多焦点多光子显微技术(multifocal multiphoton microscopy, MMM)提高了激发光能的利用率和成像速度, 可以实现样品的三维快速多光子激发荧光显微成像, 并具有对活体样品损伤小, 成像深度大, 图像信噪比高等优点。详细阐述了MMM的实现方法及其研究进展, 包括同时时间和光谱分辨的MMM(simultaneous time-and spectrum-resolved multifocal multiphoton microscopy, STSR-MMM)、基于时间相关单光子计数技术的MMM(multifocal multiphoton microscopy based on time-correlated single photon counting, TCSPC-MMM)、基于随机扫描的MMM (stochastic scanning multifocal multiphoton microscopy, SS-MMM)、基于固定光路系统的变视场扫描的MMM等技术。

滚环扩增技术(RCA)是近年来发展起来的一种新型的核酸扩增技术。该技术是基于连接酶连接、引物延伸、与链置换扩增反应的一种等温核酸扩增方法。在恒温的条件下, 可以产生大量的与环型探针互补的重复序列。与传统的核酸扩增方法相比, 它具有扩增条件简单, 特异性高, 能在恒温条件下进行等特点。滚环扩增技术结合荧光、电化学、电化学发光等检测技术可以实现高灵敏的生物分子检测。这些特点使得滚环扩增技术在生物分子诊断领域具有潜在的应用价值。本文概述了滚环扩增技术的基本原理,详细地介绍了滚环扩增技术在当前生物检测中的应用现状,并对其前景作了展望。

采用5 mW·mm-2He-Ne激光辐照、10.08 kJ·m-2d-1UV-B辐射及二者组合对冬小麦“临优2018”幼苗进行处理, 研究各处理组幼苗根过氧化物酶(POD)、过氧化氢酶(CAT)和超氧化物歧化酶(SOD)活性及同工酶变化。研究结果显示, 增强UV-B辐射能抑制POD、CAT和SOD的活性, 差异显著, 关闭了POD3和SOD1酶谱的基因表达, 激活SOD2酶谱基因的表达, 对CAT酶谱数目没有影响, 但降低了总的POD、CAT和SOD同工酶酶谱活性; He-Ne激光能促进抗氧化酶的活性和同工酶的表达, 使酶谱活性增强; 增强UV-B辐射后再用He-Ne激光处理, 各抗氧化酶的活性明显升高, 差异显著, 并且诱导了POD2酶谱基因的表达, 提高了总的抗氧化酶同工酶酶谱的活性。

通过室内紫外光诱导, 获得了油菜菌核病菌多株抗扑海因突变体。采用菌丝生长速率法, 对诱变得到的抗扑海因菌株的抗药性进行了测定。结果显示, 油菜菌核病菌抗扑海因菌株的EC50值分布范围为0.1159-604.2200 μg/mL, 平均值为117.1363 μg/mL, 突变株UVIPrSS-7、UVIPrSS-8、UVIPrSS-15、UVIPrSS-16和UVIPrSS-18的EC50值均大于160 μg/mL。油菜菌核病菌抗扑海因突变株在含扑海因质量浓度为1 μg/mL时的菌核产生数量绝大多数都大于不含药PSA平板的菌核数量, 而高浓度下菌核几乎不产生。

目的: 探讨弱磁场对提取的骨骼肌肌质网系(SR)Ca2+转运、钙泵(Ca2+-Mg2+-ATPase) 及钙释放通道(RyR)活性的影响, 从分子水平和细胞信号系统的角度来解释生物电磁效应。 方法: 利用动态光谱法检测0.4 mT弱磁场辐照过的SR Ca2+转运、Ca2+-ATPase活性, 还原型辅酶(NADH)的氧化初速率和超氧(O2-·)产率, 以及用同位素标记方法检测［3H］-Ryanodine与RyR的平衡结合度。结果: 弱磁场辐照引起SR的Ca2+摄取功能和Ca2+-ATPase的活性明显下降, Ca2+释放和［3H］-Ryanodine平衡结合度上升, 同时上调了 NADH的氧化初速率和O2-·的产率。 结论: 提示0.4 mT弱磁场辐照30 min对SR Ca2+-ATPase活性有明显抑制, 对RyR有一定的激活效果。

为探讨壳聚糖对仔猪生长性能和抗氧化力的影响, 50头21 d 断奶仔猪被随机分为五组, 预试期用大肠杆菌攻毒, 对照组饲喂基础日粮, 试验组分别在基础日粮中添加50 mg/kg金霉素和200 mg/kg、300 mg/kg、400 mg/kg壳聚糖, 连续饲喂21天。结果表明: 与对照组相比, 1)各试验组日采食量提高(P>0.05), 料重比和腹泻率降低, 日增重平均值分别提高15.8%、9.2%、16.8%和21.1%(P>0.05); 2)壳聚糖组仔猪血清中谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-Px)(P＜0.05)、一氧化氮合酶(NOS)(P>0.05)、过氧化物酶(POD)(P>0.05)、总超氧化物歧化酶(T-SOD)(P＜0.05)活力和总抗氧化能力(T-AOC)(P＜0.01)含量升高, 丙二醛(MDA)(P＜0.01)和一氧化氮(NO)(P>0.05)含量下降。结果说明仔猪日粮中添加壳聚糖能促进生长, 降低腹泻率, 提高抗氧化力。

用60Co-γ射线诱变小麦连麦2号, 对M3代292个穗行进行了主要农艺性状的变异及多元分析。结果表明: 各性状的变异幅度是不同的, 变异系数从大到小依次为: 穗数﹥千粒重﹥穗长﹥小穗数﹥株高﹥行粒重﹥退化小穗数﹥穗粒数﹥穗粒重; 变异率从大到小依次为: 穗数﹥千粒重﹥株高=行粒重﹥穗粒数﹥穗长﹥穗粒重﹥小穗数﹥退化小穗数。穗数、穗长、株高、小穗数、穗粒数、穗粒重与行粒重相关极显著。主成分分析结果表明, 有5个主成分入选, 其累计贡献率为85.49%。当遗传距离为25.38时, 292个穗行分为各具特征的7类, 高产类型应从类群Ⅳ、Ⅴ的27份材料中进行筛选; 矮秆类型应从类Ⅲ的59份材料中选择。

本试验主要采用标准发芽实验与抗氧化指标测定等方法, 研究了贮藏条件和含水量对绿色超人、超甜414两个超甜玉米品种种子活力与抗氧化指标的影响。结果表明, 随着贮藏时间的延长, 甜玉米种子发芽率均逐渐下降, 绿色超人较超甜414种子易发生劣变; 室温贮藏较低温贮藏易发生劣变; 高含水量(12.5%)较低含水量(10.0%)易发生劣变。抗氧化指标种子渗透液电导率、MDA积累量增加。不同的贮藏温度, 萌发种子胚POD活性、CAT活性具有一定的差异。经相关分析表明, 种子发芽率与种子渗透液电导率大小、萌发种子胚CAT活性及种子内MDA含量呈显著负相关。

在实验室条件下, 研究了金龟子绿僵菌(Metarhizium anisopliae)对小麦纹枯病菌(Rhizoctonia cerealis)的拮抗作用及其机理。结果表明, 金龟子绿僵菌与小麦纹枯病菌对峙培养以及在培养基中加入金龟子绿僵菌孢子悬浮液, 对小麦纹枯病菌菌丝生长均有较好的抑制作用。测定了培养不同天数的金龟子绿僵菌Ma55发酵液对小麦纹枯病菌菌丝生长、菌核产生量及菌核萌发率的影响。结果表明, 液体振荡培养25 d的金龟子绿僵菌Ma55发酵液对小麦纹枯病菌的菌丝生长、菌核产生量及菌核萌发具有显著的抑制作用, 且Ma55发酵液中的抑菌活性物质具有较好的热稳定性。在光学显微镜下, 未观察到Ma55对小麦纹枯病菌的重寄生现象, 但发现金龟子绿僵菌与小麦纹枯病菌对峙培养处小麦纹枯病菌营养菌丝的细胞质变稀薄、菌丝部分消解或断裂。上述结果显示, 金龟子绿僵菌对小麦纹枯病菌的拮抗机制主要是营养竞争、空间竞争及抗生作用等。

以五种基因型梨果实为材料, 对石细胞团的大小、分布进行解剖学观察, 并测定石细胞、木质素含量和木质素相关合成酶PAL、POD、PPO活性, 探讨不同基因型梨果实木质素代谢对石细胞含量及口感的影响。结果表明, 不同基因型梨木质素含量高时, 石细胞含量也高, 石细胞团相对较大, 分布较密集, 口感差。各基因型的梨木质素、石细胞含量和大小为: 砀山酥梨>贡梨>丰水梨>库尔勒香梨>苹果梨, 口感为砀山酥梨<贡梨<丰水梨<库尔勒香梨<苹果梨。同一基因型梨, 木质素合成相关酶PAL、PPO、POD活性高的部位, 木质素和石细胞含量也高; PAL、POD、PPO三种酶活性、木质素含量、石细胞含量和石细胞团大小均表现为近果心部位高于中层果肉部位。

测定处于不同生长期的杜仲内生真菌DZJ03胞外多糖含量、发酵液中3种核苷含量, 并对其菌株发酵液抑菌效果进行了研究, 按50 μg/mL的浓度测定了发酵液的石油醚、乙酸乙酯和甲醇等3种提取物对水稻恶苗病菌、棉花枯萎病菌2种植物病原菌以及烟草青枯病菌、金黄色葡萄球菌的抑制活性。结果表明: 内生真菌DZJ03胞外多糖含量最高可达到2.0410 g/L, 其发酵液中所含腺苷、尿苷以及鸟苷的含量分别为1.2647 mg/g 、0.8586 mg/g 、1.0493 mg/g ; 发酵液乙酸乙酯相具有较强的抑菌活性, 其对水稻恶苗病菌的抑制率为71.92%, 抗烟草青枯病菌的抑菌圈直径达到19.21 mm。

odd是一个新发现的心脏特异表达基因。为了进一步研究odd在心脏发育中的功能, 根据已报道的odd基因序列, 以果蝇cDNA文库为模板进行PCR扩增, 将所得的odd部分编码区序列连接到pET-28a载体上构建原核表达载体; 重组子经酶切测序鉴定后, 转化到大肠杆菌BL21菌株, IPTG诱导融合蛋白表达, Ni-IDA凝胶柱亲和纯化, 纯化后的His-odd融合蛋白免疫新西兰大白兔以制备多克隆抗体, Western Blot检测抗体活性。结果表明, 获得了odd原核表达重组融合蛋白以及高效价的、特异性兔抗Odd多克隆抗体, 为后续的odd功能研究奠定了基础。

目的: 探讨糖原磷酸化酶BB对心脏直视手术后心肌损伤的判定价值。方法: 108例行心脏瓣膜置换手术患者, 分别于围术期多个时点取桡动脉血, 测定血清糖原磷酸化酶BB、心肌肌钙蛋白I(cTnI)、肌酸磷酸激酶同工酶(CKMB)的水平, 并检测心肌细胞凋亡程度。结果: 血清糖原磷酸化酶BB于体外循环主动脉开放后最早达峰值, 其峰值与cTnI、CK-MB的峰值及主动脉阻断时间呈正相关。糖原磷酸化酶BB浓度变化与caspase-3阳性面积比变化呈正比。结论: 糖原磷酸化酶BB对于围术期心肌损伤的早期诊断价值优于cTnI、CK-MB, 糖原磷酸化酶BB浓度越高, 心肌损伤越严重; 糖原磷酸化酶BB对预后及心肌保护效果的评价具有重要的价值。

流感病毒表面抗原血凝素(hemagglutinin, HA)是流感核酸疫苗重要的靶抗原, 针对HA的保护性中和抗体主要由HA上的五个抗原表位诱导产生。在本文中, 我们构建了一种以新甲型H1N1流感病毒HA1为骨架的含2个A/PR/8(H1N1)流感病毒HA抗原表位和3个新甲型H1N1流感病毒HA抗原表位的核酸疫苗, 并在BALB/c小鼠致死量病毒攻击模型中检验其免疫保护效果。结果显示, 两次电击免疫后, 该核酸疫苗对新甲型H1N1流感病毒和A/PR/8流感病毒的攻击都能提供完全的保护, 达到了和含相应病毒株全长HA的核酸疫苗相同的效果。因此我们认为, 含流感病毒血凝素不同抗原表位的核酸疫苗可以作为一种新型的具有交叉保护效果的流感疫苗。

目的: 研究kisspeptins在孕早期血浆和胎盘组织中的表达, 拟探讨其来源及其在妊娠中意义。方法: 采用酶联免疫吸附法(ELISA), 检测40例孕早期妇女和35例正常未妊娠妇女血浆kisspeptins的表达水平, 且分析其与hCG的相关性; 采用免疫组织化学方法进行其组织学定位。结果: (1)kisspeptins在妊娠组(982.46±239.41 pmol/L)的表达水平明显高于非妊娠组(3.57±0.37 pmol/L, P<0.001)。(2)在妊娠组, 血浆中kisspeptins水平与hCG表达水平具有明显的正相关(r=0.84,P=0.015)。(3)免疫组织化学研究显示, kisspeptins强烈表达于子宫蜕膜细胞和绒毛组织的合体滋养层细胞, 在细胞滋养层细胞有比较弱的表达, 而在绒毛外滋养层细胞却没有表达。结论: 在妊娠早期kisspeptins表达水平明显的升高, 其可能来源于子宫蜕膜和胎盘组织; 血浆中kisspeptins的表达水平可能作为临床判断妊娠的一个辅助性检测指标。

目的: 探讨紧张和焦虑对手术患者术后认知功能的影响。方法: 100例腹部择期手术病人术前1天用汉密顿焦虑量表(HAMA)、汉密顿抑郁量表(HAMD)、简易智能测试量表(MMSE)、数字广度对病人进行测试。术后7天分别用MMSE、数字广度进行神经心理学测试, 术后MMSE结果低于术前一个标准差则视为术后认知障碍(POCD)。结果: 术前焦虑、抑郁以及同时发生焦虑和抑郁的阳性率分别为30%、50%和10%。女性患者术后7天POCD的发生率为30%, 男性患者术后7天POCD的发生率为20%; 女性患者焦虑得分为7.2±4.0,高于男性患者4.5±3.3, P=0.05女性患者的抑郁得分为6.5±3.6, 明显高于男性患者4.2±3.4(P=0.1),术前焦虑与POCD的相关性不显著, 术前焦虑与MMSE、数字广度的 Pearson’s相关系数分别为-0.50(P=0.2)和-0.20( P=0.1)。术前抑郁与POCD存在显著的相关性, 其中术前抑郁与MMSE的 Pearson’s相关系数为-0.61(P=0.01), 术前抑郁与数字广度的Pearson’s相关系数为-0.72(P=0.03)。结论: 术前抑郁的患者术后容易发生POCD; 相对于男性患者, 女性更容易出现POCD; 而术前焦虑对POCD没有重要的影响。

Bzw2(basic leucine zipper and W2 domains 2)基因是人类心脏发育候选基因, 它由bzip结构域和W2结构域构成。为了研究该基因在心脏发育过程中的作用, 利用生物信息学信息克隆了人类Bzw2基因全长, 将所得的片段插入到原核表达载体pGEXT-4T-1 载体中, 利用BL21菌株表达该重组质粒, 经过IPTG诱导, 得到GST-Bzw2融合蛋白, 蛋白经纯化分离后免疫新西兰大白兔, 并用Western blotting 检测抗体效价。利用抗体进行了心脏, 肌肉, 脑组织表达检测, 结果显示, Bzw2在心脏, 肌肉, 脑组织中高表达。

茶树叶片叶绿体的有效分离纯化是进行茶树叶绿体代谢组学和蛋白质组学研究的基础。本文以茶树鲜叶为材料, 通过叶绿体得率、希尔反应等纯度和完整度指标, 比较了Percoll密度梯度离心法和蔗糖密度梯度离心法对叶绿体分离纯化的效果; 通过蛋白质含量和SDS-PAGE电泳图谱, 比较了涨破法和冻融法对叶绿体蛋白的提取效果。结果发现Percoll密度梯度离心法和冻融法适合茶树完整叶绿体分离及叶绿体蛋白提取。在此基础上本文还对茶树鲜叶及叶绿体蛋白质进行了双向电泳的初步分析比较; 并检测到茶树叶绿体内含有儿茶素合成相关酶PAL、DFR/LAR和ANR。

从拟康氏木霉3.3002基因组中克隆了内切葡聚糖酶EGI 基因, 该基因全长1 566 bp, 由3个外显子2个内含子组成, 编码461个氨基酸。编码蛋白EGI 的N端为22aa组成的信号肽, 其后依次为催化结构域、连接肽和结合结构域。采用重叠PCR法获得无内含子的内切葡聚糖酶基因eg1, 并将其成熟肽编码序列插入酿酒酵母分泌型表达载体pYEα中, 构建成pYEα-Peg1重组质粒, 转化酿酒酵母。重组转化子经β-半乳糖诱导, 检测表达产物的分子大小以及酶活, 结果表明, 转化子在刚果红平板上可产生明显的水解圈; 酶活检测显示该基因能在酿酒酵母中表达有生物活性的EG I并分泌到胞外; SDS-PAGE电泳显示EGI蛋白分子量比预期目的蛋白稍偏大。

目的: 观察新型强脉冲光治疗雀斑的疗效。方法: 采用飞顿辉煌激光360嫩肤系统(以色列飞顿公司), 波长570~950 nm, 光斑面积10 mm×30 mm, 脉宽10、12、15 ms, 能量14～19 J/cm2。治疗40 例雀斑患者, 每三周一次, 共治疗5 次, 末次治疗后评价患者雀斑的疗效。结果: 40 例患者经过治疗后, 18例(45%)基本完全消退, 14 例(35%)明显消退, 8例(20%)好转, 总有效率为100%。所有患者面部治疗区域皮肤质地较以前更光滑、细腻, 无严重不良反应出现。结论: 采用新型强脉冲光治疗雀斑疗效显著、安全, 副作用少。

以一株绿色产色链霉菌xztc06菌株为出发菌株, 依次通过软X射线、低能离子束诱变、紫外线照射和微波诱变手段对菌株进行复合诱变, 得到一株对产气荚膜梭状芽胞杆菌具有较强抑制活性的菌株W26菌株, 且该菌株的遗传特性稳定。对菌株进行抑菌试验发现, 该菌株液体深层发酵菌丝体的丙酮提取物的抑菌活性与出发菌株相比提高了101.42%。

以拉曼被孢霉(Mortierella ramanniana)为出发菌株M5, 通过原生质体制备, 经亚硝酸和激光等进行复合诱变; 进行初筛, 经摇瓶发酵法复筛, 并测定其相关性能指标,获得一生产性能比出发菌株显著提高的突变株MF10; 其干菌体收率为46.8 g/L、油脂产率达34.6 g/L、γ-亚麻酸的产率达12.5 g/L, 分别是出发菌株的1.73倍、2.02倍和2.6倍。通过基因传代实验, 说明突变株的基因可稳定遗传。

为了筛选碱性蛋白酶产生菌并探讨其对蛋白质饲料的发酵效果, 以肉粉厂表层土壤为菌株分离源, 利用脱脂牛奶培养基分离和纯化蛋白酶产生菌, 通过形态特征、生理生化和16S rRNA基因序列分析确定菌株的分类地位, 并采用L9(33)正交设计研究筛选出的优势菌种的接种量(3%、6%和12%)、种子液培养时间(12 h、24 h和48 h)和固态发酵时间(12 h、24 h和48 h)3因素对发酵豆粕和血粉的影响。此碱性蛋白酶产生菌与枯草芽孢杆菌亲缘关系最近, 命名为枯草芽孢杆菌D-2。在最优条件下, 该菌固态发酵豆粕及血粉可显著增加小肽含量至17.06%和12.73%; 其最优条件为接种量6%、种子液培养时间24 h和发酵时间48 h。枯草芽孢杆菌D-2(Bacillus subtilis strain D-2)所产的碱性蛋白酶能高效降解豆粕和血粉中的蛋白, 提高豆粕和血粉的饲用品质。

苹果的粉质化是指苹果果肉发软、汁液减少等一系列物理和生理变化现象, 采用高光谱散射图像技术结合信号稀疏表示分类算法(SRSA)研究了苹果的粉质化分类问题。首先利用平均反射算法(MEAN)提取了600~1 000 nm的高光谱散射图像特征; 引入遗传算法(GA)解决分类样本的不均衡问题, 在此基础上, 把苹果的粉质化分类问题, 转化为一个求解待识别样本对于整体训练样本的稀疏表示问题。仿真结果表明, 基于信号稀疏表示分类算法的苹果粉质化分类精度为79.8%, 高于偏最小二乘判别分析(PLSDA)的74.8%, 为苹果的粉质化分类提供了一种新的有效的方法。

建立小鼠皮肤的II度烫伤的模型, 分别于烫伤前、烫伤后1 min、8 h、1 d、3 d、5 d、7 d、9 d、11 d、13 d、15 d、17 d, 用光学相干层析成像技术(OCT)对烫伤的创面进行动态的监测, 同时对创面进行组织病理学的检测, 对结果进行分析。利用OCT 单次散射模型获得皮肤在烫伤前后光衰减系数的变化情况, 结果显示光衰减系数的值在烫伤后是呈先减小后增大的趋势, 待修复完全后又恢复到烫伤前相近的值。该结果与组织病理学的结果相吻合, 这表明OCT技术可以用于实时诊断烫伤的皮肤。

沼气发酵系统是一个复杂的生态系统, 其污泥微生物超过99%是不可培养的。为了优化沼气池纤维素的转化效率、沼气的产率和开展污泥微生物多样性研究, 本研究采用化学裂解法、溶菌酶裂解法和QIAamp DNA Stool Mini Kit提取了沼气池污泥样品中微生物的总DNA, 对三种方法的DNA得率、纯度、大片段提取效果以及是否含有PCR反应抑制剂进行了研究, 最后对16S rRNA基因V3区的扩增产物进行了PCR变性梯度凝胶电泳(PCR-DGGE)分析。与化学裂解法和QIAamp DNA Stool Mini Kit法相比, 溶菌酶裂解法得到的DNA量大、片段长、片段分布广、PCR扩增效率高; 同时PCR-DGGE图谱显示, 溶菌酶裂解法可更好地展示沼气池污泥中微生物的多样性。该结果为进一步提高沼气池中纤维素的转化效率和沼气生产优势菌种的质和量打下了一定的前期基础。