目的: 本实验选取大鼠胸主动脉为研究对象, 探讨定量偏光影像技术对双折光性物质的成像特点与适用研究领域。方法: 采用Abrio液晶偏光影像系统在未经染色条件下对青年和衰老大鼠胸主动脉纤维结构进行观察, 然后对主动脉切片进行苦味酸天狼猩红染色, 对比Abrio和传统偏振光技术成像的差别。结果: 较传统偏振光显微镜不同, Abrio可以对纤维双折射的方位角和光程差进行定量分析。在未经染色的条件下, Abrio可对大鼠胸主动脉中具有双折光性的纤维结构清晰成像, 而传统偏光显微镜在未经染色条件下不能给出有意义的信息。经苦味酸天狼猩红染色后, 对比传统偏振光技术, Abrio使成像不受纤维排列方向和人为因素的影响, 较为完整地反映主动脉中纤维的结构及分布情况。结论: Abrio液晶偏光影像技术能够实现对样本双折光的强弱及方向的定性和定量分析, 在未经染色的条件下给出微观结构信息, 适合于心血管疾病的检测与评估, 可拓展应用面宽, 将在未来生物医药领域中体现更大的价值。

目的: 建立DNA损伤的模型, 在蛋白水平和mRNA水平研究PCNA的表达变化情况。方法: UV照射和MMS处理细胞后利用Western blot和实时荧光定量PCR检测PCNA蛋白表达水平和mRNA水平的变化, 以及利用倒置荧光显微镜观察细胞的形态变化。运用ShRNA干扰技术降低泛素E3连接酶RAD18和CUL4A的表达, 检测内源PCNA蛋白表达水平的变化。结果与结论: UV照射和MMS处理细胞后, 细胞形态发生变化, 随着时间的延长, 大部分细胞趋于死亡。实时荧光定量PCR的结果发现PCNA的mRNA水平下降, 但是PCNA蛋白水平的表达无明显变化, 说明DNA损伤时PCNA蛋白的稳定性增加, 暗示细胞中存在着一定的机制, 维持PCNA蛋白表达量的稳定。干扰E3连接酶CUL4A和RAD18的表达时, PCNA蛋白水平有所升高, 提示二者参与了PCNA的降解过程。

研究了辐照协同氢氧化钠预处理油菜秸秆对酶解产还原糖的影响。利用响应面法对氢氧化钠反应条件进行了优化, 得出最优条件为氢氧化钠浓度为2.38%, 反应温度为100 ℃, 反应时间为0.5 h。这一条件预期还原糖产量为524.93 mg/g, 通过实验验证, 实际还原糖含量(528.51 mg/g)能够很好地与预期相吻合。扫描电镜观察表明, 辐照协同氢氧化钠预处理后秸秆表面积明显增大, 出现很多蜂窝状孔洞结构, 能够有效增大酶解可及表面积, 从而提高酶解效率。

为研究动脉粥样硬化中单核细胞膜流动性的变化, 本实验选用20只新西兰白兔建立动物粥样硬化模型, 提取模型组与对照组兔外周血中单核细胞, 通过荧光漂白恢复技术检测单核细胞膜流动性, 并结合动脉粥样硬化动物模型病理切片揭示其与动脉粥样硬化相关性。结果显示动物动脉粥样硬化模型建立成功, 模型组单核细胞膜的荧光恢复率和扩散系数均低于对照组。本研究揭示了单核细胞细胞膜的流动性与动脉粥样硬化的发生有关, 为今后深入探究单核细胞与动脉粥样硬化关系提供实验基础。

为了探讨60Co-γ射线对小麦HMW-GS组成的变异, 以及变异后代的稳定性和品质变异效应, 获得优质的种质资源, 本试验用200 Gy 60Co-γ射线辐照皖麦50干种子, SDS-PAGE法对M2代HMW-GS组成进行变异筛选, 并对M3代HMW-GS组成变异稳定性进行鉴定和GMP含量、GMP粒度、部分营养及加工品质进行测定。结果表明: 655株M2群体中, 有1个单株HMW-GS组成发生变异, 变异率0.15%; HMW-GS组分由亲本的7+9/2+12变为1/7+9/2+12, 并在M3代保持稳定; M3代5个变异穗行, 蛋白质含量、GMP含量、GMP/Pr均比皖麦50提高, GMP粒度分布范围扩大, 粒径大于10.28 μm的比例增加。

研究视黄酸(RA)在限定性内胚层细胞向胰腺前体细胞诱导过程中的最佳作用方式。在无饲养层培养体系下联合多因子分阶段诱导经历10天时间获得胰腺前体细胞。获得的细胞不仅表达胰腺前体细胞的标记pdx1, 但是也同时表达肝脏前体细胞的标记afp。有研究表明在胰腺特化过程中RA能起到抑制afp的作用, 因此在不同的时间点添加RA并持续不同的作用时间来调节内胚层细胞向肝胰分化的命运。收集d7到d10的细胞用免疫组化和RT-PCR检测pdx1和afp的表达情况。结果显示RA从d3开始持续作用到d10可以获得更高的pdx1阳性细胞同时能有效的抑制afp的表达, 并且在d9可以获得最高比率的pdx1阳性细胞, 提示RA持续作用促进限定性内胚层细胞向胰腺前体细胞分化。

F-box蛋白作为SCF(Skp1, Cullin and an F-box protein)复合体的成员, 参与调节植物的生长发育过程。At5g22700为功能未知的F-box基因家族成员。本研究通过酵母双杂交分析At5g22700蛋白与ASK (Arabidopsis-SKP1-like)家族蛋白的相互作用, 发现At5g22700蛋白的F-box结构域与ASK4蛋白相互作用。实时定量PCR分析该基因在不同组织器官中的表达, 发现该基因在根和花中的表达量最高, 说明At5g22700可能在根和花的发育中具有重要作用。以At5g22700基因的T-DNA插入突变体和过量表达转基因株系为材料, 分析不同光照条件下幼苗的表型, 发现蓝光下At5g22700过量表达转基因幼苗的主根比野生型长。这些研究结果表明, At5g22700在植物体内可能形成SCF复合体, 并在植物幼苗主根伸长生长中起促进作用。

高丝氨酸激酶(EC 2.7.1.39)是拟南芥中合成甲硫氨酸和苏氨酸的关键酶之一。作者利用DNAMAN软件分析高丝氨酸激酶的氨基酸组成和等电点; 利用生物信息学在线网站预测分析其疏水性、二级结构、跨膜结构域、信号肽区域、PEST序列、化学修饰位点及亚细胞定位等; 利用SWISS-MODEL软件进行同源建模, 使用Chimera(V1.8.1)做结构修饰处理, 最后利用Molprobity4及ERRAT(V2.0)对建模结果进行结构质量分析。结果发现: HSK预测等电点为8.48, 平均亲水性0.267; 二级结构中α-螺旋占34.32%, 不规则卷曲占48.11%, 延伸链占17.57%; 高丝氨酸激酶的预测模型经验证具有稳定的空间结构, 符合立体化学规则。

目的: 探讨Varp蛋白对人宫颈癌Hela细胞增殖及凋亡的影响。方法: 构建稳定表达Varp蛋白的Hela细胞株, 通过氚标胸腺嘧啶核苷酸(3H-TdR)掺入法及碘化丙啶(PI)染色流式细胞术检测Varp蛋白对Hela细胞增殖、凋亡等方面的影响。结果: 稳定表达Varp蛋白的Hela细胞相对于对照细胞, 其增殖明显下降, 而凋亡明显增加。结论: Varp蛋白在Hela细胞中稳定过表达能够增加细胞凋亡, 抑制细胞增殖。

以酶学分析方法研究了虎纹蛙消化道淀粉酶和脂肪酶的分布以及 pH和温度对这两种消化酶活力的影响。结果表明: 在各自生理pH值条件下, 虎纹蛙消化道不同部位淀粉酶活力大小顺序依次为前肠>中肠>后肠>食道>胃, 胃和肠淀粉酶最适pH值分别为8.6和7.0, 最适温度分别为35 ℃和40 ℃。脂肪酶活力大小顺序依次为中肠>后肠>前肠>胃>食道, 各部位之间差异显著(P<0.05), 胃和肠脂肪酶的最适pH值均为9.0, 最适温度分别为50 ℃和55 ℃。

为明确福建省马铃薯晚疫病菌线粒体DNA单倍型组成和分布情况, 采用PCR-RFLP方法分析了2010-2012年从福建省7个地区(福州, 长乐, 漳州, 青口, 龙海, 霞浦, 龙岩)分离的526个马铃薯晚疫病菌株的线粒体DNA单倍型及频率分布。结果表明Ⅰa型为主要单倍型, 占72.8％, 其次是Ⅱb型, 占26.42%, 最少的Ⅱa型, 占0.76％, 没有检测到Ⅰb型。与文献报道历史材料相比较, 说明福建省马铃薯晚疫病菌线粒体DNA单倍型的组成发生较大变化, 而且福建省马铃薯晚疫病菌线粒体单倍型组成比云南、四川和贵州等地区更为复杂。

目的: 为拓宽山西优质小麦品种资源, 采用田间试验, 研究来自黄淮麦区的6个优质小麦品种在晋中晚熟冬麦区的籽粒产量及品质性状表现。方法: 供试小麦品种分别是: 来自河南省国家小麦工程中心的豫农416(编号Y-1)、豫麦34(Y-2)、豫麦70(Y-3)和豫麦18(Y-4), 来自山西省农科院棉花科学研究所的舜麦紫秆(S-1)和舜麦1718D(S-2), 以山西农业大学育成品种山农129为对照(CK)。试验于2010年10月15日在山西农业大学实验农场进行, 收获后测定籽粒产量与产量结构及籽粒品质。结果: 引进的6个黄淮麦区育成小麦品种在晋中晚熟冬麦区晚播种植, 其籽粒品质均优于当地品种山农129, 但产量不足。6个引进品种在晋中晚播种植后, 其籽粒蛋白质含量、湿面筋含量等相关的籽粒品质亦明显高于原品种。相对而言, 豫麦34、豫农416和舜麦紫秆均为高蛋白(＞17%)强筋(≥32%)品种, 但前者高产(＞5 800 kg·hm-2), 后两者中产(＞4 300 kg·hm-2); 豫麦70和舜麦1 718D均为高蛋白中筋(30% - 32%)品种, 但前者中产, 后者低产(＜4 000 kg·hm-2); 豫麦18则为中等蛋白(＞16%)中筋的高产品种, 当地品种山农129为低蛋白(＜16%)低湿面筋(＜30%)的高产品种。结论: 豫麦34和豫麦18对改良山西小麦品种籽粒品质具有一定的意义。

建立了一种利用固相萃取小柱与高效液相色谱联用, 采用光电二极管阵列检测器测定复合薯片中丙烯酰胺的方法。以0.1%的甲酸水溶液为提取试剂, 采用Waters Oasis HLB固相萃取小柱(200 mg/6cc)对提取液净化处理, 然后以流动相为甲醇/水(5∶95, V∶V), 流速为0.6 mL/min, 检测波长为210 nm, 利用Agilent C18反相色谱柱进样分析。在该条件下丙烯酰胺的回收率达80%以上, 最低检测限小于10 ng/mL。该方法操作简便、重复性好、稳定性高, 可用于油炸复合薯片中丙烯酰胺的快速检测。

对一株新分离的、能以甲基对硫磷为唯一磷源生长的菌株JMUPMD-1, 利用形态特征观察和生理生化特性, 及结合rDNA ITS分子序列分析对JMUPMD-1进行鉴定; 采用气相色谱法检测培养过程中甲基对硫磷浓度的变化, 确定甲基对硫磷降解速率。该菌株的rDNA ITS序列与布朗克假丝酵母(Candida blankii)的同源性为99%, 形态特征和生理生化特性与布朗克假丝酵母相符合, 因此鉴定为布朗克假丝酵母。以350 μg/L甲基对硫磷为唯一磷源和350 μg/L甲基对硫磷及1 g/L K2HPO4组成的混合磷源培养该菌株, 测得该菌株的降解率为48.6 %。该菌株的胞内提取液具有明显的甲基对硫磷降解酶活性。

目的: 选育远端霉素高产菌株。方法: 以远端霉素产生菌(Streptomyces distallicus)D32为出发菌株, 经铜蒸汽激光和5-氟尿嘧啶(5-fu)及其复合处理。结果: 在复合诱变组中获得一株远端霉素高产稳产突变株DZ-206, 经发酵罐应用后, 其产率较出发菌株提高1.38倍。结论: 该方法诱变谱广, 突变率高, 能够快速有效获得抗生素高产菌株。

利用表面修饰的方法制备了5-ALA表面修饰的TiO2(5-ALA/TiO2), 并利用傅里叶红外光谱, 拉曼光谱以及紫外-可见光吸收光谱(UV-Vis)对样品进行了表征。利用 Cell Counting Kit-8 (CCK-8)法检测研究5-ALA/TiO2对HL60细胞的灭活效应。结果显示, 5-ALA/TiO2能够显著地抑制HL60细胞的生长, 5-ALA/TiO2对HL60细胞的灭活效率要明显高于5-ALA以及TiO2, 实验中5-ALA/TiO2的灭活效率达到77.9%, 相衬显微镜细胞形态学无损观察表明, 细胞凋亡开始于细胞膜的破裂。同时, 激光显微拉曼光谱检测显示, TiO2纳米粒子能够进入细胞内部, 与细胞发生相互作用。