哈尔滨医科大学第二附属医院神经外科,哈尔滨市,150086
目的 探讨血卟啉甲醚-光动力学疗法(PDT)诱导C6胶质瘤细胞的凋亡机制.方法 常规传代培养C6胶质瘤细胞系,取处于对数生长期细胞按实验要求分组接种于96孔培养板上,应用光敏剂血卟啉甲醚,以不同照光剂量(40、80、120、160、200、240、280和320 J/cm2)处理C6胶质瘤细胞.MTT法检测不同照光剂量的细胞死亡率;电镜观察PDT后C6细胞形态学变化;以Fluo-3/AM为细胞内钙离子荧光指示剂,激光共聚焦显微镜测定不同照光剂量作用后C6胶质瘤细胞内[Ca2+]i.结果 PDT组对C6胶质瘤细胞死亡率影响显著,照光剂量与细胞死亡率正相关,随照光剂量增加,细胞死亡率逐渐增大,当达到能量密度大于200 J/cm2时,细胞死亡率不再明显增加.PDT作用后早期出现一定数量凋亡的C6胶质瘤细胞和多数线粒体、内质网等亚细胞结构肿胀.PDT作用晚期可见大量坏死细胞和部分凋亡细胞.PDT作用后C6胶质瘤细胞内游离钙明显升高.结论 血卟啉甲醚-PDT诱导C6胶质瘤细胞坏死和凋亡,钙超载在广泛超微结构损伤中起重要作用.
血卟啉甲醚 光动力学疗法 C6胶质瘤细胞 钙超载
1 上海交通大学医学院附属仁济医院,上海,200001
2 上海市激光医学重点实验室,上海,200001
目的:通过细胞学水平研究确定ALA配合小剂量HPD激光光动力疗法促使肿细胞凋亡及死亡的光敏药用药剂量及与两者单独使用的差别.方法:以不同剂量的ALA(20μg/ml、40μg/ml、60μg/ ml、80μg/ ml、160μg/ ml)、HPD(1μg/ml、2μg/ml、3μg/ml、4μg/ml、5μg/ml)、两者联合与C6胶质瘤瘤细胞一起培养,随后以630nm半导体激光200mW/cm2,照射肿瘤细胞,照射20分钟,及与不用光敏剂单照激光、单用光敏剂不照光、不用光敏剂不照激光空白对照组比较.以流式细胞仪及倒置显微镜、电镜观察促使肿瘤细胞凋亡或死亡的差别,寻找促使肿瘤细胞凋亡或死亡的最小合适剂量.结果:ALA40μg/ml配合HPD2.5μg/ml与C6胶质瘤细胞同时培养,630半导体激光200mW/cm2,照射20分钟组从倒置显微镜及电镜形态学观察及流式细胞仪测定是能达到较佳的细胞凋亡的最小光敏剂剂量.单纯ALA-PDT组中能达到小鼠C6胶质瘤细胞明显凋亡的最小剂量是ALA(80μg/ml),单纯HPD-PDT组中能达到小鼠C6胶质瘤细胞明显凋亡最小剂量是HPD(5μg/ml).结论:ALA40mg/kg配合HPD2.5mg/kg,630半导体激光200mW/cm2,照射20分钟是能达到小鼠C6胶质瘤细胞明显凋亡的最小光敏剂剂量.
ALA联合HPD 光动力学治疗 C6胶质瘤细胞 细胞凋亡 坏死
1 哈尔滨医科大学第一临床医学院神经外科,哈尔滨市,150001
2 哈尔滨医科大学第四临床医学院神经外科
目的探讨光动力学疗法(photodynamic therapy,PDT)与白花蛇舌草联合应用对大鼠C6胶质瘤细胞的作用.方法常规培养的Wistar大鼠C6胶质瘤细胞用MTr法、吖啶橙/溴乙啶(AO/EB)双荧光染色法和流式细胞术观察PDT联合白花蛇舌草对体外培养的大鼠C6胶质瘤细胞存活率的影响、检测凋亡、分析对细胞形态学及细胞周期的影响.结果白花蛇舌草可明显抑制C6胶质瘤细胞的生长;使肿瘤细胞聚集在S期并诱导其凋亡.PDT与各浓度白花蛇舌草联合可抑制C6胶质瘤细胞增殖(P＜0.01).白花蛇舌草和PDT均可在一定程度上诱导C6胶质瘤细胞凋亡,二者联用后诱导细胞凋亡作用显著增强,这种作用在白花蛇舌草浓度为5.0μg/ml作用12 h时最明显.结论白花蛇舌草可与PDT协同抑制C6胶质瘤细胞的增殖.其协同作用的机制可能与诱导细胞凋亡有关.
光动力学疗法 白花蛇舌草 C6胶质瘤细胞 细胞凋亡
上海第二医科大学附属仁济医院,上海市激光医学研究中心,200001
目的:通过细胞学水平研究不同剂量ALA光动力学治疗对C6胶质瘤细胞细胞凋亡的影响.方法:以不同剂量的ALA(10μg/ml、20μg/ml、40μg/ml、80μg/ml、160μg/ml)与C6胶质瘤细胞一起培养,随后以630nm半导体激光200mW/cm2,照射肿瘤细胞,照射20分钟,及与不用光敏剂单照激光、单用光敏剂不照光、不用光敏剂不照激光空白对照组比较.以流式细胞仪及倒置微镜、电镜观察促使肿瘤细胞凋亡或死亡的差别,寻找促使肿瘤细胞凋亡或死亡的最小合适剂量.结果:对照组没有细胞凋亡,ALA-PDT组随着剂量的增加细胞凋亡数增加.尤其晚期凋亡数明显增加,用药剂量增加至40μg/cc才能达到活细胞少于50%,即使剂量增加到160μg/cc,还是有19.7423的活细胞存在.结论:单纯用ALA激光PDT治疗不能达到完全将肿瘤细胞杀灭,ALA40mg/kg激光光动力学治疗才能得到明显的治疗效果.
光动力学治疗 C6胶质瘤细胞 细胞凋亡 ALA ALA-PDT C6 glioma cells apoptosis
1 哈尔滨医科大学附属第二医院神经外科,哈尔滨市,150086
2 哈尔滨医科大学药理学院,哈尔滨市,150086
3 哈尔滨医科大学第一临床医学院神经外科,哈尔滨市,150086
目的研究不同剂量光动力作用后C6胶质瘤细胞内游离钙 [Ca2+ ]i的变化,探讨钙超载在光动力诱导C6胶质瘤细胞坏死和凋亡过程中的作用. 方法常规培养 C6胶质瘤细胞,以不同光动力剂量处理对数生长期的实验组细胞后,应用Fluo- 3/AM为细胞内钙离子荧光指示剂,激光共聚焦显微镜测定各组 C6胶质瘤细胞内游离钙的变化;MTT法检测各组细胞的死亡率. 结果光动力作用后 C6胶质瘤细胞内游离钙明显升高,平均胞内钙离子浓度和细胞死亡率随着光动力剂量增加而增大.结论光动力作用后 C6细胞钙超载在光动力诱导肿瘤细胞坏死和凋亡过程中起重要作用.
光动力治疗法 C6胶质瘤细胞 钙超载 Fluo- 3/AM
