采用单分子荧光成像技术, 通过建立运动性疲劳的细胞模型对中药人参抗运动性疲劳的分子机制进行研究。取新生大鼠骨骼肌细胞, 将其随机分成人参组和对照组。在两组细胞的培养基中分别加入2 mg/mL人参提取物和等量的D-hanks液进行培养。两组细胞分化成肌管后, 将用钙离子染料处理过的细胞置于共聚焦显微镜上检测其荧光强度。待荧光强度稳定时, 分别向两组细胞加1 μmol/L地塞米松溶液,记录并比较两组细胞用地塞米松刺激前后荧光强度的改变幅度。结果发现, 两组细胞胞浆内钙离子的荧光强度均明显增强(P<0.05), 但人参提取物组细胞胞浆内钙离子浓度的增加幅度明显低于对照组(P<0.05)。由此可见, 人参提取物对地塞米松刺激引起的疲劳骨骼肌细胞具有保护作用, 人参消除运动性疲劳的机制可能与其调节骨骼肌细胞胞浆内钙离子浓度有关。

利用蒙特卡洛方法构建了生物组织基于时域的时间分辨荧光光谱的仿真模型, 并将应用该模型获得的模拟结果与生物组织的实验光谱进行了比较。结果表明: 吸收系数与散射系数分别影响光谱的不同区域; 低浓度情况下, 模拟结果与实验光谱符合得较好( x2＜1.2); 高浓度下, 实验光谱强度会被浓度效应削弱, 以致影响其与模拟光谱的吻合程度。该方法为研究生物组织荧光光谱提供了一种新思路。

NF-κB已被证明在肿瘤和炎症过程中起到至关重要的作用。因此, 建立抑制NF-κB信号通路的药物筛选模型至关重要。利用荧光素酶报告基因技术与蛋白印迹技术分别探索TNFα处理浓度及时间对NF-κB报告基因表达和NF-κB抑制亚单位IκBα降解的影响, 进而构建NF-κB信号通路抑制剂药物筛选模型。实验结果表明, 0.01 nmol/L TNFα作用24 h即能刺激HEK293T细胞中NF-κB报告基因较高水平的表达, 且其表达量与TNFα的剂量和处理时间呈正相关性; 0.01 nmol/L TNFα作用5 min即能使Panc-28细胞中IκBα明显降解, 20 min~30 min几乎降解完全, 之后IκBα含量又开始增加。NF-κB阳性抑制剂藤黄酸验证表明NF-κB萤光素酶报告基因检测筛选体系和NF-κB抑制亚单位降解筛选体系两种体系稳定可行。结果证明, 两种模型可以用于NF-κB信号通路抑制剂药物的筛选。

利用以量子点(Quantum dot, QD)作为供体、有机荧光染料作为受体的荧光能量共振转移(Fluorescence resonance energy transfer, FRET)体系检测核酸等大分子是一种非常重要的检测手段。本文构建了一种检测金黄色葡萄球菌种特异性16S rDNA的新方法。此方法以羧基修饰的525 nm量子点与氨基修饰的DNA在EDC的作用下通过脱水连接形成QD-DNA复合物作为荧光能量共振转移体系的供体、有机荧光基团ROX修饰的DNA作为荧光能量共振转移体系的受体组成能与金黄色葡萄球菌种特异性16S rDNA杂交的检测探针。当探针与靶序列发生杂交时, 作为供体的525 nm QD与作为受体的ROX之间的距离被缩短至能有效发生荧光能量共振转移的距离之内。此时, 以不能致ROX发光的波长激发量子点发光, 其荧光强度下降, 而ROX的荧光强度上升。在不存在靶序列的情况下, 不会发生这种荧光强度的变化。QD与ROX荧光强度的变化是实现本检测体系快速、简单的重要保证。

研究了在石英表面上吖啶橙纳米金自组装膜的制备及其荧光特性, 发现所构建的吖啶橙自组装膜具有强的荧光信号。在pH为7.60的KH2PO4-NaOH缓冲溶液中, Cr6+离子能使吖啶橙自组装膜在λ=528 nm处的荧光增强, 增强的强度(△F)与Cr6+的浓度在一定浓度范围内呈线性关系, 该方法的线性范围为0.00～36.00×10-8 μg/mL, 检出限(DL)为2.47×10-11 μg/mL, 将构建的吖啶橙自组装膜测定土壤中的Cr6+,回收率为94.91 %～96.24 %, 相对标准偏差(RSD)为0.31 %～0.70 %。由此可知吖啶橙自组装膜适用于超痕量铬离子的界面荧光测定。实验结果表明该膜具有较好的可逆再生性能, 自组装膜法检测限低、灵敏度高、反应速度快、稳定性好。

利用14.2 MeV的质子和60Co产生的γ射线在200 Gy的剂量下分别对添加了不同浓度红景天苷的pUC19质粒DNA样品进行了辐照, 凝胶电泳分析结果表明, 红景天苷在两种辐照过程中均对DNA具有一定的保护作用, 并且随着浓度的增加保护作用增强。同时还发现质子辐照后DNA样品中出现了线性形态的, 而γ射线辐照后则没有出现, 再次证实质子对DNA的损伤作用强于γ射线, 这应该和质子与物质相互作用复杂以及质子对物质的直接电离作用相关。

用EMS对离体培养的蝴蝶兰类原球茎薄切片进行化学诱变, 研究了不同浓度、不同时间诱变处理对类原球茎薄切片生长、类原球茎再生及再生苗生长的影响, 并对再生苗DNA进行了RAPD检测。结果表明, 诱变剂EMS对类原球茎薄切片生长产生重要影响, 部分薄切片褐化死亡, 再生类原球茎生长受到抑制, 再生苗数量减少, 表现出明显的伤害作用, 这种伤害作用随诱变剂浓度的加大和处理时间的延长而加重。诱变剂EMS使部分再生苗畸变, 叶片皱缩、变厚。并产生2株叶形、叶色突变体。部分再生苗表现出RAPD图谱带型的多态性, 暗示DNA序列发生了一定的变异。EMS适合诱变剂量为浓度0.4 %处理2 d~4 d。

通过Na2CO3胁迫对黄瓜嫁接苗和自根苗耐盐性差异的研究, 揭示黄瓜幼苗的耐盐机制, 为设施黄瓜生产提供理论依据。实验以孝感早瓠瓜为砧木, 津春四号黄瓜为接穗, 采用不同浓度Na2CO3溶液对黄瓜嫁接苗和自根苗进行处理, 研究其对黄瓜幼苗的生理胁迫效应。结果表明: 在0~7 000 mg/L范围内, 随着Na2CO3处理浓度的增加, 黄瓜嫁接苗和自根苗的株高、茎粗、叶面积、地上部鲜重、根鲜重、叶绿素和根系活力均下降, 但嫁接苗受抑制的程度显著低于自根苗; 脯氨酸、丙二醛和根冠比均呈上升趋势, 且这三项指标均表现为嫁接苗显著高于自根苗; 叶片SOD酶活性均呈先上升后下降趋势, 均在Na2CO3处理浓度为1 000 mg/L时达到最大值, 且嫁接苗的活性显著高于自根苗。嫁接苗的耐盐性优于自根苗, Na2CO3胁迫条件下, 嫁接苗和自根苗的生长条件盐浓度以不超过 3 000 mg/L为宜。

通过田间试验, 对玉米自交系掖478和经重离子辐射掖478干种子所获得的突变体I478的主要农艺性状和配合力进行了比较分析, 结果表明: (1)I478植株形态发生明显改变, 主要表现出株高、穗位高显著增加, 气生根颜色发生改变; (2)I478的果穗性状总体变好, 果穗长度、行粒数、穗粒数、穗粒重等性状极显著优于自交系掖478, 但其果穗穗行数显著少于自交系掖478; (3)I478的主要生育时期如抽雄期、开花期、成熟期显著迟于自交系掖478; (4)自交系掖478配制组合的穗行数、穗粗、出籽率的平均值大于突变体I478配制组合的相应性状的平均值, 突变体I478配制组合的单穗重、穗长、行粒数、百粒重、秃顶长度大于自交系掖478配制组合的相应性状的平均值。突变体I478一般配合力好, 组合I478×N172单穗重量极显著高于临奥1号, 单穗重量比临奥1号增加9.6 %, 可继续对该组合进行鉴定。

壳聚糖具有抑菌性与成膜性。将壳聚糖辐照降解得到的一系列不同粘均分子量产物进行涂膜草莓保鲜, 研究涂膜液中壳聚糖粘均分子量、浓度、pH值、有机酸、明胶含量对草莓保鲜效果的影响; 并设计四因素三水平正交试验。实验结果表明: 1 %(w/v)7.0×104 Da壳聚糖、1 %(v/v)醋酸、pH5、添加明胶0.5 %的涂膜配方具有最好的保鲜效果; 在常温(20 ℃、湿度80 %~90 %)下可以延长贮藏期2 d; 低温(3 ℃ ~4 ℃、湿度80 %~90 %)下可以延长贮藏期3 d。

目的: 探讨霍山石斛胶囊(Dendrobium huoshenese capsule, DHC)对高脂血症大鼠的血脂影响及脂质过氧化水平作用。方法: 采用高脂饲料建立实验性高脂血症大鼠模型, 而后进行低、中、高三种剂量的DHC和阳性对照药血脂康实验性治疗, 实验8周后, 取大鼠血清、肝脏, 检测模型大鼠血清总固醇(Total cholesterol, TC)、甘油三酯(Triglyceride, TG)、低密度脂蛋白胆固醇(Low density lipoprotein cholesterol, LDL-C)、高密度脂蛋白胆固醇(High density lipoprotein cholesterol, HDL-C)含量, 并计算动脉粥样硬化指数(Atherosclerosis index, AI); 同时测定血清和肝脏超氧化物歧化酶(Superoxide dismutase, SOD)活性及丙二醛(Malondialdehyde, MDA)含量; 并计算肝系数, 制备大鼠肝脏石蜡切片观察其病理学变化。结果: 与高脂血症模型组相比, DHC中、高剂量组和血脂康组能显著降低高脂血大鼠血清TC、TG、LDL-C, 升高HDL-C, 表现为AI降低; 低剂量的DHC能升高HDL-C, 但在降低血清TC、TG、LDL-C和AI上无统计学差异(P＞0.05); 除DHC低剂量组对血清SOD活性升高作用不显著外(P＞0.05), 其他各浓度给药组均能显著升高血清和肝脏SOD活性, 降低血清和肝脏MDA含量及肝系数(P <0.05 , P <0.01); 同时, DHC各给药组还可不同程度降低高脂血症大鼠肝细胞的脂肪变性程度。结论: 霍山石斛胶囊能调节血脂代谢异常, 增强抗氧化能力, 具有防治脂肪肝和抗动脉粥样硬化作用。

以扁茎黄芪的干燥成熟种子为试验材料, 用0.1 %、0.3 %和0.5 %的秋水仙碱溶液分别浸泡种子24 h、48 h、72 h和96 h来诱导同源四倍体, 并对诱导处理后获得的再生植株进行染色体鉴定, 得出以0.3 %秋水仙碱溶液浸泡72 h为诱导同源四倍体的最佳处理组合。

对大杯香菇辐射选育新株系的各类氨基酸总量进行了遗传主成分分析。结果表明, 变异系数最大的为硫氨基酸总量, 达到13.39 ％; 其次为儿童氨基酸总量, 变异系数为7.00 ％; 其它变异系数较小分别为甜味氨基酸总量、芳香族氨基酸总量、必需氨基酸总量、支链氨基酸总量和鲜味氨基酸总量为5.69 ％、5.64 ％、5.19 ％、5.24 ％和5.06 ％; 在相关性上, 鲜味氨基酸总量与甜味氨基酸总量、支链氨基酸总量、芳香族氨基酸总量、儿童氨基酸总量和必需氨基酸总量是呈极显著和显著的正相关, 甜味氨基酸总量与支链氨基酸总量、儿童氨基酸总量和芳香族氨基酸总量呈极显著和显著的正相关, 硫氨基酸总量与儿童氨基酸总量呈极显著负相关, 与必需氨基酸总量是呈极显著正相关; 支链氨基酸总量与芳香族氨基酸总量、必需氨基酸总量是呈极显著, 与儿童氨基酸总量呈显著正相关; 芳香族氨基酸总量与儿童氨基酸总量和必需氨基酸总量是呈极显著和显著的正相关; 主成分分析结果表明, 前4个特征根在7个特征根中累计贡献率达97.14 ％, 也就是前4个主成分对变异的贡献率达96.07 ％。在各类氨基酸总量指标选择上, 首先对变异大的各类氨基酸总量进行选择是及其重要的。在辐射选育新株系选择时, 应注意选择大杯香菇中硫氨基酸总量高的新株系。

斑马鱼心脏发育模型中, myh6编码是一种促进心室心肌细胞扩张的转录因子。为了进一步研究myh6在心脏发育和心脏疾病发生中的功能, 需要获得斑马鱼myh6蛋白并制备其抗体。从斑马鱼心脏组织中提取总RNA,通过反转录得到心脏组织特异表达基因的cDNA, PCR扩增得到myh6部分编码区序列, 然后将其连接到pGEX-4T载体上获得原核表达。经酶切及测序鉴定后, 转化BL21细菌, 并用IPTG诱导表达融合蛋白, 谷胱甘肽琼脂糖珠亲和纯化, 将纯化的融合蛋白免疫新西兰大白兔制备多克隆抗体, 并用Western blotting检测抗体的特异性。结果显示, 获得了myh6原核表达重组融合蛋白及高效价的特异性兔抗myh6多克隆抗体, 为myh6功能的进一步研究提供了有力的工具。

细胞膜流动性是细胞的重要物理性质, 与细胞功能密切相关。为深入认识细胞膜与细胞功能的关系, 研究癌症机理及寻找预防治疗的方法提供新的视角和实验数据, 采用荧光漂白后恢复技术检测皮肤癌A431细胞和正常HACAT细胞的膜流动性, 同时测定蛋白激酶C的活性及mRNA的表达。通过激光扫描共聚焦显微镜的荧光恢复曲线计算得知A431细胞的荧光恢复率和扩散系数均低于HACAT细胞, 即A431细胞膜流动性低于HACAT细胞; 而蛋白激酶C活性、mRNA表达量却高于正常细胞。以上差异都有统计学意义(P<0.05)。由此推断癌细胞膜流动性与蛋白激酶C相互作用、相互影响, 彼此之间存在密切的关系。

TNC是心脏发育的标志基因, 但该基因在斑马鱼中的表达尚未研究。斑马鱼TNC基因基因的开放阅读框含有5 132 bp, 编码1 710个氨基酸, 采用生物信息学结合PCR的方法获得了斑马鱼TNC基因的片段。将所得的PCR片段插入原核表达载体pGEX-4T-1中, 并将重组质粒(pGEX-4T-1-TNC)转化大肠杆菌BL21; 通过IPTG诱导表达GST-TNC融合蛋白, 通过尿素洗涤沉淀蛋白并切胶回收纯化融合蛋白, 免疫新西兰大白兔制备多克隆抗体。Western blot和免疫组化分析表明, 制备的抗体具有良好的高效价性和特异性。利用该抗体进行斑马鱼胚胎抗体染色分析表明, TNC蛋白在心脏组织中特异表达。

从山羊瘤胃液中提取混合微生物DNA, 经BamHI部分酶切得到50 kb~800 kb的DNA片段后, 将其连接到pCC1 BAC载体上, 转化E.coli EPI 300, 建立山羊瘤胃微生物BAC文库。经RFLP鉴定分析, 该文库12 672个克隆, 平均插入片段为61 kb。该文库的构建为后续新型基因的筛选提供了材料, 为进一步研究山羊瘤胃微生物奠定了基础。

利用黄瓜绿斑驳花叶病毒(Cucumber Green Mottle Mosaic Virus, CGMMV)的特异性引物对来自广西一温室栽培的黄瓜病样进行RT-PCR检测, 结果扩增得到了与预期大小相符的目的片段(650 bp)。序列分析表明, 该目的片段包含有CGMMV完整的CP基因序列、部分运动蛋白基因(MP)及3’端非编码区(3’-UTR)序列, 其中CP基因全长486 bp, 与已报道的CP基因序列同源性为91.2 ％～99.4 %。经系统发育分析, 明确该GX-CS分离物与日本、法国、印度等分离物属于CGMMV同一类群, 并推测该分离物与广西的葫芦(GX-BG)分离物具有相同的起源关系。

FNBP1在真核细胞中广泛表达, 能通过诱导细胞膜管状化、内陷或变形及后续膜曲率依赖性肌动蛋白聚合过程, 参与细胞内吞和运动; 还可参与端粒维持及FasL与溶酶体结合过程的调控。研究发现, 在肝癌细胞7703中, 利用RNA干扰(RNA interference technology, RNAi)技术使内源FNBP1基因表达沉默以后, 7703细胞形态发生重塑, 由上皮样转变为树状分枝的纤维状, 表明FNBP1在细胞形态维持过程中亦具有不可或缺的潜在作用; 通过对已知FNBP1蛋白相互作用情况的分析推断, FNBP1可能是通过对肌动蛋白骨架动态组装过程的分子调控参与7703细胞形态的控制。

以白头翁试管苗叶片为外植体, 以MS为基础培养基, 探讨不同细胞分裂素和生长素对叶片不定芽诱导、愈伤组织的诱导、增殖、再分化的影响。实验结果表明: 细胞分裂素TDZ适合于白头翁叶片培养, 与生长素搭配使用使叶片发生分化; 2,4-D对愈伤组织的诱导能力相对较强。叶片直接诱导不定芽的激素组合为TDZ 0.3 mg/L+NAA 0.1 mg/L; 愈伤组织增殖的激素组合为TDZ 0.2 mg/L+2,4-D 0.2 mg/L, 将愈伤组织转接到TDZ和NAA组合的培养基上时会再分化。

近场扫描光学显微镜(NSOM)对传统的光学分辨极限产生了革命性的突破, 可在超高光学分辨率下无侵入性和无破坏性地对生物样品进行观测。量子点(QDs)具有极好的光学性能, 如荧光寿命长、激发谱宽、生物相容性强、光稳定性好等优点, 适合先进的生物成像。NSOM结合QDs标记的纳米技术被应用在细胞生物学中。通过纳米量级NSOM免疫荧光成像( 50 nm)对特定蛋白分子在细胞表面的动态分布进行可视化研究和数量化分析, 阐明了蛋白分子在不同细胞过程中的作用机制。因此, NSOM/QD基成像系统提供了单个蛋白分子最高分辨率的荧光图像, 为可视化研究蛋白分子机制的提供了一种强有力的工具。

Lefty蛋白是TGFβ大家族的配体, 通过与Nodal以及Nodal的受体结合而抑制Nodal信号转导。本文采用PCR技术扩增出斑马鱼lefty1基因(z-lefty1)的部分编码区, 将其插入到pGEX-4T-1原核表达载体中。所构建的重组质粒(pGEX/z-Lefty1) 转化入BL21大肠杆菌, 通过IPTG诱导表达GST-z-Lefty1融合蛋白。蛋白经尿素洗涤分离后用于免疫新西兰大白兔以制备多克隆抗体。Western blotting检测结果表明获得了高效价的特异性兔抗z-Lefty1多克隆抗体。这为进一步研究斑马鱼心脏发育的分子机制创造了条件。

目的: 用亲和层析法鉴定YlyA与RNA聚合酶(RNAP)的结合性能。方法: 将YlyA分别上样于以Affi-gel 15为亲和介质制备的空白柱、牛血清白蛋白(BSA)柱和RNAP柱; 以GreA和绿色荧光蛋白(GFP)为阳性和阴性对照蛋白分别上样于同一RNAP柱, 洗涤和洗脱缓冲液(pH均为 7.9)的盐离子浓度分别为30 mmol/L和400 mmol/L; 用免疫印迹法对洗涤和洗脱流出液中的YlyA 进行检测。结果: 在空白柱和BSA柱的洗脱收集液中, 没有检测到YlyA, 大量的YlyA出现在了洗涤收集液中; 而在RNAP柱的洗脱收集液中, 检测到了YlyA和GreA, 没有检测到GFP。结论: YlyA与RNAP之间具有特异性结合能力, 为YlyA极有可能是一种转录因子的生物信息学分析结果提供了实验证据。

测定苹果炭疽菌rDNA全序列, 比对苹果炭疽菌和其它炭疽菌ITS序列以及构建系统关系树, 发现苹果炭疽菌与胶孢炭疽菌的ITS序列相似性高达99.8 ％, 并与胶孢炭疽菌聚在一起, 可以明确苹果炭疽菌应属于胶孢炭疽菌。进一步的序列比对发现, 苹果炭疽菌的18S rDNA 3’端比其它胶孢炭疽菌多出一段379 bp的序列, 根据这一特有片段设计引物CgF1与通用引物ITS4配对, 结果仅能从苹果炭疽菌中扩增出1 232 bp的特异性条带。用苹果炭疽菌接种离体苹果, 以接种发病的病组织总DNA为模板, 利用引物CgF1/ITS4进行PCR扩增, 同样可以扩增出1 232 bp的特异性条带, 而健康苹果组织DNA中未能扩增出任何条带, 表明该方法可用于苹果炭疽菌的鉴定和快速检测。

简要回顾表面增强拉曼散射(Surface-enhanced Raman Scattering,SERS)的发展历史, 主要综述近年来SERS物理增强机理及理论计算方面的研究进展, 并对SERS机理理论研究发展作了展望。

所有的肿瘤都源自于细胞基因组DNA序列的异常。在整个生命过程中, 甚至从最初的受精卵开始, 人体细胞的基因组就暴露于各种突变诱变因素和自身的复制错误之中, 这些不利影响可能导致任何细胞的DNA序列渐进的、细微的突变。过去的25年中, 这些突变和基因异常如何调控肿瘤的成长已经越来越多地为人们所认识, 在此基础上, 大量获得肿瘤基因组的完整DNA序列已经成为可能。这些研究将为人类提供肿瘤发生和成长的重要线索。