细胞进行体外培养和形态学观察, 支原体检测, Vimentin蛋白免疫荧光鉴定, 测定细胞生长曲线计算细胞倍增时间;用绿色荧光蛋白的逆转录病毒感染后用流式细胞仪检测感染效率, 核型鉴定检测病毒对核型的影响。分离的豚鼠耳朵成纤维细胞为贴壁生长细胞, 消化后2～3 h即大部分贴壁并基本完全伸展, 细胞呈梭形或多角形, 胞浆饱满, 立体感强, 细胞核清晰形态良好, 支原体检测阴性。细胞表达成纤维细胞特异性蛋白Vimentin。生长曲线为S形, 符合体外培养细胞正常生长增殖规律, 细胞倍增时间为24.85 h。逆转录病毒感染效率达75.6%, 病毒感染后染色体2n=64的细胞占90%, 遗传稳定核型正常。本研究提供的体细胞获取方法操作简单, 效率高, 获取的细胞状态良好, 细胞增殖速度快, 细胞感染率高, 是一种非常合适的豚鼠耳朵成纤维细胞分离手段, 为后续进一步研究豚鼠体细胞重编程提供了技术基础。

研究和比较双波长低能量激光疗法(LLLT)对人皮肤成纤维细胞(CCC-ESF)的生长、酶活性以及生长因子等的影响,讨论弱激光促进伤口愈合的作用机理.体外培养CCC-ESF,实验分为对照组和照光组(635 nm 组、808 nm 组和635 nm/808 nm 组),照光剂量为20 mW/cm2、12 J/cm2,分别检测细胞增殖情况、活性氧(ROS)产量、抗氧化酶活性[过氧化氢酶(CAT)和超氧化物歧化酶(SOD)]、脂质氧化能力(MDA)以及细胞生长因子含量.635 nm 组细胞增殖速度明显大于其他各组；635 nm、808 nm 和635 nm/808 nm 组ROS 水平分别比对照组提高了14.55%、7.49%和14.92%；CAT 和SOD 酶活力提高；808 nm 激光促进MDA 增加；双波长激光使人白介素1(IL-1)和成纤维细胞生长因子(FGF)分泌量显著增多；808 nm 激光增加了人胰岛素样生长因子(IGF-1)和人胶质细胞源性神经营养因子(GDNF)的分泌.LLLT 诱导产生的低水平氧化应激反应可促进CCC-ESF 增殖,提升细胞活力,增强细胞对外界环境的抵抗能力.LLLT 刺激细胞分泌多种细胞因子,调控创伤愈合的进程.双波长激光产生的生物效应优于单一波长.

目的: 建立表达MICA*008和MICA*001蛋白的人包皮成纤维(human foreskin fibroblast, HFF)细胞, 为研究MICA基因的免疫功能提供生物学材料。方法: 组织块法原代培养HFF细胞；用脂质体将质粒pLXSN, pLXSN-MICA*008和pLXSN-MICA*001转染PA317包装细胞后收集病毒颗粒, 再将病毒颗粒感染HFF细胞, G418筛选14天, 扩增耐药细胞, westernblot检测 MICA*008和MICA *001蛋白表达情况。结果: 逆转录病毒载体pLXSN, pLXSN-MICA*008和pLXSN-MICA*001经包装细胞PA317包装可产生有感染能力的病毒, 该病毒感染HFF细胞后, westernblot检测出外源蛋白MICA*008和MICA*001。结论: 建立了表达MICA*008和MICA*001蛋白的人成纤维细胞。

提取北京油鸡8种组织的总RNA, 利用RT-PCR检测purH基因mRNA的差异表达。将purH基因完整开放阅读框定向插入pEGFP-N3, 构建带有GFP报告基因重组表达载体pEGFP-purH, 利用脂质体介导法将其导入北京油鸡体外培养细胞中, 进行G418药物筛选和克隆化培养。结果表明: 北京油鸡purH基因(GenBank 登录号: EU334506) 编码区为1 782 bp, 编码593 aa的多肽, 转染后24 h、48 h和72 h, pEGFP-purH转染率在10.3 %～53.2 %之间, 绿色荧光均匀分布于细胞质与细胞核中, 随表达量的增加, 绿色荧光在细胞核中聚集成团块状或颗粒状。经药物筛选和克隆化培养, 获得表达pEGFP-purH融合蛋白的克隆细胞株, RT-PCR与Western blotting检测确认pEGFP-purH已整合到北京油鸡成纤维细胞基因组中, 在优化的条件下, 阳性细胞凋亡率、生长与增殖状况与对照组比较差异不显著(P>0.05)。

针对动物模型伤口的光生物调节作用,用He-Ne激光对人正常皮肤成纤维细胞增殖的促进作用作为细胞模型,研究了麻醉药氯胺酮的影响。用MTT法测定细胞增殖作用,分别研究了1.56 mW/cm2 He-Ne激光(0,10,30,100和300 s照射)对人正常皮肤成纤维细胞的增殖作用和氯胺酮(0,0.6,1.2和2.0 μg/mL)预处理对He-Ne激光(300 s照射)细胞增殖作用的影响。氯胺酮(0.6,1.2,2.0 μg/mL)预处理能抑制468.7 mJ/cm2 He-Ne激光促人正常皮肤成纤维细胞增殖的作用。这说明动物实验中用于麻醉的药物可能对激光促进伤口愈合的实验结果有影响。