表面增强拉曼散射(Surface-enhanced Raman Scattering, SERS)技术作为鉴定生物分子种类最有力的分析工具之一, 具有灵敏度高、特异性强、稳定性好及检测条件温和等优点。目前, SERS技术在肿瘤病理领域的应用尚处于起步阶段, 但已显现出良好的应用前景和发展空间。该文简要介绍了SERS的机理、特性及活性基底, 并对SERS技术在肿瘤病理的研究进展、局限性及潜在应用价值方面做较为全面的综述。

介绍了光动力学疗法治疗肝胆肿瘤的实验室和临床研究现状, 提出了光动力学疗法在治疗肝胆肿瘤面临的问题, 并建议在腹腔镜手术中引入光动力学疗法, 认为随着新型光敏剂及光源的开发应用, PDT将会成为治疗肝胆肿瘤的切实可行方法。

基于激光与生物组织作用时产生的光致破裂效应, 利用脉冲激光直接聚焦于孕囊内的胚胎内部, 激光产生的光致破裂效应对胚胎心脏造成损伤, 造成胚胎的快速死亡, 初步证明利用激光进行减胎手术有望成为一种新方法。采用输出波长1 064 nm、脉宽8 ns、单脉冲能量60~96 mJ可调的脉冲激光作用于牛肌肉组织样品, 并用光学相干层析成像(OCT)系统测量实验样品的损伤直径和损伤深度, 建立了不同的激光参数与被作用样品的损伤直径及损伤深度之间的关系。得出结论: 样品的损伤深度和损伤直径与激光的脉冲能量成正相关关系, 而与激光的脉冲频率成负相关关系。这对于激光应用于减胎手术时参数的优化和精确控制起到一定的指导作用。

辐射诱导的旁效应不仅在体外实验存在, 也在动物体内存在, 这对辐射剂量的计算和辐射风险的评估有重要影响。咖啡因是一个模式辐射敏感剂, 显著增强辐射的细胞毒性。咖啡因也显著增强辐射诱导的旁效应, 咖啡因处理使未受辐照的旁细胞对损伤信号更加敏感, 但其机理并不清楚。在正常人原代细胞AG1522中, 分析了咖啡因处理对组蛋白H2AX磷酸化的影响, 咖啡因显著减少α粒子辐射区和旁区γ-H2AX foci阳性细胞的比率和每个细胞γ-H2AX foci点数, 表明咖啡因处理抑制了H2AX磷酸化, 后者启动细胞对DNA双链断裂的修复, 从而提示咖啡因增强辐射旁效应可能的机理, 对辐射治疗具有重要意义。

探明超级小麦品种的旗叶光合作用与荧光动力学特性, 为超级小麦品种选育利用提供理论依据。以超级小麦临麦4号为试验材料, 应用CI-301PS型便携式光合作用测定系统和FMS-2便携式荧光测定仪(英国Hansatech 公司)在田间试验中测定旗叶光合作用与荧光动力学参数。结果表明, 与普通高产对照品种皖麦52和烟农19相比, 超级小麦临麦4号的光合作用参数光合速率、光饱和点和CO2饱和点、羧化效率高, 光补偿点和CO2补偿点低；光合机构系统工作参数PSII实际的光化学效率(ΦPSII)、光化学猝灭系数(qP)、PSII反应中心的激发能捕获效率(Fv/Fm)、PSⅡ潜在活性Fv/Fo和电子传递速率(ETR)值高, 非光化学猝灭系数(NPQ)值低。这表明超级小麦临麦4号的光合机构系统工作能力强和工作效率高, 保证旗叶光合作用的高效运行, 为子粒灌浆提供充足的能量和碳水化合物。

采用以没食子酸为标准, 研究了Folin-ciocalteu比色法测定桑叶中多酚含量的适宜条件。结果表明, 桑叶提取液在Folin-ciocalteu试剂2.0 mL、20% Na2CO3溶液5.0 mL、反应温度30 ℃、反应时间2 h的条件下, 测定其760 nm处的吸光值, 多酚浓度在10.0～100.0 mg／L范围内与吸光值呈良好的线性关系；稳定性、精密度、重现性和回收率实验的相对标准偏差为0.2969%～2.502％。该法是一种简便、快速、准确测定桑叶多酚含量的可靠方法。

本研究以随机GFP::cDNA融合基因转基因拟南芥为材料, 筛选到在细胞核或在细胞核和细胞质中均表达GFP信号的转基因株系58个。对这些转基因株系中的cDNA插入片段进行克隆, 获得4株插入片段能按原初编码框进行编码的转基因株系。对插入片段为编码富含甘氨酸蛋白AtGRP8 C-末端(富含甘氨酸的结构域)的转基因株系R2的表型分析发现, 连续白光、红光或蓝光下其幼苗的下胚轴比野生型的要短, 且较低光照强度白光(低于100 μmol m-2 s-1)、蓝光(低于75 μmol m-2 s-1)下的差异更加明显, 但是黑暗中其幼苗的下胚轴与野生型相比无明显差异, 表明AtGRP8蛋白可能通过其C-末端功能域参与调控拟南芥的光形态建成反应。

目的: 研究沙眼衣原体抑制宿主细胞凋亡活性与MAPK/ERK信号通路的关系。方法: 利用化学抑制剂U0126阻断MAPK/ERK信号通路, 然后分别采用流式细胞术、Caspase-3活性检测试剂盒和Western Blot实验检测沙眼衣原体感染细胞在凋亡诱导剂Etoposide作用下细胞凋亡率和Caspase-3活性变化, 以及PARP是否发生裂解。结果: 当MAPK/ERK信号通路被阻断时, 在Etoposide的作用下, 沙眼衣原体感染细胞凋亡率明显上升, 同时Caspase-3被活化和PARP发生裂解。结论: 沙眼衣原体抑制宿主细胞凋亡活性与MAPK/ERK信号通路激活有关。

在室内条件下通过菌丝生长速率法测定了分离自安徽省10个县市的油菜菌核病菌(Sclerotinia sclerotiorum)对速克灵的敏感性。结果表明, 速克灵对各供试菌株的EC50值分布范围为 0.0899-0.4966 μg/mL, 平均为0.2541 μg/mL, 且供试菌株在含速克灵质量浓度为10 000 μg/mL的PDA平板上菌丝生长几乎完全被抑制。表明各供试菌株对速克灵十分敏感, 但其敏感程度地区间存在较大差异。通过室内药剂直接诱变法, 获得了抗速克灵突变株。抗性突变株抗性测定结果表明, 某些地区的抗性菌株抗性消失, 有些地区的抗性菌株抗性继续保持。结果显示安徽省油菜菌核病菌对速克灵具有潜在的抗药性风险。

目的: 建立表达MICA*008和MICA*001蛋白的人包皮成纤维(human foreskin fibroblast, HFF)细胞, 为研究MICA基因的免疫功能提供生物学材料。方法: 组织块法原代培养HFF细胞；用脂质体将质粒pLXSN, pLXSN-MICA*008和pLXSN-MICA*001转染PA317包装细胞后收集病毒颗粒, 再将病毒颗粒感染HFF细胞, G418筛选14天, 扩增耐药细胞, westernblot检测 MICA*008和MICA *001蛋白表达情况。结果: 逆转录病毒载体pLXSN, pLXSN-MICA*008和pLXSN-MICA*001经包装细胞PA317包装可产生有感染能力的病毒, 该病毒感染HFF细胞后, westernblot检测出外源蛋白MICA*008和MICA*001。结论: 建立了表达MICA*008和MICA*001蛋白的人成纤维细胞。

构建钙激活酶激活蛋白基因(UK114)的原核表达载体并优化其表达条件,为其高效表达提供试验依据。以UK114 cDNA为模板,通过PCR方法扩增钙激活酶激活蛋白基因,将其克隆到原核表达载体pGEX-4T-3中, 酶切及测序鉴定重组体。将构建好的重组质粒转化大肠埃希菌BL21 (DE3) , 用IPTG进行诱导表达, 在保持菌种不改变的前提下,分别改变IPTG的浓度、培养时间、菌体浓度、培养温度等来优化表达条件。结果显示,原核表达载体pGEX-4T-3-UK114成功构建,可在大肠埃希菌BL21 (DE3)中诱导表达,得到相对分子质量约40 kD的GST-UK114融合蛋白。在IPTG浓度为0.3 mmol/L, 诱导温度为32 ℃, 诱导时间为4 h, 菌体密度OD600为0.6的条件下,目的蛋白表达量最高。试验成功构建原核表达载体pGEX-4T-3-UK114且获高效表达,为研究UK114生物学活性及产品开发提供了试验基础。

lbe是已经证明的心脏标记基因。为了深入研究lbe在心脏发育中的功能, 需要获得lbe蛋白并制备其抗体。首先提取野生型成体果蝇的总RNA, 反转录获得其cDNA文库, 通过PCR克隆出lbe编码区序列, 将其连接到pET-28a原核表达载体上。经酶切及测序鉴定后, 质粒构建成功。将重组质粒(pET-28a-lbe)转化大肠杆菌菌株Rosseta,用IPTG诱导表达出融合蛋白, 经Ni-IDA凝胶柱纯化后, 最后将纯化的融合蛋白免疫新西兰大白兔制备lbe多克隆抗体,并用Western blotting检测抗体的效价和特异性。结果显示获得了lbe原核表达重组融合蛋白及高效价的特异性兔抗lbe多克隆抗体, 为lbe功能的进一步研究奠定了基础。

为了了解湖南长沙某医院临床分离的肺炎克雷伯菌中质粒介导AmpC β-内酰胺酶的产生情况及其基因型, 收集了该医院2008年3月至2010年10月临床分离的多重耐药肺炎克雷伯菌104株, 用头孢西丁纸片扩散法对这些菌株进行表型初筛, 用多重PCR确定ampC耐药基因型；结果发现其中有19株对头孢西丁纸片不敏感, 疑为产AmpC酶菌株；再经多重PCR扩增, 有12株菌分别在约400 bp(11株)和约350 bp(1株)出现了阳性条带, 特异性PCR证明此12株菌分别携带了DHA型(11株)和ACC型(1株)ampC耐药基因；产质粒介导AmpC酶肺炎克雷伯菌的分离率为11.5%(12/104)。该医院产质粒介导AmpC酶肺炎克雷伯菌的分离率较高, 应对其检测与监测给予足够重视, 以指导临床合理选用抗菌药物。

为进一步筛选高产灰黄霉素的工业生产菌株, 分别对前期采用紫外线-氯化锂(UV-LiCl)、半导体激光(LD laser)及CO2激光(CO2 laser)对展青霉FS80-1复合诱变获得三株高产菌株进行液体发酵和固体培养比较。结果表明, 通过UV-LiCl复合诱变获得突变菌株GM120-43的液体发酵产灰黄霉素效价11 982 μg/mL, 比出发菌株提高37.52%, 固体培养效价为89 496 μg/g(干重), 比出发菌株提高80.04%。；半导体激光诱变获得突变株LD100-1的液体发酵效价9 440 μg/mL, 固体培养效价119 766 μg/g干重, 比出发菌株FS80-1提高了140%；两个突变株的生物学特性均发生不同程度的变化, 突菌株GM120-43适合于液体发酵生产, 突变株LD100-1适合于固体发酵培养。

报道了一种改进的小麦转化方法——超声波辅助的农杆菌转化法。发芽的小麦种子经超声波处理20 min后再经农杆菌浸染, 浸染后的种子按正常播种和栽培管理至结实, 对收获的成熟种子进行卡那霉素抗性筛选。结果表明, 受试的4个小麦品种均得到抗性后代, PCR扩增结果证明这些抗性植株是转化植株。GUS染色结果表明不经超声波处理的种子几乎看不到转化的细胞, 但经过超声波处理的种子, 幼苗基部的细胞转化成功。研究表明, 利用超声波辅助的农杆菌转化方法转化小麦能产生可遗传的后代。

以白腐菌WY01为出发菌, 利用N+注入技术选育出一株遗传性状稳定的漆酶高产诱变菌株WY02, 经过60 d的发酵培养, 其产酶量由出发菌的13.75 U/g增加到52.5 U/g, 即产酶量提高了2.82倍；诱变菌株WY02对油菜秸秆中的木质素、半纤维素和纤维素的降解率分别为54.1%, 39.1%, 32.8%, 用红外光谱法(IR)分析经诱变菌株降解后的油菜秸秆中木质素官能团的变化, 用于阐明诱变菌株对油菜秸秆中木质素的生物降解机制。结果表明: 油菜秸秆经白腐菌诱变菌株降解后, 其木质素含量明显降低。木质素与苯环相连的C=O键、木质素侧链上CH2结构以及木质素单体(紫丁香基和愈创木基)被部分降解, 木质素的苯环结构遭到一定程度的破坏。

针对传统电泳检测方法存在操作复杂、费时等缺点, 提出一种用于检测K-ras癌基因点突变的实时荧光等位基因特异性扩增(Allele specific amplification, ASA)方法。该法采用突变型引物对结肠癌基因组中的K-ras基因进行等位基因特异性扩增, 只有突变型样品能被顺利扩增出双链DNA产物, 该产物能与双链DNA染料SYBR Green Ⅰ结合, 产生荧光信号从而被检测到。通过对荧光域值和溶解曲线分析来区分不同的基因突变类型。该法可以检测到野生型DNA中含量为1/1 000的突变型DNA, 整个检测时间小于1 h。我们用该法检测31例结肠癌样品中K-ras基因密码子12发生的点突变, 其中有15例检出为阳性。此外, 还采用等位基因特异性扩增结合电泳分析对样品进行了检测, 并对两种方法进行了比较。结果显示: 实时荧光等位基因特异性扩增方法具有操作简便、快速、检测成本低等优点, 为临床诊断基因突变引起的疾病提供了一种可行的手段。

利用液晶空间光调制器(LCSLM)对光学显微中的成像光进行实时的相位/振幅调制, 不仅可以实现各种传统的生物样品相位显微, 而且能够以更复杂的相位调制方式, 如螺旋相位滤波, 得到新的显微图像。该方式已经和荧光显微、光镊技术结合, 丰富了生物显微技术。