1 湖南师范大学心脏发育研究中心, 长沙 410081
2 莱州市妇幼保健院, 烟台 261400
甲醛溶液浸泡的人类组织样本很多情况下是可遇不可求的珍贵资源, 而其 DNA 的提取是一大难题。本文分别使用改进的甲醛溶液浸泡样本基因组DNA提取方法以及通用型基因组DNA提取试剂盒, 对四份不同时间固定的福尔马林浸泡的人类胚胎皮肤和肌肉的样本进行基因组DNA提取。使用紫外分光光度计鉴定所提取DNA的纯度和质量浓度, DNA溶液点样进行琼脂糖凝胶电泳及成像, 结果显示, 改进的提取方法所得基因组DNA的质量浓度和纯度均优于通用型基因组DNA提取方法。以提取所得的基因组DNA模板进行PCR扩增, 电泳结果显示, 改进的提取方法所提取的基因组DNA有更好的PCR扩增效果。本研究为甲醛溶液浸泡的珍贵样本的基因组DNA的提取提供了方法指导和改进方向的参考。
甲醛浸泡 人类组织样本 DNA提取 PCR检测 琼脂糖凝胶电泳 formaldehyde immersion human tissue samples DNA extraction PCR detection agarose gel electrophoresis
1 湖南师范大学生命科学学院, 湖南 长沙410081
2 湖南农业大学 a.科学技术师范学院
3 湖南农业大学 b.生物科学技术学院, 湖南 长沙410128
沼气发酵系统是一个复杂的生态系统, 其污泥微生物超过99%是不可培养的。为了优化沼气池纤维素的转化效率、沼气的产率和开展污泥微生物多样性研究, 本研究采用化学裂解法、溶菌酶裂解法和QIAamp DNA Stool Mini Kit提取了沼气池污泥样品中微生物的总DNA, 对三种方法的DNA得率、纯度、大片段提取效果以及是否含有PCR反应抑制剂进行了研究, 最后对16S rRNA基因V3区的扩增产物进行了PCR变性梯度凝胶电泳(PCR-DGGE)分析。与化学裂解法和QIAamp DNA Stool Mini Kit法相比, 溶菌酶裂解法得到的DNA量大、片段长、片段分布广、PCR扩增效率高; 同时PCR-DGGE图谱显示, 溶菌酶裂解法可更好地展示沼气池污泥中微生物的多样性。该结果为进一步提高沼气池中纤维素的转化效率和沼气生产优势菌种的质和量打下了一定的前期基础。
沼气池污泥 总DNA提取 微生物多样性 biogas digesters total DNA extraction PCR denaturant gradient gel electrophoresis PCR-DGGE microbial diversity
安徽农业大学生命科学学院,中国,安徽,合肥,230036
市场中药干品的药性差异一直是影响中药标准化的瓶颈,而检测技术相对落后是导致这一现象的主要原因.DNA分子水平检测的困难是药材干品的基因组DNA难以提取.本文以铁皮石斛(Dendrobium candidum)干茎为材料,采用了四种方法从干品石斛中提取基因组DNA.结果表明,采用改良的CTAB法可从石斛干品尤其是干茎皮中提取质量较高的基因组DNA,其分子量大于23kb,以此DNA为模板进行不同引物的PCR扩增可获得清晰的RAPD条带.该研究初步建立了石斛干品合适的RAPD技术体系.
石斛干品 干茎皮 DNA提取 RAPD分析 air-dried Dendrobium dried stem coat genomic DNA e
