孙鲁宁 1,2杨博宇 3刘玲 1,2朱俊伟 1,2[ ... ]谢华平 1,2,4,*
作者单位
摘要
1 湖南师范大学 动物肠道功能调控湖南省重点实验室,长沙 410081
2 湖南师范大学 动物营养与人体健康实验室,长沙 410081
3 湖南师范大学 体适能与运动康复湖南省重点实验室,长沙 410081
4 湖南师范大学 淡水鱼类发育生物学国家重点实验室,长沙 410081
GPR112蛋白作为黏附类G蛋白偶联受体(aGPCRs)家族的一员,由GPR112基因编码。它含有7个跨膜结构域,与G蛋白相互作用行使其功能。斑马鱼作为研究脊椎动物发育的重要模式生物,其基因组中含有GPR112的同源基因gpr112a,且在幼鱼和成鱼中均有表达。为了研究GPR112在脊椎动物生存和发育中的作用,利用CRISPR-Cas9技术构建了gpr112a基因敲除斑马鱼品系。首先,合成用于靶向gpr112a基因第二外显子的一对sgRNAs,经显微注射得到F0代嵌合体斑马鱼。然后,对嵌合体与野生型斑马鱼杂交所得的F1代斑马鱼进行基因型鉴定,筛选gpr112a突变杂合子,并对其gpr112a突变等位基因进行Sanger测序,以确定gpr112a基因敲除品系的建立。之后,gpr112a突变杂合子斑马鱼自交,获得gpr112a纯合子突变斑马鱼。经显微成像并观察发现,受精后7 dpf的gpr112a突变纯合子斑马鱼并没有出现与野生型差异明显的表型,这可能是斑马鱼机体的代偿机制所致。此研究为探究GPR112基因在脊椎动物生存和发育中的作用开辟了道路。
斑马鱼 基因敲除 代偿机制 zebrafish gpr112a gpr112a CRISPR-Cas9 CRISPR-Cas9 gene knockout compensatory mechanism 
激光生物学报
2022, 31(6): 526
作者单位
摘要
1 湖南师范大学心脏发育研究中心, 长沙 410081
2 莱州市妇幼保健院, 烟台 261400
甲醛溶液浸泡的人类组织样本很多情况下是可遇不可求的珍贵资源, 而其 DNA 的提取是一大难题。本文分别使用改进的甲醛溶液浸泡样本基因组DNA提取方法以及通用型基因组DNA提取试剂盒, 对四份不同时间固定的福尔马林浸泡的人类胚胎皮肤和肌肉的样本进行基因组DNA提取。使用紫外分光光度计鉴定所提取DNA的纯度和质量浓度, DNA溶液点样进行琼脂糖凝胶电泳及成像, 结果显示, 改进的提取方法所得基因组DNA的质量浓度和纯度均优于通用型基因组DNA提取方法。以提取所得的基因组DNA模板进行PCR扩增, 电泳结果显示, 改进的提取方法所提取的基因组DNA有更好的PCR扩增效果。本研究为甲醛溶液浸泡的珍贵样本的基因组DNA的提取提供了方法指导和改进方向的参考。
甲醛浸泡 人类组织样本 DNA提取 PCR检测 琼脂糖凝胶电泳 formaldehyde immersion human tissue samples DNA extraction PCR detection agarose gel electrophoresis 
激光生物学报
2022, 31(2): 188

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