采用PCR技术,以参考人SRY基因HMG-box的保守区序列而设计一对特异引物,扩增了黑斑蛙和金线蛙的Sox基因.结果两种蛙的雌雄个体均扩增出217 bp的基因片段,与人对照相同.对扩增产物进行SSCP分析显示,两种蛙雌雄个体间的单链迁移率相同,两种蛙之间差异较小,而与人有较大差异.测序表明,两种蛙的Sox序列之间以及与各类物种的Sox基因都有非常高的相似性,充分显示出Sox基因在系统进化上的高度保守性.

运用PCR-RFLP法检测马身猪及其杂交后代H-FABP基因多态性.结果表明,马身猪在HinfⅠ-RFLP位点上有HH和Hh两种基因型,在HaeⅢ-RFLP位点上只有DD基因型,在HinfⅠ*-RFLP 位点上有BB和Bb两种基因型,等位基因以h、D、B占优势,其频率分别为0.958、1.000和0.968.其杂交后代在 HaeⅢ-RFLP位点上只检测到两种基因型DD和Dd.

目的:探讨人胚食管上皮永生化细胞株SHEE、SHEEMT、食管癌细胞株EC8712中PTEN表达的差,判断食管上皮细胞在恶性转化过程中是否有PTEN缺失现象的发生;方法:培养三种细胞株,采用免疫组织化学、激光共聚焦显微镜、流式细胞仪和Western blot等检测方法对三种细胞株中PTEN的表达进行检测.结果:三种细胞株均有PTEN的表达,表达强度与分化程度有关,PTEN在三种细胞株中表达强弱顺序为SHEE>SHEEMT>EC8712,差异有统计学意义 (P<0.01);结论:PTEN在SHEE、SHEEMT和EC8712三种来源于食管鳞状上皮但分化程度不同的细胞株均中表达,表达强度与分化程度相关,分化程度越高,表达越强.

采用光化化学疗法,外涂0.2% 8-MOP半小时后以光化肤康灯(主峰波长365 nm,终端输出功率25.4 W连续可调,幅照度:930 UW/cm2)照射,治疗手角化过度性湿疹60例,平均治疗间期1月,治愈率48.33%,显效率18.33%,有效率28.33%,无效率5%.未发现明显毒副作用.结果显示光化学疗法对手角化过度性湿疹有很好的疗效.

利用脉冲电泳介导绿色荧光蛋白(GFP)基因导入玉米种胚;以GFP基因在种胚中瞬时表达作为外源基因导入种胚细胞的标记,分析了外源DNA浓度、电泳时间、电压、电流转换时间等脉冲电泳转化参数对种胚发芽率和外源基因导入率的影响.结果表明:脉冲电泳时间对种胚发芽率和外源GFP基因导入率影响最大;通过脉冲电泳可将外源基因导入胚芽细胞,其GFP基因导入种子的频率与各电泳参数均呈二次曲线关系,300 μg/ml外源DNA浓度、120 min电泳时间、5 V电压、2 s电流转换时间可作为脉冲电泳介导玉米种胚转化较适宜的参数.

用60Coγ射线处理高免卵黄液,研究了不同剂量、剂量率对霉形体的灭活效果和对卵黄抗体的影响.结果表明,60Coγ射线可以完全杀灭高免卵黄液中的霉形体,霉形体在卵黄液中的灭活剂量为6.0 kGy;10.0 kGy以下的辐照剂量不影响卵黄液中蛋白质含量、pH值和活性氧自由基,同时不影响抗体效价.

采用PIV400型Nd:YAG激光器,对少见报道的产PUFAs丝状真菌菌株Monoblepharis polymorpha Cornu进行激光诱变育种.在激光照射剂量:波长532 nm,功率50 mW,时间10 min下,孢子致死率为75%～80%.突变株中ω-3系列PUFAs正突变率大于80%,ω-3系列突变株FPAm59传代10代以上性能稳定,在土豆基质上摇瓶培养6 d后,生物量达到8 g/L,产油率53.4%,GLA 343.1 mg/L、AA 1209.0 mg/L、EPA 125.1 mg/L、DHA 119.4 mg/L; 分别比对照菌株提高了2.5倍、9.7倍、18.0倍、6.6倍、10.3倍、3.8倍.结果表明,激光诱变育种是获得PUFAs高产菌株尤其是生产ω-3系列PUFAs菌株的有效方法.

用He-Ne激光照射日本沼虾的肌肉、眼柄和脑神经,研究其对日本沼虾细胞形态结构的影响.结果表明:(1)实验组的肌肉组织细胞具有明显异染色质的细胞数量百分比要比对照组的增大2.78%;(2)实验组的眼柄和脑的神经细胞核的平均直径要比对照组的分别增大2.40 μm和5.25 μm,核内具有明显异染色质的平均直径比对照组的分别增大10.20 μm和14.7 μm,实验表明He-Ne激光照射后细胞核内异染色质发生明显凝集,神经细胞核内异染色质的凝集尤为明显.

目的:对三套荧光显微成像系统在国产新型光敏剂HMME亚细胞定位研究中的应用特点及适用范围进行了比较与评价.方法:分别应用LSCM、CCD、ICCD荧光显微成像系统,选择特异性细胞器荧光探针Rhodamine-123、DIOC6(3)标记细胞内线粒体和内质网.采用细胞器-细胞荧光强度比值法,对 HMME进行单细胞内分布的定性与定量研究.结果:LSCM和CCD成像系统能采集到浓度达到160 μg/ml时的HMME 的荧光图像, 获得荧光探针图像信息显示所标记的细胞内线粒体和内质网平均荧光强度比值(J1/J2值)都明显高于细胞内J1/J2值.而 ICCD成像系统只需HMME浓度为5 μg/ml,荧光图像特点都呈胞浆中荧光强度较高且分布不均,细胞核区荧光较弱的中空现象.ICCD系统对细胞器探针荧光图像在空间分辨上不理想.结论:LSCM与CCD成像系统限于其探测灵敏度,对于弱荧光性光敏剂,适用于其高孵育浓度条件下的亚细胞定位研究.二者获得的结果相一致:孵育24 h,HMME在鼠肺内皮细胞线粒体和内质网有分布而几乎不进入细胞核.ICCD成像系统可不受孵育浓度条件的限制,实现光敏剂极微弱荧光的有效探测,但空间分辨率较低.

神经元是神经组织的结构和功能单位.从胚胎中分离出神经元时,由于它们在原位组织中完成了分裂和分化,原代培养的神经元将不会分裂、增殖.18 d孕龄的SD大鼠胎鼠脑组织中分离原代神经元的过程中,采用了改进的细胞分离方法.分离的原代细胞经免疫荧光实验证实含有大量的神经元.pEGFP质粒转染和细胞免疫荧光实验结果显示,转染的原代神经元中GFP报告基因有较高的表达,这表明,原代培养的神经元适宜于后续实验的进行.在对改进型方法和传统型?椒ǖ南赴掷胄Ч冉鲜?发现改进型方法在消化过程中产生的gDNA絮状物较传统型的少,接种后发现细胞分散均匀,无杂物.所获得的原代细胞的总数比传统型方法多出大约23%.

组织中的氧是由血管中扩散而来,存在一定的差异.光动力疗法使用的卟啉类光敏剂主要是通过将能量转移到氧分子产生单线态氧来产生毒性物质,因此在光动力治疗中有氧的消耗,使组织中氧分布对光动力作用具有特殊意义.本文对氧在靶组织和正常组织中的分布、光动力效应对组织中氧含量的影响、以及氧含量对光动力效应的反作用等方面进行了综述.

本文概述了近年来激光微束在植物外源基因转化上的最新进展,激光微束转化法的关键技术及应用.并对其今后的应用前景作了展望.

间隙连接蛋白31(Connexin31,Cx31)是间隙连接蛋白(Connexin)家族的一员,目前对于Cx31的功能及其调节方式知之甚少.本实验利用Fmoc固相多肽合成的方法合成Cx31羧基端一个多肽片段(250-266AA),经HPLC纯化后偶联到匙孔槭血蓝蛋白,免疫新西兰雄兔后采血检测、并纯化,采用Cx31myc表达蛋白进行Western blotting、细胞免疫荧光染色、免疫沉淀实验,证实得到的抗体为抗间隙连接蛋白31的特异抗体.

利用激光共聚焦显微技术(laser scanning confocal microscopy,LSCM)观测了香豆素类成分(coumarins)在球花石斛(Dendrobium thyrsiflorum Rchb.f.)根中的分布及相对含量,为合理利用药用石斛提供科学的理论依据.观察结果显示香豆素类成分主要分布于球花石斛根的细胞壁,尤以细胞的角隅处为多;自发荧光强度以外皮层的最高,根被的最低.

目的:观察纳络酮预防性治疗血管性痴呆大鼠对海马锥体神经细胞内钙离子的影响.方法:将30只大鼠随机分为假手术组、模型组、防治组.利用钙离子敏感探针Fluo-3与钙离子络合后被激发产生荧光的特点,应用激光共聚焦显微镜观察海马锥体细胞内钙离子的荧光强度,应用图像分析技术记性处理.结果:荧光像素平均值假手术组为135.05±29.14;模型组为484.05±298.72较假手术组明?陨?P＜0.01);防治组为139.39±30.74,较模型组明显降低(P＜0.01). 结论:纳络酮防治血管性痴呆大鼠与其抑制钙离子内流保护海马神经元有关.

本文利用对生基因转育获得的对生与互生自交系及其杂交组合,研究了对生性状对产量性状杂种优势和配合力的遗传效应的影响.结果表明:对生玉米同互生玉米一样具有普遍的杂种优势,在产量性状上F1对生株优势互×互组合大于对×对组合和对×互(互×对)组合;对生性状的转育对产量性状的一般配合力有降低效应,而含有对生基因的互生玉米具有较高的一般配合力效应,因此,在对生玉米育种中可以利用含有不同对生基因的互生自交系作亲本来组配杂交组合(互×互),从而获得较高的制种产量和高产的对生杂交种。